實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)測(cè)

2023/7/31實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)測(cè)2023/7/32

遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)微生物學(xué)與寄生蟲學(xué)監(jiān)測(cè)飼料質(zhì)量監(jiān)控環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測(cè)2023/7/33實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)測(cè)的意義生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究的四個(gè)基本條件

Animal，Equipment，Information，Reagent，簡(jiǎn)稱AEIR四要素這4個(gè)要素在整個(gè)實(shí)驗(yàn)研究中具有同等重要的地位，不能忽略或偏廢。事實(shí)上，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量往往成為制約性要素，影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量和水平實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)測(cè)是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)的重要內(nèi)容，是確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量的必要手段。2023/7/34實(shí)驗(yàn)工作人員的健康和生命的保證常見的人畜共患?。毫餍行猿鲅獰?、狂犬病、猴B病毒、淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、利什曼原蟲等2023/7/35動(dòng)物生產(chǎn)和繁殖的保證動(dòng)物一旦染上傳染病，則種群難以凈化，一些烈性傳染病如鼠痘、兔病毒性出血癥等可致動(dòng)物全軍覆沒，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。2023/7/36

實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性、規(guī)律性、重復(fù)性的保證2023/7/37實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)測(cè)主要包括以下幾個(gè)方面：遺傳質(zhì)量、微生物與寄生蟲質(zhì)量、飼料質(zhì)量、環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測(cè)。2023/7/38第一節(jié)遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳背景與反應(yīng)特性，是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重要因素。不同遺傳背景與反應(yīng)特性的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，對(duì)同一刺激有時(shí)可引起不同質(zhì)和量的反應(yīng)。為了保存實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品種品系特性。使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用者在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中能得到正確的、可重復(fù)的科學(xué)數(shù)據(jù)，保證生物醫(yī)學(xué)研究的良好效果，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)者在嚴(yán)格遵守品系繁育技術(shù)路線的同時(shí)，還必須努力做好實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳質(zhì)量的嚴(yán)格監(jiān)測(cè)，以防止實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳上的污染和變異。2023/7/39如：BALB/c對(duì)放射線比其他品系更為敏感。C57BL/6腫瘤發(fā)生率低，A系高。BALB/c和C3H小鼠對(duì)鼠傷寒沙門氏菌的敏感性存在顯著差異SHR為自發(fā)性高血壓大鼠，心血管疾病發(fā)生率高

2023/7/310一、群體管理

管理上人為的粗心最易引起遺傳上的混雜，所以對(duì)育種群進(jìn)行恰當(dāng)?shù)墓芾硎潜ＷC遺傳質(zhì)量的最有效方法。每一個(gè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物育種機(jī)構(gòu)都應(yīng)當(dāng)認(rèn)真執(zhí)行良好的育種制度，完善地保持育種記錄，基礎(chǔ)群應(yīng)有系譜記錄。而要做到以上要求，最重要的因素就是要有訓(xùn)練有素、經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員，他們應(yīng)懂得育種體系和方法、記錄方法、動(dòng)物遺傳學(xué)、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)等知識(shí)。2023/7/311二、免疫學(xué)標(biāo)記監(jiān)測(cè)

（一）皮膚移植法這是目前最常用和最靈敏的檢測(cè)亞系內(nèi)或亞系間組織相容性基因差異的方法。在小鼠和大鼠中普遍采用的是尾部或背部皮膚移植法。皮膚移植法靈敏度高。易掌握，經(jīng)濟(jì)。不需昂貴設(shè)備，易對(duì)植皮成活情況進(jìn)行觀察和判斷。由于手術(shù)創(chuàng)傷小，動(dòng)物對(duì)移植創(chuàng)傷的抵抗力強(qiáng)。所以不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果?？蓹z測(cè)出許多H基因。并能有效地測(cè)出新發(fā)生的、造成亞系變異的遺傳混雜和突變。2023/7/312

（二）混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的原理為：異源動(dòng)物或遺傳上有差異個(gè)體的淋巴細(xì)胞混合或培養(yǎng)相當(dāng)時(shí)間后，這些細(xì)胞都開始增大，合成DNA、RNA、蛋白質(zhì)，甚至進(jìn)一步裂解。這是植皮排斥反應(yīng)辨別和擴(kuò)增階段的體內(nèi)對(duì)應(yīng)方法，其結(jié)果可預(yù)測(cè)體內(nèi)植皮一宿主反應(yīng)。此反應(yīng)結(jié)果可在7～9天獲得，定期地從群體中抽取足夠量的動(dòng)物進(jìn)行監(jiān)測(cè)能夠維護(hù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的品質(zhì)。2023/7/313

（三）淋巴組織移植用供體的均質(zhì)淋巴器官，如骨髓、脾、淋巴結(jié)、胸腺或胚胎肝臟制備出單細(xì)胞懸液。然后將適量活細(xì)胞通過靜脈或腹腔注射到受體動(dòng)物體內(nèi)，組織相容性由受體中存活者及脾增大者來確定，也可以用放射學(xué)方法。根據(jù)移植細(xì)胞的存活數(shù)測(cè)定。2023/7/314三、生化標(biāo)記監(jiān)測(cè)

