雙環(huán)醇對(duì)藥物性肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究

雙環(huán)醇對(duì)藥物性肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究I雙環(huán)醇對(duì)藥物性肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究藥物性肝損傷是指藥物在使用過程中因藥物本身或其代謝產(chǎn)物導(dǎo)致的肝臟損傷,亦稱藥物性肝病。近年來隨著新藥的不斷上市及臨床藥物聯(lián)合應(yīng)用的需求藥物性肝損傷的發(fā)病率呈逐年增加的趨勢(shì)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道目前臨床約的肝炎和的急性肝衰竭由藥物引起而約占藥物不良反應(yīng)的 - 的發(fā)生、發(fā)展是涉及遺傳、藥物種類等多因素過程,其發(fā)病機(jī)制與氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子釋放、線粒體損傷、肝細(xì)胞凋亡等密切相關(guān)。目前停藥和同時(shí)給予肝保護(hù)藥物是臨床治療 的主要手段。雙環(huán)醇是我所研制的治療慢性肝炎的國(guó)家一類新藥。臨床資料顯示,雙環(huán)醇可明顯改善慢性乙肝病人的臨床癥狀和損傷的肝功能且停藥后反跳率低,長(zhǎng)期應(yīng)用未發(fā)現(xiàn)明顯不良反應(yīng)。以往藥理研究表明,雙環(huán)醇對(duì)多種化學(xué)毒物、酒精等引起的實(shí)驗(yàn)性急慢性肝損傷均具有較好的肝保護(hù)作用,其作用機(jī)制與其清除自由基、保護(hù)線粒體功能、抑制炎癥因子過表達(dá)、抑制損傷因素導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡等密切相關(guān)。近期臨床資料表明,雙環(huán)醇已用于抗精神病藥、抗腫瘤藥和抗結(jié)核藥誘發(fā)的治療明顯改善患者受損的肝功能但雙環(huán)醇對(duì) 保護(hù)作用相關(guān)機(jī)制尚不明了。本研究選用抗結(jié)核藥利福平 、異煙肼和 和阿托伐他汀引起的兩種 模型觀察雙環(huán)醇的保護(hù)作用,并對(duì)相關(guān)機(jī)制進(jìn)行深入探討,為其臨床應(yīng)用提供科學(xué)可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。.雙環(huán)醇對(duì)抗結(jié)核藥引起大鼠肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究大鼠灌胃給予抗結(jié)核藥天可出現(xiàn)明顯肝損傷表現(xiàn)為血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶堿性磷酸酶和總膽紅素水平升高以及肝細(xì)胞濁腫、炎細(xì)胞侵潤(rùn)、肝細(xì)胞壞死等病理變化。雙環(huán)醇給藥可劑量依賴性顯著抑制抗結(jié)核藥引起的血清、、和升高上述肝組織病理變化也得到明顯改善。氧化應(yīng)激是抗結(jié)核藥肝損傷的主要誘因之一。大鼠灌胃給予抗結(jié)核藥30天后肝臟脂質(zhì)氧化終產(chǎn)物丙二醛顯著升高為正常對(duì)照組的倍。而非酶抗氧化物谷胱甘肽含量顯著下降為正常對(duì)照組的。雙環(huán)醇、、可顯著抑制肝臟水平的升高并防止耗竭使其維持在正常水平。此外肝臟抗氧化物酶超氧化物歧化酶 過氧化氫酶 和谷胱甘肽過氧化物酶活性也發(fā)生顯著變化與對(duì)照組相比分別降低 、和 。雙環(huán)醇給藥可顯著抑制 、和 活性的降低增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力。腫瘤壞死因子aas a和白細(xì)胞介素nen是介入肝損傷的重要炎癥因子?？菇Y(jié)核藥肝損傷大鼠肝臟和1a水平明顯升高分別為正常對(duì)照組的 和倍。

