羚羊角粉對(duì)大鼠腦創(chuàng)傷后腦水腫的影響

羚羊角粉對(duì)大鼠腦創(chuàng)傷后腦水腫的影響

腦水腫是腦癱（ti）致死和致死于主要原因之一。近年來的研究表明，水通道蛋白質(zhì)-4（aqp4）與腦水腫密切相關(guān)。1材料和方法1.1動(dòng)物1.2蛋白試劑盒羚羊角粉(產(chǎn)地新疆,由上海雷允上中藥飲片廠生產(chǎn),每瓶600mg),水合氯醛(青島宇龍海藻有限公司生產(chǎn),配制成10%的溶液),伊文氏藍(lán)(EB,北京廣博先鋒生物技術(shù)有限公司,配制成2.5%的溶液),AQP4蛋白試劑盒(購自上海高創(chuàng)科技有限公司)。1.3骨窗開孔被破壞隨機(jī)分為模型組與治療組。兩組按腦創(chuàng)傷前1d,腦創(chuàng)傷后1、3、5、7d分為5個(gè)亞組,每組10只大鼠。SD大鼠以10%水合氯醛腹腔注射麻醉(0.03mL/kg體質(zhì)量)后,大鼠俯臥位固定頭部,用牙科鉆在其前囟后方1.5mm,中線左側(cè)2.5mm處鉆開5mm的骨孔,保持硬腦膜完整,20g砝碼從30cm高出自由墜落,擊中打擊棒,造成大鼠中度腦損傷。石膏粉封閉骨窗,縫合頭皮,放入籠中飼養(yǎng)。治療組大鼠按300mg/kg體質(zhì)量給予羚羊角粉灌胃。1.4樣品的采集和檢測(cè)1.4.1腦eb含量測(cè)定各組動(dòng)物在處死前15min乙醚吸入麻醉后,按25mg/kg體質(zhì)量自后肢股靜脈注射2.5%EB溶液。15min后處死,開顱取腦,將大腦兩半球切開稱重,按0.3mL/kg濕腦組織加甲酰胺,加蓋避光在45℃水浴中提取72h,提取液離心15min(3000r/min),取上清液在HitachiF-2000型熒光分光光度儀上測(cè)定熒光強(qiáng)度,激發(fā)波長(zhǎng)為620nm,發(fā)射波長(zhǎng)為683nm,波寬均為10nm。用倍比稀釋法制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得腦組織EB含量,以μg/g濕腦組織表示。以左半球EB增量=左半球EB量-右半球EB量,來表示左半球即創(chuàng)傷側(cè)BBB破壞的情況。1.4.2腦干質(zhì)量的測(cè)定大鼠按觀察時(shí)間處死,立即取腦并除去小腦,大腦兩半球切開,吸水紙拭去腦組織表面的血跡和水分,分析天平精確稱重,記為濕質(zhì)量(W),置于100~110℃的烤箱(HXG-10型)中烘烤48h至恒重后,稱取干質(zhì)量(D),將腦組織干濕質(zhì)量代入Elliot-Jsaper公式1.4.3大鼠腦aqp4蛋白表達(dá)水平測(cè)定將各個(gè)時(shí)段大鼠,取創(chuàng)傷周圍腦皮層組織以及軟腦膜500mg,緩沖液沖洗干凈,測(cè)定大鼠腦組織后各個(gè)時(shí)段的AQP4蛋白。測(cè)試盒購自上海高創(chuàng)科技有限公司,由本院檢驗(yàn)科按照測(cè)試盒說明協(xié)助測(cè)定。1.4.4病理檢查1.5統(tǒng)計(jì)處理2結(jié)果2.1兩組傷口前后的指標(biāo)比較2.2兩組病理檢查創(chuàng)傷后腦組織水腫明顯,毛細(xì)血管周圍間隙較大,切片透亮度增加,星形膠質(zhì)細(xì)胞有明顯的腫脹和空泡變性。治療組腦水腫明顯減輕。3羚羊角的保護(hù)作用腦水腫是TBI、腦缺血、腦腫瘤和腦膿腫等傷病的共有的復(fù)雜的腦組織病理生理改變,其主要病理學(xué)特征為腦實(shí)質(zhì)內(nèi)水分過多從而使腦組織體積增加筆者采用經(jīng)典的自由落體墜擊傷大鼠模型,符合臨床常見的加速型顱腦創(chuàng)傷,是研究創(chuàng)傷性腦水腫較理想的動(dòng)物模型羚羊角有“定心神,消水腫,去瘀血,生新血,降火下氣”(《本草再新》),“清熱,涼血,解毒”等諸多作用。研究認(rèn)為羚羊角對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有保護(hù)作用;羚羊角外皮浸出液能增加動(dòng)物組織對(duì)缺氧的耐受能力,有鎮(zhèn)痛作用;羚羊角粉用于高血壓腦出血之神昏高熱患者有較好的療效SD大鼠100只,清潔級(jí),購自第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心),體質(zhì)量(250±20)g,雌雄不限。將腦組織浸泡于10%甲醛溶液內(nèi)固定、切片、HE染色,光鏡下觀察腦組織病理改變。應(yīng)用SAS統(tǒng)計(jì)軟件分析。計(jì)量資料以(ue0af±s)表示。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。SD大鼠BBB在創(chuàng)傷后1d即有破壞(P<0.05),傷后3d最為嚴(yán)重(P<0.05),5d后開始BBB修復(fù)。腦水腫在創(chuàng)傷后1d升高至3d達(dá)到最高水平(P<0.05),5d后開始下降,但7d時(shí)與創(chuàng)傷前相比仍有明顯水腫(P<0.05)。AQP4的表達(dá)在傷后1d增加(P<0.05