通過多種形式的電泳和電聚集．可檢定生化標(biāo)記即同工酶或蛋白質(zhì)，常用的電泳介質(zhì)有乙酸纖維素膜、淀粉凝膠、聚丙烯酰胺凝膠。每一種標(biāo)記系統(tǒng)都需要將緩沖液、溫度、時(shí)間、電壓和電流調(diào)整到最佳值．并做特異性染色，最后將得到的帶型與公布的生化遺傳圖式進(jìn)行比較。如中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB；T14923-2001公布9種常用近交系大鼠生化位點(diǎn)標(biāo)記基因(表5-2)。2023/7/315表5-2常用近交系大鼠生化位點(diǎn)標(biāo)記基因StrainAkp1Cs2Es1Es3Es4Es6Es8Es9F344/NaaaababaLOU/CaaaabbbaSHRababaabaWKYbbadbaacLEW/MaaadbabcACIbababbba2023/7/316四、骨骼形態(tài)特征監(jiān)測(cè)

常采用“下頜骨分析法”來鑒別和檢測(cè)大小鼠的亞系變異。將年齡、性別、體重相當(dāng)?shù)拇笫蠡蛐∈筇幩篮?，小心剪下頭部，煮沸2～3min以上，加入蛋白水解酶，37℃恒溫保持過夜，剔除殘余肌肉，除去切齒，仔細(xì)分辨出右下頜骨，加以標(biāo)記，在直角坐標(biāo)系上測(cè)量出多個(gè)形態(tài)特征參考點(diǎn)距離。將所有測(cè)量的平均數(shù)作統(tǒng)計(jì)分析，利用判別函數(shù)確定下頜骨形狀。如果測(cè)量值集中，則表明被測(cè)亞系間無(wú)顯著的遺傳變異。2023/7/317五、染色體帶型監(jiān)測(cè)

可以利用染色體分帶技術(shù)，鑒別C帶和Q帶作為染色體標(biāo)記，用來區(qū)分大、小鼠的近交系，在多數(shù)大、小鼠的近交系中，所有中期染色體都存在C帶材料，同源染色體的C帶區(qū)域大小相同；不同的近交系，C帶材料大小不同，是品系特異的，是一種很有價(jià)值的檢測(cè)亞系變異和混雜來源的方法。2023/7/318

六、現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)在遺傳監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用

傳統(tǒng)的遺傳監(jiān)測(cè)方法來源于過去研究者對(duì)哺乳動(dòng)物進(jìn)行遺傳分析時(shí)采用的研究手段。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，分子生物學(xué)技術(shù)有可能取代傳統(tǒng)的遺傳監(jiān)測(cè)方法，其優(yōu)點(diǎn)是多態(tài)性高，位點(diǎn)豐富，實(shí)驗(yàn)技術(shù)成熟，直接涉及生物的遺傳基礎(chǔ)，DNA樣品容易保存和運(yùn)輸?shù)鹊取，F(xiàn)將在遺傳監(jiān)測(cè)中有著廣泛應(yīng)用前景的幾種分子生物學(xué)方法介紹如下：2023/7/3191．限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)(RFLP)技術(shù)當(dāng)動(dòng)物基因組DNA被限制性內(nèi)切酶消化時(shí)，酶能夠識(shí)別雙鏈DNA鏈上的特定核苷酸序列，并在每條DNA鏈上切割產(chǎn)生一個(gè)切口，將雙鏈DNA分子斷開而形成3`-OH和5`-P末端，使DNA裂解為片斷。這些片斷的長(zhǎng)度在動(dòng)物群體中存在變異，造成多態(tài)現(xiàn)象。通過DNA電泳和DNA探針分子雜交技術(shù)，即可觀察到不同帶型。2023/7/320

例如：位于小鼠第2號(hào)染色體補(bǔ)體-5（complement-5）位點(diǎn)(He)的pC5探針，當(dāng)用HindⅢ消化小鼠DNA時(shí)，C3H品系將產(chǎn)生一條2.7kb的帶型，而AKP品系將產(chǎn)生6.0kb和4.6kb兩條帶型。從而可以在He位點(diǎn)上區(qū)別這兩個(gè)品系。目前所報(bào)道的RFLP位點(diǎn)已多達(dá)1098個(gè)，給遺傳學(xué)研究帶來許多便利條件。2023/7/3212．簡(jiǎn)單序列長(zhǎng)度多態(tài)(SSLP)技術(shù)簡(jiǎn)單序列長(zhǎng)度多態(tài)位點(diǎn)是動(dòng)物基因內(nèi)廣泛存在的由l～4個(gè)核苷酸組成的成串的重復(fù)序列，又稱為微衛(wèi)星(microsatellite)。估計(jì)這樣的DNA結(jié)構(gòu)在哺乳動(dòng)物基因組內(nèi)的數(shù)目多達(dá)5萬(wàn)～10萬(wàn)個(gè)。目前在小鼠已發(fā)現(xiàn)有6000個(gè)之多。在每個(gè)特定的位點(diǎn)上，重復(fù)序列的長(zhǎng)度在不同品系中存在著差異。采用夾在這些序列兩端的引物，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)和電泳，就能觀察到這些位點(diǎn)的差異，從而區(qū)分不同的品系。2023/7/322

