新型殺菌劑對梨樹主要病害的生物活性及防治流程研究

新型殺菌劑對梨樹主要病害的生物活性及防治流程研究

世界梨單位面積平均產(chǎn)量為14.26噸hm。梨樹病害有多種，以褐斑病、黑星病、白粉病、黑斑病、輪紋病危害較重。近年來，病害發(fā)生種類不斷增多，嚴(yán)重制約梨產(chǎn)量及品質(zhì)，生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)效益出現(xiàn)滑坡目前，生產(chǎn)上防治梨樹病害主要依靠化學(xué)殺菌劑為了解決梨樹主要病害用藥單一、抗藥性、防效差等問題，本研究對不同新型作用機(jī)制及近年來生產(chǎn)上現(xiàn)在應(yīng)用較多的殺菌劑共計(jì)22種，有針對性的進(jìn)行毒力及室內(nèi)防效篩選;為了減少果農(nóng)在農(nóng)田用藥時(shí)的盲目性，將室內(nèi)篩選到的殺菌劑進(jìn)行有效劑量田間藥效驗(yàn)證;此外，開展化學(xué)藥劑及防治技術(shù)調(diào)查，針對主要病害防治的關(guān)鍵時(shí)期選用替代作用機(jī)制殺菌劑制定用藥流程，減少病害造成的損失。以期篩選出較好防治藥劑，新型殺菌劑有望成為將來生產(chǎn)上防治梨樹病害的主要藥劑，為生產(chǎn)上科學(xué)合理用藥流程提供依據(jù)。1材料和方法1.1材料表面1.1.1鴨梨鴨梨所用病原菌為研究室前期分離保存菌株，均采自河北省泊頭市鄔屯子村不同品種梨園發(fā)病株。梨輪紋病菌(PnysalosproapiricolaNose)、梨黑星病菌(Venturianashicola)，采自“鴨梨”品種，樹齡20年。梨黑斑病菌(Alternariaalternata(Fries)Keissler)采自“皇冠梨”品種，樹齡20年。梨褐斑病菌(SeptoriapiricolaDesm)、白粉病菌(Phyllactiniapyri(Cast)Homma)采自“新梨7號”品種，樹齡8年。采集黑星病和白粉病自然發(fā)病的均勻新鮮病葉，4℃保存?zhèn)溆谩?.1.2試劑和水分散顆粒90%雙胍三辛烷基苯磺酸鹽(日本曹達(dá)株式會社);99.5%吩嗪α-2羧酸(德國巴斯特上海植保有限公司);99.4%辛菌胺醋酸鹽(陜西省西安嘉科農(nóng)化有限公司);90%氟吡菌酰胺(拜耳股份公司);98%苯菌酮(巴斯夫歐洲公司);95%噻肟菌酯(德國巴斯特上海植保有限公司);90%硝苯菌酯(美國陶氏益農(nóng)公司);95%醚菌酯(利爾化學(xué)股份有限公司);95%嘧菌酯(利爾化學(xué)股份有限公司);97%啶氧菌酯(河北三農(nóng)農(nóng)用化工有限公司);97.5%吡唑醚菌酯(浙江禾本科技有限公司);95%甲基硫菌靈(陜西億農(nóng)高科藥業(yè)有限公司);95%苯醚甲環(huán)唑(利爾化學(xué)股份有限公司);90%丙硫菌唑(安徽農(nóng)科院植保所);95%氟硅唑(浙江禾本科技有限公司);95%氟菌唑(江蘇禾本生化有限公司);90%腈菌唑(鎮(zhèn)江建蘇農(nóng)藥化工有限公司);94%四氟醚唑(意大利意賽格公司);94.5%氟啶胺(日本石原產(chǎn)業(yè)株式會社);98%氟唑菌酰胺(巴斯夫歐洲公司);97%苯丙烯氟菌唑(瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司);99%氟唑菌酰羥胺(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)種子病理實(shí)驗(yàn)室);40%雙胍三辛烷基苯磺酸鹽可濕性粉劑(日本曹達(dá)株式會社);2%吩嗪α-2羧酸可濕性粉劑(德國巴斯特上海植保有限公司);1.8%辛菌胺醋酸鹽水劑(陜西省蒲城美爾果農(nóng)化有限公司);41.7%氟吡菌酰胺懸浮劑(博仕達(dá)揚(yáng)州科技生物有限公司);42%苯菌酮懸浮劑(巴斯夫歐洲公司);20%噻肟菌酯乳油(德國巴斯特上海植保有限公司);36%