第二章-食品微生物鑒定技術和方法課件

微生物純培養(yǎng)的獲得的方法稀釋涂布法劃線分離法利用平皿的生化反應分離法：透明圈法、變色圈法、生長圈法、抑菌圈法“病灶”分離法單細胞或單孢子分離法特殊菌類——環(huán)保降解菌的分離第二章食品微生物鑒定技術和方法第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲得和傳統(tǒng)的鑒定方法微生物純培養(yǎng)的獲得的方法第二章食品微生物鑒定技術和方法第一1微生物的分離、純化與接種技術接種和分離工具1．接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.5.玻璃涂棒6.接種圈7.接種鋤8.小解剖刀

微生物的分離、純化與接種技術接種和分離工具2微生物的分離、純化與接種技術微生物的分離、純化與接種技術3劃線接種，分離純化劃線接種，分離純化4灼燒灼燒5第二章-食品微生物鑒定技術和方法課件6微生物純培養(yǎng)的獲得的方法無氮培養(yǎng)基——篩出固氮菌；無有機碳源的培養(yǎng)基——篩出硝化細菌；無有機碳源的培養(yǎng)基且無氧有光環(huán)境——篩出光合細菌；高濃度NaCl的培養(yǎng)基——篩出耐鹽菌株伊紅—美藍的培養(yǎng)基——篩出大腸桿菌；青霉素的培養(yǎng)基——篩出酵母菌、霉菌；……第二章食品微生物鑒定技術和方法第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲得和傳統(tǒng)的鑒定方法微生物純培養(yǎng)的獲得的方法第二章食品微生物鑒定技術和方法第一7微生物純培養(yǎng)的獲得的方法

傳統(tǒng)發(fā)酵食品的starter的確定or優(yōu)勢菌株的確定例如：金華火腿的主要發(fā)酵菌；

優(yōu)勢細菌：乳酸菌、葡萄球菌優(yōu)勢酵母菌：歐諾比假絲酵母、紅酵母微生物生態(tài)學方面的菌株確定？？非原位檢測鑒定、原位檢測鑒定第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲得和傳統(tǒng)的鑒定方法微生物純培養(yǎng)的獲得的方法第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲得和傳統(tǒng)8檢測食品中微生物總數(shù)的方法4種基本方法：（1）標準平板計數(shù)或好氧平板計數(shù)，適用于活細胞或菌落形成單位。（2）最大可能值法。作為一種統(tǒng)計學的方法來測定活性細胞。（3）染色還原技術。估計擁有還原能力的活性細胞數(shù)目。（4）直接顯微鏡計數(shù)法?；钚院头腔钚约毎z測食品中微生物總數(shù)的方法4種基本方法：9常規(guī)的標準平板計數(shù)（SPC）

將一部分食品樣品混合或者均質化，在適當?shù)南♂屢褐羞M行梯度稀釋，然后涂布或者傾注到適宜的瓊脂培養(yǎng)基上，在適當?shù)臏囟认屡囵B(yǎng)一段時間后，使用電子計數(shù)器對可見的菌落進行計數(shù)。SPC法是目前測定活細胞數(shù)和食品產品中菌落形成單位數(shù)最廣泛的方法。檢測食品中微生物總數(shù)的方法常規(guī)的標準平板計數(shù)（SPC）檢測食品中微生物總數(shù)的方法10常規(guī)的標準平板計數(shù)（SPC）記錄產品中全部活細胞時，要考慮以下因素：1）采用的取樣方法2）食品樣品中有機體的分類3）食品生物區(qū)系的種類4）食品原料的種類5）食品產品的預檢歷史記錄6）所用培養(yǎng)基的營養(yǎng)程度7）所用的培養(yǎng)溫度和時間8）pH值、aw和培養(yǎng)基的氧化還原電位9）所用的稀釋液類型10）食品樣品中有機體的相對數(shù)量11）競爭或拮抗有機體的存在檢測食品中微生物總數(shù)的方法常規(guī)的標準平板計數(shù)（SPC）檢測食品中微生物總數(shù)的方法11顯微鏡菌落計數(shù)法

