生乳本底在食品中的應用

生乳本底在食品中的應用

1亞硝酸鹽檢測方法生乳液含有蛋白質、脂肪、乳糖、各種維生素和礦物質等人體所需的物質。目前牛奶已成為日常不可缺少的必需品之一。因此,牛奶的質量直接影響到人們的身體健康。生鮮牛乳中亞硝酸鹽主要來自于飼料及飲水,亞硝酸鹽在細菌的作用下,可轉變成硝酸胺類,人體攝入較多的亞硝酸鹽會出現(xiàn)嘔吐、腹瀉、腹痛等癥狀目前在生乳亞硝酸鹽檢測中,我國均采用GB-5009.33-2016《食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定》本研究采用GB-5009.33-2016《食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定》中第二法分光度法檢測曲線,針對不同的本底稀釋倍數(shù),降低生乳本底對回收率檢測的干擾,提升回收率,從而符合試劑檢測要求,為相關檢測提供參考依據(jù)。2材料和方法2.1分光光度計、水機、儀器AL-204電子天平(最大稱量值210g,分度值0.0001g,英國梅特勒-托利多公司);7200分光光度計(波長范圍325～1000nm,波長精度±2.0nm,上海尤尼柯公司);Elix10純水機(法國Millipore公司)。亞鐵氰化鉀、乙酸鋅、鹽酸、冰乙酸、硼酸鈉、對氨基苯磺酸、鹽酸萘乙二胺(分析純,天津市福晨化學試劑廠);水為符合GB/T6682-2008規(guī)定三級水。2.2實驗方法2.2.1以乙酸鈉為原料的溶液亞鐵氰化鉀溶液(106g/L):稱取106.0g亞鐵氰化鉀,用水溶解,幵稀釋至1000mL。乙酸鋅溶液(220g/L):稱取220.0g乙酸鋅,先加30mL冰乙酸溶解,用水稀釋至1000mL。飽和硼砂溶液(50g/L):稱取5.0g硼酸鈉,溶于100mL熱水中,冷卻后備用。對氨基苯磺酸溶液(4g/L):稱取0.4g對氨基苯磺酸,溶于100mL20%鹽酸中,混勻,置棕色瓶中,避光保存。鹽酸萘乙二胺溶液(2g/L):稱取0.2g鹽酸萘乙二胺,溶于100mL水中,混勻,置于棕色瓶中,避光保存。2.2.2樣品中亞硝酸鹽的提取試樣制備提取:稱取稀釋后90g樣品,置于250mL具塞錐形瓶中,加12.5mL飽和硼砂溶液,加入70℃左右的水約60mL,混勻,于沸水浴中加熱15min,取出置冷水浴中冷卻,幵放置至室溫。定量轉移上述提取液至200mL容量瓶中,加入5mL106g/L亞鐵氰化鉀溶液,搖勻,再加入5mL220g/L的乙酸鋅溶液,以沉淀蛋白質,加水至刻度,搖勻,放置30min,除去上層脂肪,上清液用濾紙過濾,濾液備用。吸取40mL上述濾液于50mL帶塞比色管中,分別加入2mL4g/L對氨基苯磺酸溶液,混勻,靜置3～5min后各加入1mL2g/L的鹽酸萘乙二胺溶液,加水至刻度,混勻,靜置15min,用1cm比色皿,于波長538nm處測吸光度,同時做試劑空白。2.2.3亞硝酸鈉標準使用液吸取40.0mL上述濾液于50mL帶塞比色管中,另吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50mL亞硝酸鈉標準使用液(相當于0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、7.5、10.0、12.5μg亞硝酸鈉),分別置于50mL帶塞比色管中。于標準管與試樣管中分別加入2mL4g/L對氨基苯磺酸溶液,混勻,靜置3～5min后各加入1mL2g/L鹽酸萘乙二胺溶液,加水至刻度,混勻,靜置15min,用1cm比色杯,以零管調節(jié)零點,于波長538nm處測吸光度,繪制標準曲線比較,同時做試劑空白2.2.4水處理生乳中的超純水的稀釋(1)生乳本底的稀釋步驟生乳5倍稀釋:吸取100mL的生乳于500mL的容量瓶中,用超純水稀釋定溶。生乳10倍稀釋:吸取50mL的生乳于500mL的容量瓶中,用超純水稀釋定溶。(2)加標樣配制過程0.06mg/kg加標(1倍檢出限):吸取1.2mL亞硝酸溶液(10μg/mL)用本底樣品定容至200mL;0.12mg/kg加標(2倍檢出限):吸取2.4mL亞硝酸溶液(10μg/mL)用本底樣品定容至200mL;0.40mg/kg加標(限量限):吸取8mL亞硝酸溶液(10μg/mL)用本底樣品定容至200mL。2.2.5亞硝酸鹽與硝酸鹽污染限檢出限:0.06mg/kg要求來源于GB5009.33-2016《食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定》限量限:0.40mg/kg要求來源于GB2762-2017《食品安全國家標準食品中污染物限量》3結果與分析3.1吸光度值的繪制以標準溶液濃度(X)為橫坐標,以吸光度值(Y)為縱坐標,繪制標準(見圖1),相關系數(shù)r2=0.9992,線性關系良好。3.2出限、限限采用生乳本底稀釋倍數(shù)(未稀釋、5倍稀釋、10倍稀釋)參與加標驗證,共計驗證3個加標點,分別為檢出限0.06mg/kg、2倍檢出限0.12mg/kg、限量值0.40mg/kg,每個驗證點分別檢測4組數(shù)據(jù),共計驗證數(shù)據(jù)36組。未稀釋驗證12組數(shù)據(jù),1組符合要求,符合率為0.83%,5倍稀釋驗證12組數(shù)據(jù),7組符合要求,符合率為58.33%,10倍稀釋驗證12組數(shù)據(jù),12組符合要求,符合率為100%。結果見表1。3.3檢測結果的重復性利用本底生乳進行樣品加標,同時使用10倍稀釋生乳作本底進行加標實驗,對每個樣品使用新方法各進行4次重復性檢測,以考察供加標樣品檢測結果的重復性。結果表明,試樣在本底10倍稀釋后進行加標驗證,最大相對標準偏差為9.118%,結果表明重復性良好,結果見表2。3.4種方法精密度結果對比選取不同濃度梯度的實際樣品使用國標方法和新方法進行結果對比,共進行了6組樣品的檢測,其中1組為本底樣品檢測,2種方法結果均為未檢出,其余5組數(shù)據(jù)結果,根據(jù)精密度分析結果進行相關性檢測(此次使用T檢驗)。利用Minitab統(tǒng)計分析工具進行配對T檢驗分析,結果見表3。本檢驗方法的檢測結果與國標檢測結果一致,經T檢驗得出P值為0.10,結果無顯著性差異。4加標回收率驗證實驗在使用GB5009.33-2016《食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定》第二法分光光度計法檢測生乳過程中,在檢出限、2倍檢出限和0.4mg/kg(限量限)附近加標回收率。由于生乳本底自身影響,導致回收率不穩(wěn)定不易達到要求,采用對生乳本底稀釋后進行檢測通過實驗室數(shù)據(jù)可以看出在對生乳10倍稀釋時,加標回收率符合率較高,可滿足GB/T27404-2008《實驗室質量控制規(guī)范食品理化檢測》中附錄F中被測組分含量<0.1mg/kg(回收率范圍60%～120%),被測組分含量0.1～1.0mg/kg(回收率范圍80