硝苯菌酯乳油(美國陶氏益農(nóng)公司);50%醚菌酯水分散粒劑(巴斯夫歐洲公司);250g·L1.1.3psa培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂10g、蒸餾水1L;PSA培養(yǎng)基:馬鈴薯200g、蔗糖20g、瓊脂10g、蒸餾水1L;PDA+L’培養(yǎng)基:馬鈴薯200g，鴨梨150g，葡萄糖20g，瓊脂200g，水楊肟酸100ug·mL1.1.4泰宏醫(yī)療器械有限公司LRH-250A生化培養(yǎng)箱，韶關(guān)市泰宏醫(yī)療器械有限公司;L7紫外分光光度計(jì)，上海儀電分析儀器有限公司;TDZ5-WS離心機(jī)，湖南湘儀公司。1.2方法1.2.1氟啶胺原藥對其他關(guān)鍵溶劑的配制供試原藥分別用適量丙酮溶解，然后配制成質(zhì)量濃度為1000μg·mL對梨黑星病菌毒力的測定除了采用以上供試系列濃度殺菌劑外，還用相同方法配置了以下系列濃度殺菌劑:94.5%氟啶胺原藥分別配成5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625和0.078125μg·mL數(shù)據(jù)處理采用DPSV6.55軟件計(jì)算有效抑制中濃度EC1.2.2離體防效測定梨褐斑病菌、黑斑病、輪紋病孢子懸浮液的制備:將分離純化好的梨褐斑病菌、梨輪紋病菌分別在PDA平板上培養(yǎng)10d，梨黑斑病菌在PSA平板上培養(yǎng)10d，用無菌蒸餾水分別沖洗平板上的孢子，之后離心去雜，加水稀釋調(diào)至孢子懸浮液濃度OD離體葉片法測定供試制劑對褐斑病、黑斑病、輪紋病的防效:雙胍三辛烷基苯磺酸鹽267μg·mL離體葉片法測定供試制劑對黑星病防效:除了測定與褐斑病相同藥劑外，同時(shí)還包括:氟啶胺200μg·mL離體葉片法測定供試制劑對白粉病防效:測定藥劑同黑星病。葉片采集、保濕、藥液噴施方式同黑星病。置于25℃光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3d。調(diào)查發(fā)病面積，供試制劑對白粉病防效計(jì)算方法同褐斑病。數(shù)據(jù)處理采用MicrosoftExcel統(tǒng)計(jì)每個藥劑不同濃度對病斑的防效，用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行處理間差異顯著性分析。1.2.3試驗(yàn)組和用藥方法調(diào)查以下試驗(yàn)藥劑濃度同1.2.2推薦劑量濃度。于2018年在河北省泊頭市務(wù)屯子村梨園進(jìn)行。施藥次數(shù)根據(jù)病害發(fā)生規(guī)律及程度和氣候條件展開。對梨褐斑病防效的測定:梨樹品種為‘新梨7號’，樹齡8年，株行距3m×4m，株高2.0～2.5m，樹勢中庸，褐斑病歷年發(fā)生。零星初現(xiàn)褐斑病第一次用藥。用藥時(shí)間分別為2018年5月23日、6月11日、6月28日，共噴3次，同時(shí)設(shè)置清水對照。每處理4次重復(fù)，隨機(jī)排列，每小區(qū)4株梨樹。采用泰山-18型機(jī)動高壓噴霧器均勻噴施，以葉片、果實(shí)濕潤稍有藥滴下淌為度，每株施藥液1.5L左右。每小區(qū)調(diào)查2株，分東、南、西、北、中方向5點(diǎn)取樣，每株取當(dāng)年生枝條40片葉，按病斑面積占整個葉片面積的百分率分級病情指數(shù)=[∑(病葉數(shù)×相對級數(shù))/(調(diào)查總?cè)~片數(shù)×最高級數(shù))]×100。防效(%)=[(對照病情指數(shù)-處理病情指數(shù))/對照病情指數(shù)]×100。對梨黑星病防效的測定:梨樹品種為‘鴨梨’，樹齡20年，株行距為3m×6m，梨園土壤肥力中等，樹勢及管理水平一致，黑星病歷年發(fā)生。每處理4次重復(fù)，隨機(jī)排列，每小區(qū)4株梨樹。