例如：小鼠第16條染色體的D16Mit4位點(diǎn)，其PCR產(chǎn)物的大?。╞p）在常用近交系中分別如下：C57BL/6-132，DBA/2-123，A/J-147，C3H-123，BALB/c-149，AKR-126，CBA-132。SSLP測(cè)試技術(shù)比RFLP技術(shù)簡(jiǎn)便，多態(tài)性高，需要的DNA樣品較少，引物容易獲得，推廣應(yīng)用前景可觀。2023/7/3233．DNA指紋(fingerprinting)技術(shù)上述兩種DNA技術(shù)是針對(duì)單個(gè)DNA位點(diǎn)進(jìn)行的測(cè)試。DNA指紋技術(shù)一次可同時(shí)測(cè)試多個(gè)位點(diǎn)，所以有一定的優(yōu)勢(shì)。DNA指紋技術(shù)經(jīng)過電泳后可獲得十幾到幾十條帶，而這些帶型在個(gè)體之間或品系之間有差異，如同人類的指紋在每個(gè)人都不同一樣，因此而得名。通常有兩種方法獲得DNA指紋圖。一是用限制性內(nèi)切酶和小衛(wèi)星探針技術(shù)獲得的DNA指紋。二是用較短的隨機(jī)擴(kuò)增引物或小衛(wèi)星引物，通過PCR而獲得的DNA指紋。2023/7/324DNA指紋圖譜有時(shí)在亞系或亞群之間有區(qū)別，所以對(duì)亞系的監(jiān)測(cè)十分有用。但是DNA指紋的結(jié)果因?yàn)殡娪編喽缓帽嬲J(rèn)和比較。因此，也影響其在遺傳監(jiān)測(cè)和其他研究中的應(yīng)用。目前所做的DNA指紋比上述兩種DNA技術(shù)少，但隨著研究的深入和方法的改進(jìn)，將來一定會(huì)有所突破。2023/7/3254．隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)（RAPD）技術(shù)

RAPD技術(shù)是20世紀(jì)90年代發(fā)展起來的一種簡(jiǎn)便、快捷的檢測(cè)基因組DNA多態(tài)性的遺傳標(biāo)記技術(shù)。該項(xiàng)技術(shù)首先將動(dòng)物目的基因組DNA提純、酶切，用含10個(gè)堿基的隨機(jī)引物，對(duì)DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，經(jīng)電泳，便可在多個(gè)位點(diǎn)上得到擴(kuò)增產(chǎn)物。各種DNA多態(tài)分析方法，2023/7/326

如：DNA指紋、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)(RFLP)等，雖然可直接檢測(cè)基因組的遺傳變異，但都不同程度地存在操作復(fù)雜、需要特異性操作、需要事先知道動(dòng)物基因組DNA序列等不足。而RAPD技術(shù)，由于引物可任意改變，有可能找到任何一個(gè)個(gè)體特異的RAPD標(biāo)記，從而為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳檢測(cè)和分析提供一個(gè)十分有效的工具。2023/7/327

七、遺傳性狀監(jiān)測(cè)結(jié)果的分析

當(dāng)被檢查的遺傳性狀與每個(gè)品系的遺傳概貌圖一致時(shí)，同時(shí)遺傳管理資料清晰、可信，可以認(rèn)為有關(guān)品系的繁育生產(chǎn)正在正確地進(jìn)行，該品系的動(dòng)物遺傳質(zhì)量合格；若與遺傳概貌圖不一致時(shí)，可以考慮以下原因：2023/7/3281．遺傳污染(geneticcontamination)

這是最常見的遺傳變異，往往是由于遺傳學(xué)管理不善所致。另外，相同毛色的動(dòng)物品系在同一個(gè)飼養(yǎng)單元中繁育、維持，非常容易產(chǎn)生品系間的錯(cuò)誤交配。這種情況如發(fā)現(xiàn)得早，在被檢查的性狀中至少可以觀察到一個(gè)以上基因標(biāo)記發(fā)生改變，出現(xiàn)雜合型，或與遺傳概貌不符的其他表型；如果發(fā)現(xiàn)得較遲，一些雜合基因可隨機(jī)地固定為單一的純合型，但與原品系的遺傳概貌不一致。出現(xiàn)上述情況均應(yīng)淘汰原品系，更換來源清楚、質(zhì)量合格的動(dòng)物作為新種，重新進(jìn)行品系的繁育。2023/7/3292.遺傳漂變(geneticdrift)

遺傳漂變是指一個(gè)品種或品系動(dòng)物基因型在飼養(yǎng)的過程中可能發(fā)生隨機(jī)的改變。這種改變多由于近交系動(dòng)物部分雜合基因尚未純合時(shí)即進(jìn)行了分系，造成了亞系和支系的形成。監(jiān)測(cè)時(shí)可以看到一個(gè)品系所有的動(dòng)物在1～2個(gè)基因標(biāo)記上與原品系的遺傳概貌不符，但表型一致又均為純合型。這種情況在經(jīng)同系異體移植試驗(yàn)排除了遺傳污染后需按照亞系和支系重新命名。2023/7/3303．遺傳突變(mutation)