雙環(huán)醇給藥可明顯抑制肝臟中 雙環(huán)醇給藥可明顯抑制肝臟中 0和a水平的升高。此外雙環(huán)醇對(duì)肝損傷大鼠血清 a和 的異常升高也有明顯抑制作用線粒體損傷尤其是線粒體呼吸鏈功能異常在肝損傷發(fā)病過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。大鼠灌胃給予抗結(jié)核藥天后肝臟 I和W活性與對(duì)照組相比分別降低和 。雙環(huán)醇給藥 可顯著增加 I和 IV活性使之恢復(fù)到正常水平?？菇Y(jié)核藥肝損傷大鼠肝臟線粒體還出現(xiàn)對(duì)羅丹明的攝取量明顯少于正常對(duì)照組,對(duì)高鈣濃度誘發(fā)腫脹的敏感性顯著降低,提示線粒體發(fā)生了膜滲透性轉(zhuǎn)換。雙環(huán)醇給藥 可顯著改善受損的線粒體功能。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子 是機(jī)體抵御肝臟應(yīng)激損傷的第一道防線大鼠口服抗結(jié)核藥后肝臟 蛋白表達(dá)明顯上調(diào)為正常對(duì)照組動(dòng)物的 倍。雙環(huán)醇給藥 可進(jìn)一步促進(jìn)該蛋白的表達(dá)為正常對(duì)TOC\o"1-5"\h\z照組動(dòng)物的 倍。是體內(nèi)參與 代謝的細(xì)胞色素代謝過程中產(chǎn)生的氧自由基被證實(shí)與 引起大鼠和人肝損傷密切相關(guān)。此外 可被酒精和某些藥物如 誘導(dǎo)。體外肝微粒體溫孵和體內(nèi)動(dòng)力學(xué)研究表明,給予抗結(jié)核藥3雙天后,大鼠肝臟活性和蛋白表達(dá)均明顯增加。同時(shí)給予雙環(huán)醇 后 活性較模型組相比降低 并可一定程度地抑制蛋白表達(dá)水平的異常升高。體內(nèi)動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)表明大鼠灌胃給予抗結(jié)核藥天后血漿 的和 與正常組大鼠相比略微下降雙環(huán)醇 給藥可抑制和 的降低。而雙環(huán)醇給藥對(duì) 和吡嗪酸的血漿藥代動(dòng)力學(xué)未見明顯影響。此外,雙環(huán)醇對(duì)三種抗結(jié)核藥體外代謝影響的研究結(jié)果表明：1）雙環(huán)醇低濃度 對(duì)、 在大鼠肝微粒體中的代謝均未見明顯抑制作用中、高濃度雙環(huán)醇 、 |J 對(duì)和 的體外代謝有不同程度的抑制作用但該濃度明顯高于藥效劑量的 C。雙環(huán)醇2 0 J對(duì) 在大鼠肝胞漿中的體外代謝無明顯影響。雙環(huán)醇 、、對(duì)I 在人肝微粒體中的體外代謝均無明顯影響。上述結(jié)果提示雙環(huán)醇對(duì)I和 的體外代謝影響較小。綜上所述,雙環(huán)醇對(duì)抗結(jié)核藥引起的大鼠肝損傷具有顯著的保護(hù)作用,其肝保護(hù)機(jī)制可能與減輕氧化應(yīng)激、抑制細(xì)胞因子表達(dá)、改善線粒體功能、促進(jìn)的表達(dá)和調(diào)控 相關(guān)。此外雙環(huán)醇在發(fā)揮保肝作用同時(shí)對(duì)抗結(jié)核藥的體外代謝及大鼠體內(nèi)血漿動(dòng)力學(xué)影響較小。2.