微生物的分布測定技術(shù)

微生物的分布測定技術(shù)第1頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月§-1必備知識一、微生物在自然界中的分布

1、土壤中的微生物細(xì)菌、放線菌、真菌、藻類、原生動物、病毒。

2、水中的微生物來自于土壤、空氣、動物排泄物、動植物尸體、工廠和生活污水等。第2頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月地下水地表水流動水靜止水中流水近岸水病原菌:傷寒沙門菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌等。糞便（病人、病畜）

第3頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月

測定大腸埃希菌的數(shù)量作為水被糞便污染標(biāo)志。我國的飲用水的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)是：細(xì)菌總數(shù)每毫升不得超過100個，每1000ml水中不得超過3個大腸菌群數(shù)。第4頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月3、空氣中的微生物來源：飛揚(yáng)的塵土、小水滴、人和動物體表的干燥脫落物、唾液飛沫、咳嗽、痰、噴嚏……種類：細(xì)菌、霉菌的孢子、酵母菌、放線菌非致病性微生物結(jié)核桿菌、白喉桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌、流感病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒……

致病性微生物第5頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月微生物在空氣中存活的時間比較短。但是許多病原微生物則可以存活一段時間。如：結(jié)核桿菌、白喉桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌、炭疽桿菌、流感病毒、SARS病毒…….

通過對空氣中甲型鏈球菌的測定來作為空氣被污染程度測定的指標(biāo)。第6頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月二、微生物在正常人體的分布正常菌群：正常條件下寄居在人體，對人體無害的微生物。

條件致病菌：當(dāng)機(jī)體的正常保衛(wèi)機(jī)能減弱或微生物的寄居部位改變，正常菌群就會引起疾病。

菌群失調(diào)：若長期服用抗生素抑制或殺死其中的某些微生物，導(dǎo)致另一些耐藥的微生物得以大量繁殖，正常菌群各微生物間的平衡被打破。（二重感染）第7頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月三、制藥設(shè)備、原料、操作人員、廠房建筑的要求1、對制藥設(shè)備的要求結(jié)構(gòu)簡單、無角、無縫、易于清洗消毒。2、對原料的要求含微生物少……3、對操作人員的要求4、對包裝的要求減少二次污染5、對廠房建筑的要求第8頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月§-2空氣中微生物分布測定技術(shù)一、原理懸浮在空氣中的微生物落在適宜于它們生長的固體培養(yǎng)基表面，在適宜的溫度下培養(yǎng)一段時間后，每個分散的菌體或孢子就會形成一個肉眼可見的細(xì)胞群體即菌落，通過觀察菌落的特征和計數(shù)，可以大致鑒別空氣中微生物的種類和數(shù)量。第9頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月二、方法濾過法：沉降法：利用微生物的塵粒因重力自然落到培養(yǎng)基的表面來進(jìn)行測定。（10min、100cm2==20L）第10頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月三、步驟1、制備平板2、檢測3、培養(yǎng)4、觀察記錄5、計算100cm2培養(yǎng)基的菌落數(shù)=（每個平皿菌落數(shù)）*100/Лr2第11頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月§-3從土壤中里純化放線菌技術(shù)一、原理抑菌劑→分離二、方法

1、制板

2、制備土壤稀釋液

3、涂布分離

4、培養(yǎng)

5、挑菌

6、純化第12頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月三、注意事項1、制板的溫度2、吸管3、刻度吸管的操作4、稀釋度不同，吸管要不同。5、涂布順序：低→高。6、無菌操作7、標(biāo)記位子8、放置第13頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月§-4水中細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群數(shù)的測定一、原理水涂布于營養(yǎng)瓊脂表面，培養(yǎng)后，菌落計數(shù)。

大腸菌群是指在乳糖培養(yǎng)基中，經(jīng)過24小時的培養(yǎng)，能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣的一群兼性厭氧的革蘭陰性的無芽孢的桿菌。第14頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月二、大腸菌群的檢測方法多管發(fā)酵法：

濾膜法：微孔濾膜濾過，培養(yǎng)。鑒定菌落，計算。第15頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月三、操作方法1、實驗前準(zhǔn)備2、水中細(xì)菌數(shù)的測定熔化培養(yǎng)基自來水采水樣測定地面水

1-7（P110）第16頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月3、大腸菌群數(shù)測定濾膜過濾培養(yǎng)結(jié)果觀察挑取菌落，鏡檢轉(zhuǎn)移培養(yǎng)計算

1L水樣中的大腸菌群數(shù)=濾膜上的大腸菌群落數(shù)*10第17頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月四、注意事項

1、氣泡

2、地面水樣的保存第18頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月§-5皮膚口腔中的微生物分布測定技術(shù)一、原理皮膚直接接種培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)?？谇徊杉坎寂囵B(yǎng)。（葡萄球菌、鏈球菌……）第19頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月二、操作1、皮膚表面細(xì)菌的檢查注意對照2、咽喉部微生物的檢查（1）、涂抹法（2）、咳碟法

第20頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月§-6微生物數(shù)目直接測定技術(shù)一、原理

血細(xì)胞計數(shù)板的使用。

16*25或25*16=400（個）小方格長寬各1mm，深度0.1mm，體積0.1mm3。第21頁，課件共23頁，創(chuàng)作于2023年2月二、操作1、稀釋2、染色3、加樣（量、氣泡）4、顯微計數(shù)5、計算（P115）6、清洗第22頁，課件共23頁