遺傳突變?cè)诓溉轭悇?dòng)物中的頻率為10～5。在分析監(jiān)測(cè)結(jié)果時(shí)，如果僅看到一只動(dòng)物單個(gè)基因標(biāo)記出現(xiàn)雜合型，應(yīng)考慮有否發(fā)生遺傳突變。為了證實(shí)此點(diǎn)，往往需要根據(jù)動(dòng)物編號(hào)查詢?cè)撝粍?dòng)物同窩兄妹或雙親的基因標(biāo)記表型。如遺傳突變發(fā)生在親代，則同窩兄妹均應(yīng)為雜合型或分離產(chǎn)生不同的表型。2023/7/331

如果在同窩兄妹或雙親中該基因標(biāo)記的表型與遺傳概貌圖一致，應(yīng)考慮被測(cè)個(gè)體發(fā)生了遺傳突變。在檢查時(shí)如同時(shí)發(fā)現(xiàn)其他基因標(biāo)記的表型與遺傳概貌圖不符，無(wú)論是雜合型還是純合型均應(yīng)考慮發(fā)生了遺傳污染，應(yīng)立即淘汰換種。遺傳突變?nèi)鐭o(wú)特殊保留價(jià)值，在剔除突變的個(gè)體后，整個(gè)品系可以繼續(xù)保存；如有保存價(jià)值，可將突變個(gè)體單獨(dú)培育成同源突變近交系。2023/7/332第二節(jié)微生物學(xué)與寄生蟲學(xué)監(jiān)測(cè)

如何控制微生物和寄生蟲，是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化的主要內(nèi)容之一。一般而言，科研中使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，其微生物和寄生蟲的控制級(jí)別越高，其結(jié)果就越精確、越可靠。2023/7/333一、監(jiān)測(cè)意義1．在人工飼養(yǎng)的開放環(huán)境中，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物被集中飼養(yǎng)，由于活動(dòng)空間相對(duì)狹小，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁殖快、數(shù)量多，同時(shí)受到外界各種病原微生物以及寄生蟲的干擾，極易導(dǎo)致疾病的爆發(fā)與流行。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疾病的爆發(fā)，除造成動(dòng)物死亡外，還會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，引起生物制品的污染，對(duì)人類健康產(chǎn)生危害。因此對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行微生物、病毒與寄生蟲的監(jiān)控，對(duì)保證實(shí)驗(yàn)研究的順利進(jìn)行和工作人員的身體健康具有十分重要的意義。2023/7/334

定期對(duì)各級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物群進(jìn)行微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)監(jiān)測(cè)，以確定各級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是否符合原定級(jí)別，即是否有原級(jí)別不應(yīng)有的病原體的入侵，以便及早采取措施，以免疫情擴(kuò)大而蒙受更大的損失。另一方面，要避免科學(xué)工作者誤用下合適的動(dòng)物，避免人獸共患病病原體感染飼養(yǎng)人員，保障這些人員的健康。2023/7/335

2．對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)設(shè)施的監(jiān)測(cè)，為確保這些設(shè)施能否控制微生物污染提供依據(jù)。

3．對(duì)引進(jìn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行檢疫，避免病原體入侵原有的動(dòng)物群。

4．如動(dòng)物群發(fā)生疾病，為了確證病原，對(duì)患病動(dòng)物進(jìn)行病原學(xué)診斷，積累對(duì)疾病的認(rèn)識(shí)，收集菌株和毒株，進(jìn)一步研究病原，為診斷試劑和疫苗的制備提供菌株和毒株。2023/7/336二、監(jiān)測(cè)方法

（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病毒學(xué)檢測(cè)方法

1．血清學(xué)檢測(cè)適用于各級(jí)各類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的經(jīng)常性檢測(cè)和疫情普查。常用方法有：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、免疫熒光試驗(yàn)(IFA)、免疫酶染色試驗(yàn)(IEA)、血凝試驗(yàn)(HA)、血凝抑制試驗(yàn)(HI)、病毒中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。2023/7/3372．病原學(xué)檢測(cè)適用于動(dòng)物群中有疾病流行，需要檢出病毒或確認(rèn)病毒存在的情況。檢測(cè)方法有：病毒分離與鑒定，病毒顆粒、抗原或核酸的檢出，潛在病毒的激活，抗體產(chǎn)生試驗(yàn)等。例如：采用免疫組化的方法在光鏡下檢查病變組織中的特異性抗原。采用HA或HI方法檢查患病動(dòng)物排泄物或組織懸液中的血凝素抗原；采用電鏡或免疫電鏡技術(shù)檢查組織或排泄物中的病毒顆粒；采用聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)檢查病毒基因組；采用核酸分子雜交技術(shù)或聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢出組織或排泄物中的病毒核酸。2023/7/338

（二）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物細(xì)菌學(xué)檢測(cè)方法最常用的方法是病原菌的分離與培養(yǎng)或進(jìn)行動(dòng)物接種。部分病原菌，如：鼠傷寒沙門菌、鼠棒狀桿菌、布氏桿菌、沙門菌、氣管敗血波氏桿菌等，可采取血清學(xué)方法，但仍需結(jié)合分離培養(yǎng)結(jié)果最后做出診斷。對(duì)于泰澤菌，由于不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，因此宜采用組織壓片、鏡檢的方法進(jìn)行檢查，并結(jié)合病理檢查結(jié)果最后做出診斷。2023/7/339