雙環(huán)醇對(duì)阿托伐他汀引起高脂飲食金黃地鼠肝損傷的保護(hù)作用高脂飲食金黃地鼠每日灌胃給予阿托伐他汀 連續(xù)天可出現(xiàn)明顯肝損傷表現(xiàn)為血清生化指標(biāo)、和升高以及肝組織形態(tài)學(xué)改變肝小葉結(jié)構(gòu)明顯紊亂、肝束排列不齊、肝竇明顯狹窄、彌漫性炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、灶性壞死、大片狀出血壞死、雙環(huán)醇5 0 預(yù)防或治療給藥可劑量依賴性顯著抑制阿托伐他汀引起的血清、、和 升高上述肝組織病理變化也得到明顯改善。阿托伐他汀引起高脂飲食/肝損傷金黃地鼠還可見肝臟 顯著升高為正

常對(duì)照組的 倍而肝臟抗氧化物 含量明顯降低為高脂飲食對(duì)照組的。雙環(huán)醇、 預(yù)防及治療給藥可顯著抑制肝臟 水平的升高并防止耗竭使其維持在正常水平。此外肝臟、和 活性也發(fā)生顯著變化與高脂飲食對(duì)照組相比分別降低 、 和 。雙環(huán)醇 預(yù)防及治療給藥可顯著抑制、和 活性的降低增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力。TOC\o"1-5"\h\z本研究中高脂飲食對(duì)照組動(dòng)物肝臟 、水平及、和 活性與標(biāo)準(zhǔn)飲食對(duì)照組相比未見明顯變化。阿托伐他汀可引起高脂飲食／肝損傷金黃地鼠肝臟0和 a水平明顯升高分別為高脂飲食對(duì)照組的 和倍。雙環(huán)醇、 、 預(yù)防或治療給藥可明顯抑制阿托伐他汀引起的肝臟a和0水平升高并具有一定的劑量關(guān)系。此外雙環(huán)醇對(duì)血清a和0的異常升高也有明顯抑制作用高脂飲食金黃地鼠給予阿托伐他汀天后肝臟 I和活性與高脂飲食對(duì)照組相比分別降低 和36.0。6環(huán)雙環(huán)醇 預(yù)防給藥可顯著增加 I和 IV活性使之恢復(fù)到正常水平。阿托伐他汀引起的高脂飲食／肝損傷金黃地鼠肝臟線粒體還出現(xiàn)對(duì)的攝取量明顯減少對(duì)高鈣誘發(fā)腫脹的敏感性顯著降低提示線粒體發(fā)生了膜滲透性轉(zhuǎn)換。雙環(huán)醇 給藥后可顯著改善受損的線粒體功能。本研究應(yīng)用細(xì)胞建立了阿托伐他汀細(xì)胞損傷模型。應(yīng)用此細(xì)胞模型探討了雙環(huán)醇對(duì)阿托伐他汀引起的細(xì)胞凋亡的影響。應(yīng)用此細(xì)胞模型探討了雙環(huán)醇對(duì)阿托伐他汀引起的細(xì)胞凋亡的影響。存活率下降為對(duì)照組的48.7顯%微鏡下可見細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、細(xì)胞核膨脹等形態(tài)學(xué)改變。雙環(huán)醇、、M可顯著抑制阿托伐他汀引起的細(xì)胞存活率下降并呈一定的量效關(guān)系細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變也明顯減輕。阿托伐他汀 、、可引起細(xì)胞中參與細(xì)胞凋亡最主要的終末剪切酶 活性明顯升高為正常對(duì)照組的倍。雙環(huán)醇0、可顯著抑制阿托伐他汀引起的細(xì)胞 活性的異常升高。細(xì)胞線粒體膜電位檢測(cè)和 雙熒光細(xì)胞核染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明阿托伐他0、處理細(xì)胞后細(xì)胞發(fā)生早期凋亡。雙環(huán)醇、可明顯抑制阿托伐他汀引起 細(xì)胞的凋亡。阿托伐他汀給藥后細(xì)胞漿內(nèi)無活性的 蛋白表達(dá)量顯著升高為正常對(duì)照的倍雙環(huán)醇 可顯著抑制 蛋白的表達(dá)上調(diào)使其表達(dá)水平趨于正常。