采用泰山-18型機(jī)動高壓噴霧器均勻噴施，至流失為止，每株施藥液5L左右，設(shè)置清水對照。于零星初現(xiàn)梨黑星病8月1日進(jìn)行用藥，噴藥后7、14和30d進(jìn)行病情調(diào)查，調(diào)查方法及結(jié)果計(jì)算方法同上。對白粉病防效的測定:選用另一未用藥地塊進(jìn)行，梨樹品種及長勢同褐斑病選用情況，白粉病歷年發(fā)生。出現(xiàn)梨白粉病進(jìn)行第一次用藥，記錄用藥當(dāng)天白粉病發(fā)病情況。用藥時(shí)間分別為2018年7月3日、8月1日、8月13日，共噴3次，同時(shí)設(shè)置清水對照。每處理4次重復(fù)，小區(qū)隨機(jī)排列，每小區(qū)4株梨樹。施藥方法同褐斑病。最后一次噴藥后7、14和30d進(jìn)行病情調(diào)查，調(diào)查方法及計(jì)算方法同上。數(shù)據(jù)均采用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行處理間差異顯著性分析。1.2.4調(diào)查問卷選用試驗(yàn)于2018年在河北省泊頭市務(wù)屯子村梨園進(jìn)行，選用另一未用藥地塊進(jìn)行，梨樹品種及長勢同褐斑病選用情況，梨樹主要病害普遍發(fā)生。調(diào)查當(dāng)?shù)赜盟幜鞒?，查找用藥存在問題，分析不同時(shí)期應(yīng)選用替代藥劑。在示范園設(shè)置當(dāng)?shù)赜盟幜鞒膛c制定的合理用藥流程對比，農(nóng)民用藥按照農(nóng)藥信息網(wǎng)中常規(guī)推薦劑量，替代殺菌劑使用濃度同1.2.3，兩個流程分別占地400m2結(jié)果與分析2.1篩選出對植物毒力型藥劑14種不同機(jī)制殺菌劑對梨樹主要病害的病原菌毒力值顯示(表1)，褐斑病菌對雙胍三辛烷基苯磺酸鹽、吩嗪α-2羧酸、噻肟菌酯、氟硅唑4種殺菌劑比較敏感，EC離體葉片法測定14種不同機(jī)制殺菌劑對梨樹褐斑病、黑斑病、輪紋病的防效，除噻肟菌酯對褐斑病防效為84.94%、苯醚甲環(huán)唑?qū)诎卟》佬?9.01%外，其他藥劑對三種病害防效均在85%以上(表2)。2.2苯并咪唑類添加劑不同機(jī)制殺菌劑對梨黑星病菌的毒力，除4種三唑類殺菌劑:苯醚甲環(huán)唑、氟菌唑、腈菌唑、四氟醚唑、1種苯并咪唑類殺菌劑:甲基硫菌靈外，其余17種殺菌劑對梨黑星病菌的毒力EC離體葉片法測定發(fā)現(xiàn)雙胍三辛烷基苯磺酸鹽267μg·mL2.3選擇對梨粉菌的高毒性藥物離體葉片法測定發(fā)現(xiàn)噻肟菌酯200μg·mL2.4明確敏感藥物對梨褐斑病的農(nóng)村療效不同殺菌劑對梨褐斑病速效性及持效期不同(表6)，末次用藥7d后除氟吡菌酰胺50μg·mL2.5明確測定了敏感藥物對梨赤霉病和白鼠尾疾病的農(nóng)村療效不同殺菌劑對梨樹黑星病和白粉病速效性與持效期表現(xiàn)不同(表7)，雙胍三辛烷基苯磺酸鹽267μg·mL氟吡菌酰胺懸浮劑50μg·mL2.6根據(jù)不同的藥物相互作用機(jī)制和疾病發(fā)生的時(shí)期，制定梨園試劑的使用流程田間調(diào)查發(fā)現(xiàn)，整個生育期共使用三唑類殺菌劑7次，使用次數(shù)過多，苯醚甲環(huán)唑推薦劑量33.33μg·mL3篩選新型抗菌劑合理選用梨樹主要病害替代殺菌劑及用藥流程的制定，需要根據(jù)毒力、防效、持效期等篩選出對其病害有效的不同作用機(jī)制殺菌劑，同時(shí)又要調(diào)查了解病害的發(fā)生規(guī)律，綜合不同作用機(jī)制殺菌劑的有效性及病害發(fā)生規(guī)律的對靶關(guān)系制定用藥流程，指導(dǎo)生產(chǎn)應(yīng)用。為尋求高效、低毒、安全、經(jīng)濟(jì)的新型作用機(jī)制殺菌劑，本研究引進(jìn)22種殺菌劑，通過藥劑毒力及室內(nèi)、田間的防效篩選出新型對靶殺菌劑。有關(guān)梨樹主要病害的防治報(bào)道諸多，目前生產(chǎn)上防治褐斑病選用的殺菌劑主要有多菌靈，甲基