（三）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物真菌學(xué)檢測(cè)方法目前主要采用沙氏培養(yǎng)基分離培養(yǎng)。皮膚真菌一般在25℃培養(yǎng)，深部真菌在37℃培養(yǎng)。不同的真菌具有一定的菌落特點(diǎn)，鏡下染色檢查可進(jìn)行種屬鑒定，有時(shí)，還需借助于生物化學(xué)反應(yīng)結(jié)果和免疫學(xué)方法進(jìn)行最后診斷。2023/7/340

（四）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法

1．體外寄生蟲肉眼觀察法、透明膠紙粘取法、拔毛取樣法、皮屑刮取法、黑背景檢查法、解剖鏡下通體檢查法等，主要檢查蚤、虱、螨等節(jié)肢動(dòng)物。

2．體內(nèi)寄生蟲主要檢查蠕蟲和原蟲，可用直接涂片法(糞便、血液、臟器、腸內(nèi)容物)、飽和鹽水漂浮法或沉淀法、透明膠紙肛門周圍粘取法、組織或器官剖面壓印法、病變組織切片或壓片法、尿液的離心法(如查鼠膀胱線蟲)等。2023/7/341

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物、寄生蟲檢測(cè)具體操作方法詳見《國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)的檢測(cè)方法（嚙齒類和兔類）》（GB/T14926.1-14926.41-2001）。檢測(cè)方法歸納起來有病原學(xué)檢測(cè)和血清學(xué)檢測(cè)。細(xì)菌、真菌和寄生蟲以病原學(xué)檢測(cè)為主，血清學(xué)檢測(cè)為輔。隨著血清學(xué)方法技術(shù)的提高，有些病原感染的檢測(cè)也逐漸使用血清學(xué)方法，如支原體、泰澤菌、弓形蟲等。病毒的常規(guī)定期檢測(cè)以血清學(xué)為主，疾病診斷以病原學(xué)檢測(cè)為主。2023/7/342三、監(jiān)測(cè)要求

1．選定監(jiān)測(cè)項(xiàng)目任何一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物都有許多致病性微生物、寄生蟲，結(jié)合具體情況選擇合適的檢測(cè)項(xiàng)目，既達(dá)到保證動(dòng)物質(zhì)量的目的，又可節(jié)省人力物力。各國(guó)、各地和單位都有一定的檢測(cè)項(xiàng)目，雖不盡相同，但主要方法類同。我國(guó)經(jīng)過十多年來對(duì)各地實(shí)驗(yàn)動(dòng)物感染病原微生物、寄生蟲情況的調(diào)查，結(jié)合其他國(guó)家的規(guī)定和經(jīng)驗(yàn)，制定了我國(guó)嚙齒類和兔類微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，貓、犬、猴等中型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，衛(wèi)生部醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)亦有初步規(guī)定。2023/7/3432．采樣數(shù)量和頻度檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，要采取合適的動(dòng)物數(shù)量。采樣動(dòng)物數(shù)可根據(jù)動(dòng)物群體的污染程度而有所不同。例如：某種病原體感染率為1％的動(dòng)物群體，如要確實(shí)查出來，最少也得查100只動(dòng)物，但實(shí)際上，如果病原體具有中等程度的傳染力，若能檢查10只左右，大概就可以達(dá)到目的。按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，動(dòng)物數(shù)量超過100只的生產(chǎn)繁殖單元取樣如下：普通級(jí)動(dòng)物不能少于10只；清潔級(jí)動(dòng)物檢測(cè)5～10只；飼養(yǎng)于小隔離罩內(nèi)的無(wú)菌動(dòng)物和無(wú)特定病原體動(dòng)物隨機(jī)抽檢2只；飼養(yǎng)于生產(chǎn)繁殖單元的抽檢5～10只。2023/7/344

除了采樣的數(shù)量，還必須考慮到檢測(cè)的間隔時(shí)間。一般來說，一旦病原體侵入動(dòng)物群體引起感染，初期分離病原體較容易，抗體的檢出率上升。2～3個(gè)月后可因某些個(gè)體抗體水平的降低以及新出生的非感染個(gè)體的增加等原因，抗體檢出率下降，據(jù)此，檢測(cè)間隔時(shí)間以3個(gè)月一次為宜。至少每年檢查2次，選在春、秋季疾病多發(fā)季節(jié)為宜。2023/7/345

采樣時(shí)，宜在動(dòng)物群中不同方位隨機(jī)采取育成動(dòng)物，選擇至少4個(gè)不同的位置采集樣品或采用前哨動(dòng)物放人群內(nèi)，不時(shí)調(diào)換位置，飼養(yǎng)一定時(shí)間后解剖檢查抗體或病原。運(yùn)輸途中保證動(dòng)物的安全和避免污染。引種的動(dòng)物則需有檢疫隔離期，小鼠、大鼠和豚鼠l～7天，兔21天，犬、貓21～28天，猴l～9周。2023/7/346

