微生物的實驗室培養(yǎng)詳解課件

專題2:微生物的培養(yǎng)與應用課題1微生物的實驗室培養(yǎng)專題2:微生物的培養(yǎng)與應用課題1微生物的實驗室培養(yǎng)微生物包括：細菌、藍藻、放線菌、支原體、衣原體原核生物界真菌

原生生物病毒沒有細胞結構的生物真核生物有細胞結構的生物微生物包括：細菌、藍藻、原核生物界真菌原生生物病毒沒有細胞菌落：不同的細菌的菌落特征不同菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體。菌落：不同的細菌的菌落特征不同一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子微生物的實驗室培養(yǎng)詳解ppt課件培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿按成分分按功能分按物理狀態(tài)分培養(yǎng)基類型合成培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基分類：

（一）培養(yǎng)基：人們按照微生物對營養(yǎng)物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質。按成分分培養(yǎng)基類型合成培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基分類：（一選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基:

分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:

分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基:

分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基:

分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基:

分離導入了目的基因的受體細胞選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基:根據(jù)微生物的代謝特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品配制而成，用以鑒別不同種類的微生物。例如，在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍，可以用來鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細菌：如果有大腸桿菌，其代謝產物就與伊紅和美藍結合，使菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤。鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品配制不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、無機鹽等營養(yǎng)物質，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質,例如:生長因子(即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、無機鹽等營養(yǎng)物1、獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是什么？2、避免雜菌污染的方法主要包括哪四個方面3、什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？（二）無菌技術1、獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是什么？2、避免雜菌污染的方法主要消毒與滅菌消毒：指使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。滅菌：指使用強烈的理化因素殺死物體內外所有微生物，包括芽孢和孢子。滅菌與消毒技術是微生物有關工作中最普通也是最重要的技術。消毒與滅菌消毒：指使用較為溫和的物理或化學方法滅菌與消毒技術消毒的方法：1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化學藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線或化學藥物消毒消毒的方法：1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min滅菌的方法：1、灼燒滅菌2、干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。3、高壓蒸汽滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.滅菌的方法：1、灼燒滅菌1.無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？答：無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。旁欄思考1.無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。旁欄思考2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選實驗操作

本實驗用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基進行大腸桿菌的純化培養(yǎng)，可分為制備培養(yǎng)基和純化大腸桿菌兩個階段進行。實驗操作本實驗用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基進行大腸桿菌的純2.1微生物的實驗室培養(yǎng).flv2.1微生物的實驗室培養(yǎng).flv微生物的實驗室培養(yǎng)詳解ppt課件1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？問題討論

答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？

答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？

答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，將平板倒置，既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染，又可避免培養(yǎng)基中的水分過快地揮發(fā)。

答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如純化大腸桿菌接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法純化大腸桿菌接種方法有：

平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面.

在數(shù)次劃線后,可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體,這就是菌落.平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)微生物的實驗室培養(yǎng)詳解ppt課件微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)問題討論

1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。問題討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼

2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。

3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃微生物的實驗室培養(yǎng)詳解ppt課件微生物的實驗室培養(yǎng)詳解ppt課件問題討論

涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應如何進行無菌操作？

應從操作的各個細節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。問題討論涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結合平固體培養(yǎng)基：菌落固體培養(yǎng)基：菌落菌種的保存1、臨時保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保存。

2、長期保存：甘油冷凍管藏法菌種的保存1、臨時保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長微生物的實驗室培養(yǎng)詳解ppt課件課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)課題2一、課題背景1、尿素的利用

尿素是一種重要的農業(yè)氮肥。尿素不能直接被農作物吸收。土壤中的細菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細菌利用尿素的原因土壤中的細菌分解尿素是因為它們能合成脲酶CO(NH2)脲酶+CO2NH3+H2O一、課題背景1、尿素的利用尿素是一種重要的農業(yè)氮肥。4、課題目的①從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌②統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌4、課題目的①從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌②統(tǒng)計每克土壤一.研究思路㈠.篩選菌株㈡.統(tǒng)計菌落數(shù)目㈢.設置對照一.研究思路㈠.篩選菌株㈡.統(tǒng)計菌落數(shù)目㈢.設置對照1、實例：啟示：尋找目的菌種時要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應的環(huán)境中去尋找。原因：因為熱泉溫度70～800C，淘汰了絕大多數(shù)微生物只有Taq細菌被篩選出來。DNA多聚酶鏈式反應是一種在體外將少量DNA大量復制的技術，此項技術要求使用耐高溫（930C）的DNA聚合酶。㈠.篩選菌株1、實例：啟示：尋找目的菌種時要根據(jù)它對生存環(huán)境的原因2、實驗室中微生物的篩選原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時抑制或阻止其他微生物生長。什么是選擇性培養(yǎng)基？2、實驗室中微生物的篩選原理：人為提供有利于目的菌株生長的條15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)所需培養(yǎng)基：①從物理性質看此培養(yǎng)基屬于哪類？固體培養(yǎng)基15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4②在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。5、培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理②在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素6、怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