此外本研究可見 細(xì)胞經(jīng)阿托伐他汀、、處理后 活性下降至正常細(xì)胞的 。雙環(huán)醇、對(duì)阿托伐他汀引起的細(xì)胞活性的下降具有明顯的保護(hù)作用。由此可見雙環(huán)醇對(duì)阿托伐他汀引起的高脂飲食金黃地鼠肝損傷和 細(xì)胞損傷具有良好的保護(hù)作用。雙環(huán)醇的保護(hù)作用機(jī)制與減輕氧化／硝化應(yīng)激、抑制細(xì)胞因子表達(dá)、改善線粒體功能、調(diào)控功能和抑制細(xì)胞凋亡相關(guān)。綜上所述雙環(huán)醇對(duì)抗結(jié)核藥、和 和阿托伐他汀引起的具有明顯的保護(hù)作用。其不僅可抑制血清轉(zhuǎn)氨酶、 和 的升高、還可改善肝臟病理學(xué)損傷其保護(hù)作用的機(jī)制可歸納為：代謝酶調(diào)控：抑制活性并下調(diào)其蛋白的異常表達(dá)。改善氧化應(yīng)激：抑制脂質(zhì)過氧化恢復(fù) 含量改善抗氧化物酶、- 的活性。改善硝化應(yīng)激：抑制升高及 蛋白的過表達(dá)。抑制炎癥細(xì)胞因子表達(dá)：下調(diào)血清和肝臟 a、 0蛋白的過表達(dá)。減輕線粒體損傷：維持線粒體膜完整性和正常膜電位增加 和活性。調(diào)節(jié)凋亡和肝保護(hù)相關(guān)蛋白:提高細(xì)胞活性和促進(jìn)肝臟的表達(dá)。上述研究為進(jìn)一步了解雙環(huán)醇的肝保護(hù)作用特點(diǎn)以及臨床治療提供了有參考價(jià)值的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。II抗新化合物的代謝產(chǎn)物與同工酶的相互作用是基于天然產(chǎn)物化學(xué)修飾的新型非核苷類抗 化合物。藥效學(xué)研究表明其體外抗活性及治療指數(shù)均比天然產(chǎn)物高倍。與已上市藥物奈韋拉平的抗 活性相當(dāng)并具有較好的協(xié)同作用尤其是對(duì)臨床主要耐藥病毒株 對(duì)耐韋拉平等藥物不敏感也具有明顯抑制作用 小于。急性毒性實(shí)驗(yàn)表明該化合物毒性較低。因此有望成為臨床治療艾滋病的新藥。前期藥代研究結(jié)果表明大鼠和人肝微粒體中可檢出個(gè)的I相代謝產(chǎn)物其中氧化脫氯產(chǎn)物為主要的I相代謝產(chǎn)物。大鼠口服后代謝產(chǎn)物可進(jìn)一步經(jīng)尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶催化生成葡萄糖醛酸結(jié)合物但介入 II相代謝的 類型及對(duì) 的影響尚不明了。因此本研究應(yīng)用人肝微粒體和重組人源 同工酶體外溫孵體系選擇 同工酶探針底物和抑制劑鑒定了參與II相代謝的同工酶類型評(píng)價(jià)了對(duì) 活性的體外抑制作用并進(jìn)一步探討了 與底物藥物和 的體外相互作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：1）在人肝微粒體和6個(gè)重組人源并進(jìn)一步探討了 與底物藥物和 的體外相互作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：1）在人肝微粒體和6個(gè)重組人源同工酶中是1參與II相結(jié)合反應(yīng)的主要同工酶和 部分參與。M可顯著抑制人肝微粒 和的活性肝微粒體 和 也有一定抑制作用抑制率分別為和在人源重組酶中和 的抑制作用較人微粒體中在人源重組酶中和 的抑制作用較人微粒體中更為顯著對(duì) 和未見明顯的抑制作用。 以混合性方式抑制人肝微粒體 介導(dǎo)的霉酚酸 II相葡萄糖醛酸化反應(yīng)值為±1