一般來說，無(wú)論病原學(xué)或血清學(xué)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性者表示該群動(dòng)物有該病原體感染的存在。但作為疾病病原體的確定，還需要進(jìn)一步分析。如果檢測(cè)結(jié)果陰性，一般來說可作為無(wú)此病原體存在的依據(jù)。但檢測(cè)結(jié)果亦受多種因素的影響。如：取材數(shù)量、感染率的高低、取材頻率、取材對(duì)象(動(dòng)物年齡、疾病的早晚期等)、方法學(xué)的選擇(病原學(xué)或血清學(xué)檢測(cè))、方法學(xué)的敏感性等，均與檢測(cè)結(jié)果有密切相關(guān)。2023/7/347第三節(jié)飼料質(zhì)量監(jiān)控

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為生物體離不開營(yíng)養(yǎng)，飼料是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物攝人營(yíng)養(yǎng)素的主要來源。只有良好的營(yíng)養(yǎng)才能使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保持良好的健康狀態(tài)，而健康的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物才能確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠。因此，加強(qiáng)飼料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化管理，是實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化的重要環(huán)節(jié)。2023/7/348

一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料生產(chǎn)加工、儲(chǔ)存與管理

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料是以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)，經(jīng)過嚴(yán)密設(shè)計(jì)、科學(xué)配方、精心加工、生產(chǎn)制造而形成的標(biāo)準(zhǔn)化產(chǎn)品。因此，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料生產(chǎn)必須了解有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)管理法規(guī)條例，全面掌握飼料的生產(chǎn)過程。2023/7/3491．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物配合飼料的生產(chǎn)加工應(yīng)根據(jù)各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的特性和不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，采用不同的飼料加工方法。常用?shí)驗(yàn)動(dòng)物如大鼠、小鼠、豚鼠及兔等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼料應(yīng)制成具有一定硬度的顆粒飼料較為適合其攝食習(xí)性；狗、貓則以膨化飼料為好；而有的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?，常要求制作糊狀、粉狀或液體飼料以滿足研究需要。但是無(wú)論其形狀如何，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料加工生產(chǎn)過程中都應(yīng)注意生產(chǎn)規(guī)格及其產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)。2023/7/3502．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料的儲(chǔ)存包括原料儲(chǔ)存和成品儲(chǔ)存兩部分內(nèi)容。原料儲(chǔ)存：應(yīng)按原料種類、生產(chǎn)廠家、進(jìn)貨日期等分開保管。保管中要注意溫度、濕度變化，防止鳥類、鼠類和昆蟲的污染。盡量做到先進(jìn)先出。成品儲(chǔ)存：要定期清掃存儲(chǔ)罐，產(chǎn)品變更時(shí)徹底清掃存儲(chǔ)罐，成品庫(kù)內(nèi)嚴(yán)格執(zhí)行先進(jìn)先出原則。注意存儲(chǔ)罐的溫、濕度，防止成品飼料霉變，防止野鼠、昆蟲及有毒物質(zhì)自引污染。分類堆放，標(biāo)志清楚，嚴(yán)防與原料混貯，保證標(biāo)準(zhǔn)貨物出庫(kù)登記。2023/7/3513．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼料管理實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料管理是指從飼料原料選擇、生產(chǎn)加工到成品以及生產(chǎn)過程中的蟲害、安全及衛(wèi)生管理的全過程。2023/7/352

二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料的消毒

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼料在收獲、加工、儲(chǔ)存及運(yùn)輸過程中都有污染病菌的可能，為確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，我們要通過適當(dāng)?shù)南痉椒ㄊ蛊溥_(dá)到滅菌的目的。常用飼料消毒方法有干熱、濕熱、輻照及藥物熏蒸等多種，應(yīng)按飼養(yǎng)動(dòng)物的不同要求和飼料種類以及所具備的條件來選擇。2023/7/3531．干熱滅菌法

將飼料在80～100℃的條件下烘烤。此法設(shè)備比較簡(jiǎn)單，但溫度不好掌握，滅菌不夠徹底，而且營(yíng)養(yǎng)損失較大。2023/7/3542．高溫高壓滅菌法高溫高壓滅菌法是指將飼料在121℃，1.0kg/cm3的高溫高壓蒸鍋內(nèi)加熱15min以上，將細(xì)菌全部殺死。用高壓滅菌必須使蒸氣滲透飼料內(nèi)部，操作時(shí)預(yù)先將鍋內(nèi)減壓至-60mmHg以下，然后導(dǎo)人高壓蒸氣，一般115℃30min、12l℃20min、125℃15min。絕大多數(shù)維生素。尤其是維生素C、維生素B1、維生素B6和維生素A等，過熱會(huì)受到破壞，而純化學(xué)性飼料比天然飼料更不穩(wěn)定。2023/7/3553．藥物熏蒸滅菌法熏蒸是利用化學(xué)藥品的氣霧劑對(duì)飼料進(jìn)行消毒。如用環(huán)氧乙烷進(jìn)行滅菌，熏蒸后必須在不低于20℃的自然空氣中將殘余氣體揮發(fā)。實(shí)驗(yàn)證明，即使這樣處理，在飼料中仍然殘存一些對(duì)動(dòng)物代謝有損害的化合物。2023/7/3564.放射線照射滅菌法通常在對(duì)谷物類飼料消毒時(shí)，采用5Mrad劑量的60Co照射對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分損失甚小。γ射線對(duì)維生素B1和維生素B6僅有微小破壞，通常采用的劑量為3～5Mrad。此法在滅菌效果和對(duì)營(yíng)養(yǎng)素的破壞程度方面都優(yōu)于其他方法。但受條件所限，不便推廣。2023/7/357三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料的檢測(cè)