是分離尿素細菌判斷該培養(yǎng)基有無選擇性實驗組對照組培養(yǎng)基類型是否接種

目的

結果只生長尿素細菌生長多種微生物是6、怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？以尿素為牛肉膏

是分離判斷6、怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

是分離尿素細菌判斷該培養(yǎng)基有無選擇性實驗組對照組培養(yǎng)基類型是否接種

目的

結果只生長尿素細菌生長多種微生物是6、怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？以尿素為牛肉膏

是分離判斷1、顯微鏡直接計數(shù)：利用血球計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。㈡.統(tǒng)計菌落數(shù)目：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對運動細菌的計數(shù)；需要相對高的細菌濃度；個體小的細菌在顯微鏡下難以觀察；缺點1、顯微鏡直接計數(shù)：利用血球計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積里2.間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）⑴原理：在稀釋度足夠高時，微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個菌落是由一個單細胞繁殖而成的，即一個菌落代表原先的一個單細胞。⑵常用方法：稀釋涂布平板法。每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。2.間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×注意事項①為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在30——300的平板上進行計數(shù)。②為使結果接近真實值可將同一稀釋度加到三個或三個以上的平皿中，經(jīng)涂布，培養(yǎng)計算出菌落平均數(shù)。③統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低。注意事項設置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度。㈢.設置對照：設置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，實例：在做分解尿素的細菌的篩選與統(tǒng)計菌落數(shù)目的實驗時，A同學從對應的106

倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約150個菌落，但是其他同學在同樣的稀釋度下只選擇出大約50個菌落。分析其原因。原因：⑴土樣不同，⑵培養(yǎng)基污染或操作失誤

(或者是混入了其他的含氮物質)實例：在做分解尿素的細菌的篩選與統(tǒng)計菌原因：⑴土樣不同，小結：通過這個事例可以看出，實驗結果要有說服力，對照的設置是必不可少的。方案一：由其他同學用與A同學相同土樣進行實驗方案二：將A同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。結果預測：如果結果與A同學一致，則證明A無誤；如果結果不同，則證明A同學存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。小結：通過這個事例可以看出，實驗結果要有說服力，對照的設置是二.實驗的具體操作

㈠.土壤取樣

從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中?！羧⊥翗佑玫男¤F鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。㈡.制備培養(yǎng)基：制備以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。二.實驗的具體操作◆應在火焰旁稱取土壤10g?！粼谙♂屚寥廊芤旱倪^程中，每一步都要在火焰旁進行[三]樣品的稀釋◆應在火焰旁稱取土壤10g。[三]樣品的稀釋㈣.取樣涂布◆實驗時要對培養(yǎng)皿作好標記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時間、稀釋度、培養(yǎng)物等。㈣.取樣涂布◆實驗時要對培養(yǎng)皿作好標記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)㈣.取樣涂布◆分離不同的微生物采用不同的稀釋度稀釋倍數(shù)目的細菌104、105、106保證獲得菌落數(shù)在30～300之間、適于計數(shù)的平板放線菌103、104、105真菌102、103、104原因：不同微生物在土壤中含量不同㈣.取樣涂布◆分離不同的微生物采用不同的稀釋度稀釋倍數(shù)目的細㈤.微生物的培養(yǎng)與觀察思考：要將哪些培養(yǎng)皿進行培養(yǎng)？㈤.微生物的培養(yǎng)與觀察思考：要將哪些培養(yǎng)皿進行培養(yǎng)？㈤.微生物的培養(yǎng)與觀察在菌落計數(shù)時，每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結果，以防止因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數(shù)目。

培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細菌：30～37℃培養(yǎng)1～2d放線菌：25～28℃培養(yǎng)5～7d霉菌：25～28℃的溫度下培養(yǎng)3～4d。㈤.微生物的培養(yǎng)與觀察在菌落計數(shù)時，每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)◆如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30——300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個重復的菌落數(shù)相差較大，表明試驗不精確，需要重新實驗?！羧绻玫搅?個或2個以上菌落數(shù)目在30——300的平板，則微生物的培養(yǎng)與觀察微生物的培養(yǎng)與觀察三.結果分析與評價1.通過對照實驗，若培養(yǎng)物有雜菌污染，菌落數(shù)偏高；若培養(yǎng)物混入其他氮源，則菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高，難以選擇出分解尿素的微生物。2.提示：選擇每個平