飼料檢測(cè)是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料質(zhì)量管理必不可少的重要手段。飼料質(zhì)量變化不僅直接影響著實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量，而且也間接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。我國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料質(zhì)量應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GBl4924-2001，根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的不同種類、性別、年齡、體重和生理階段，結(jié)合能量與其他各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝實(shí)驗(yàn)和飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，科學(xué)地規(guī)定每只動(dòng)物每天應(yīng)給予的能量及各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的數(shù)量。這種規(guī)定被稱為飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。2023/7/3581．感觀性狀的檢驗(yàn)根據(jù)飼料產(chǎn)品的種類，用手、眼、鼻等器官直接通過色澤、氣味、手感、雜質(zhì)情況等項(xiàng)指標(biāo)對(duì)飼料的新鮮程度、均勻度、含水量等進(jìn)行直觀判斷。

2．營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定按照國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的養(yǎng)分含量及分析方法，對(duì)產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)成分和混合均勻度等進(jìn)行檢測(cè)。飼料含水量應(yīng)經(jīng)常檢測(cè)，其他營(yíng)養(yǎng)成分應(yīng)定期抽檢，對(duì)魚粉、酵母粉等貴重原料的養(yǎng)分含量(如蛋白質(zhì)等)，應(yīng)在每批進(jìn)貨時(shí)抽樣檢測(cè)。具體可參照表5-3～表5-6。2023/7/359第四節(jié)環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測(cè)

嚴(yán)格監(jiān)控實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)環(huán)境和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)環(huán)境，可保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化，可保障實(shí)驗(yàn)研究獲得正確的結(jié)果。合乎標(biāo)準(zhǔn)的環(huán)境，不僅為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)工作者提供適宜的條件，維持實(shí)驗(yàn)動(dòng)物等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，而且是保障工作人員身體健康，使他們不受危害因素傷害的需要。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施在啟用前和使用的過程中，都必須對(duì)環(huán)境的相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。對(duì)內(nèi)環(huán)境的監(jiān)測(cè)如下：2023/7/360一、噪聲測(cè)定1．儀器普通噪聲計(jì)、積分型噪聲計(jì)。

2．測(cè)定方法分靜態(tài)和動(dòng)態(tài)：靜態(tài)為在動(dòng)物飼養(yǎng)前，所有系統(tǒng)正常運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)檢測(cè)；動(dòng)態(tài)為飼養(yǎng)動(dòng)物后，在正常飼養(yǎng)條件下檢測(cè)。通常在潔凈室無(wú)人、無(wú)動(dòng)物，空調(diào)凈化系統(tǒng)正常運(yùn)行的情況下測(cè)定潔凈室的噪聲，測(cè)定點(diǎn)選擇在被測(cè)環(huán)境的中央，如房間大于15m2，可選擇兩個(gè)或兩個(gè)以上的測(cè)定點(diǎn)，距地面1m。2023/7/361二、照度測(cè)定1．儀器便攜式照度計(jì)。

2．測(cè)定方法測(cè)定者需穿著黑色衣服，避免反射光影響測(cè)定結(jié)果。測(cè)定前開啟所有的照明設(shè)備，測(cè)定時(shí)以距墻壁1m以上、離地面85cm處的平面照明度為準(zhǔn)。每隔1.0～2.0m選擇一個(gè)測(cè)量點(diǎn)，每點(diǎn)測(cè)3次，取平均值，單位為lx。2023/7/362三、空氣落下細(xì)菌測(cè)定

空氣落下菌數(shù)測(cè)定應(yīng)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施經(jīng)消毒滅菌，空調(diào)凈化系統(tǒng)正常運(yùn)行48h后進(jìn)行。

1．試劑直徑9cm的血液瓊脂培養(yǎng)基。

2．測(cè)定方法在無(wú)動(dòng)物的狀態(tài)下，每5～10m2放置一個(gè)直徑9cm的血液瓊脂培養(yǎng)基，敞開皿蓋暴露30min，蓋上皿蓋，置于37℃培養(yǎng)48～72h后，計(jì)算培養(yǎng)皿內(nèi)菌落數(shù)。2023/7/363四、空氣潔凈度測(cè)定

應(yīng)在動(dòng)物飼養(yǎng)前，空調(diào)凈化系統(tǒng)運(yùn)行48h后進(jìn)行，檢測(cè)儀器為塵埃粒子計(jì)數(shù)器。亂流潔凈室面積不大于50m2的布置5個(gè)測(cè)點(diǎn)，每增加20～50m2應(yīng)增加3～5個(gè)測(cè)點(diǎn)。測(cè)定方法按使用說明書，每個(gè)測(cè)定點(diǎn)連續(xù)測(cè)定3次，測(cè)定過程中不得調(diào)整測(cè)定次數(shù)。測(cè)定時(shí)100級(jí)凈化室的采樣量每分鐘不少于1L，1000級(jí)以上的凈化室的采樣量每分鐘不小于0.3L。結(jié)果評(píng)定：層流潔凈室取各測(cè)定點(diǎn)最大值；亂流潔凈室取潔凈室各測(cè)點(diǎn)的平均值作為實(shí)測(cè)結(jié)果。2023/7/364五、相鄰潔凈區(qū)靜壓差測(cè)定1．儀器微壓計(jì)，最小刻度為1.0Pa。

2．測(cè)定方法測(cè)定順序一般由低壓到高壓，測(cè)定前將需要測(cè)定壓差的兩個(gè)區(qū)域封閉，關(guān)閉所有的門。測(cè)定時(shí)將測(cè)定用的膠管穿過墻上或門上預(yù)留的孔洞進(jìn)入室內(nèi)(穿膠管的孔洞必須密封，設(shè)置在離墻面不遠(yuǎn)處垂直氣流的方向，且周圍無(wú)阻擋物、氣流干擾小的區(qū)域)。2023/7/365六、氣流方向和速度測(cè)定1．儀器發(fā)煙管、熱球式電風(fēng)速儀或數(shù)字顯示式風(fēng)速儀。

2．測(cè)定方法測(cè)定氣流方向一般用煙霧法，也可用紙條測(cè)定法。測(cè)定氣流速度，將風(fēng)速儀放置在有代表性的飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物籠具的位置進(jìn)行測(cè)定。測(cè)量點(diǎn)設(shè)置可參照溫度測(cè)試點(diǎn)設(shè)置。測(cè)量時(shí)風(fēng)速計(jì)傳感器與風(fēng)向垂直，指針做周期性運(yùn)動(dòng)，要取其平均值。2023/7/366七、換氣次數(shù)測(cè)定1．儀器熱球式電風(fēng)速儀或數(shù)字顯示式風(fēng)速儀。

2．測(cè)定方法測(cè)量換氣次數(shù)，首先必須計(jì)算出換氣量。換氣量由送風(fēng)管道風(fēng)速求得。在一個(gè)以上進(jìn)氣口的房間，要將各進(jìn)氣口合并計(jì)算。2023/7/367

例如，以送風(fēng)口計(jì)算換氣次數(shù)，公式為：換氣量Q(m3/h)＝3600SV

其中：S為有效截面積(m2)，V為平均風(fēng)速(m/s)。換氣次數(shù)R(次/h)＝Q/L

其中：R為換氣次數(shù)(次/h)，Q為換氣量(m3/h)，L為室內(nèi)容積(m3)。2023/7/368八、溫度、濕度測(cè)定

溫、濕度是日常管理中最基本也是最重要的環(huán)境檢測(cè)指標(biāo)之一，溫、濕度的檢測(cè)除了可觀察連接到空調(diào)設(shè)備上的自動(dòng)溫、濕度控制儀，還應(yīng)在每個(gè)房間設(shè)置溫度、濕度計(jì)。常用的溫度計(jì)有棒狀溫度計(jì)、最高最低溫度計(jì)、熱敏電阻溫度計(jì)、數(shù)字型溫度計(jì)等。常用濕度計(jì)有干濕球溫度計(jì)、通風(fēng)干濕機(jī)溫度計(jì)、氯化鋰露點(diǎn)計(jì)及自動(dòng)記錄溫、濕度計(jì)等。2023/7/3691．儀器棒狀溫度計(jì)、熱敏溫度計(jì)、簡(jiǎn)易于濕球溫度計(jì)和自動(dòng)記錄溫度計(jì)等。

2．測(cè)定方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施建成使用之前，應(yīng)對(duì)動(dòng)物室內(nèi)環(huán)境進(jìn)行檢測(cè)。在測(cè)定溫度、濕度時(shí)，空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)應(yīng)連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)，并做多點(diǎn)檢測(cè)，如在外界空氣最冷和最熱時(shí)檢測(cè)最佳。測(cè)量點(diǎn)應(yīng)具有代表性，在距地面10，50，150，200cm高度水平設(shè)定間隔0.5，1m的很多格狀測(cè)點(diǎn)，依次測(cè)量，并將結(jié)果制成不同等高的溫度度數(shù)分布圖。2023/7/370

一般動(dòng)物室常采用“田”字形、9點(diǎn)模式，即在入口、中央、內(nèi)側(cè)相當(dāng)于動(dòng)物飼養(yǎng)高度的上、中、下三層設(shè)置三個(gè)格測(cè)定(50，100，150cm)。以潔凈室面積小于50m2為例，測(cè)定前空調(diào)系統(tǒng)連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)24h以上，測(cè)定時(shí)空調(diào)系統(tǒng)處于運(yùn)轉(zhuǎn)狀態(tài)。2023/7/371

當(dāng)室溫波動(dòng)范圍≥±2℃，室內(nèi)相對(duì)濕度波動(dòng)范圍≥10％時(shí)，最少設(shè)1個(gè)測(cè)定點(diǎn)，每增加50m2最少加1個(gè)測(cè)定點(diǎn)，測(cè)定連續(xù)進(jìn)行8h