是通過顯微鏡對載玻片瓊脂層上生長的微小菌落計數(shù)。首先進行涂布，將0.1ml的牛乳瓊脂混合物涂布到4cm2的載玻片上，經(jīng)培養(yǎng)，干燥和染色，借助顯微鏡對微小菌落進行計數(shù)。另一種方法是將2ml融化的瓊脂與2ml熱牛乳混合，隨后取0.1ml已經(jīng)接種的瓊脂涂抹到44cm2的載玻片上，最后用硫堇藍染色，用16mm物鏡的寬視野顯微鏡觀察載玻片。檢測食品中微生物總數(shù)的方法顯微鏡菌落計數(shù)法檢測食品中微生物總數(shù)的方法12最大可能數(shù)法

在這種方法中，食品樣品的稀釋液的準備類似于SPC法。將三個連續(xù)等分量樣品或稀釋梯度的稀釋液轉移到9個或15個有適宜培養(yǎng)基的試管中，分別稱為3試管或5試管法。最初樣品中微生物的數(shù)量通過查閱標準MPN表來獲得。通常MPN法的結果高于SPC的結果。檢測食品中微生物總數(shù)的方法最大可能數(shù)法檢測食品中微生物總數(shù)的方法13MPN法的優(yōu)點：（1）這種方法相對比較簡單（2）與SPC法相比，不同實驗室得到的結果更加可靠，相似率較高。（3）特殊微生物群體可以通過適當?shù)倪x擇性培養(yǎng)基進行測定。（4）這是一種測定糞大腸桿菌群含量的方法。缺點：精確度低。檢測食品中微生物總數(shù)的方法MPN法的優(yōu)點：檢測食品中微生物總數(shù)的方法14染色還原試驗

在估測相關產品中活菌數(shù)量時，通常使用兩種染色劑：亞甲基藍和刃天青。進行染色還原實驗時，食品上清液加入任何一種染色劑標準溶液，亞甲藍會從藍色還原為白色，而刃天青則從暗藍色還原為粉紅色或白色，染色劑還原的時間與樣品中微生物的數(shù)量成正比。檢測食品中微生物總數(shù)的方法染色還原試驗檢測食品中微生物總數(shù)的方法15染色還原試驗刃天青還原反應快速檢測牛肉腐敗，被還原為無色、有味、而且結果與SPC法顯著相關。乳品中用來估測鮮牛乳的微生物學質量，簡單，快捷，經(jīng)濟，而且只有活細胞才對顯色劑有明顯的還原能力。缺點：微生物對染色劑的還原程度不同，不適用于含還原酶的食品。染色還原試驗刃天青還原反應快速檢測牛肉腐敗，被還原為無色、有16食品表面微生物的檢測1.棉拭/棉拭漂洗法是表面微生物檢驗中最古老、應用最廣泛的方法，它不僅應用于食品及乳制品，而且還用于醫(yī)院、飯店。方法：將1.5ml液體加到平整的表面上，在3cm2區(qū)域內擦拭15s，然后用微升移液管取0.1ml和0.5ml液體，將液體在平板計數(shù)瓊脂或選擇性培養(yǎng)基上涂布或倒平板計數(shù)。食品表面微生物的檢測1.棉拭/棉拭漂洗法172.接觸平板法

平板直接接觸復制微生物法（RODAC）使用一種特殊的皮氏培養(yǎng)皿，平板中傾倒15.5－16.5ml培養(yǎng)基，形成瓊脂平面；當把平皿倒置時，凝固的瓊脂就會與待測表面直接接觸，接觸后蓋上平皿蓋、培養(yǎng)，然后進行菌落計數(shù)。缺點：僅適用于菌落較分散的表面，對于污染較嚴重的表面無效。食品表面微生物的檢測2.接觸平板法食品表面微生物的檢測183.瓊脂注射/瓊脂腸法瓊脂注射法：將1個100ml的注射器去掉針頭，改造成中空的柱體，并在中空的部分注入瓊脂，通過推動活塞將瓊脂從柱體底部擠壓到待測表面上，將露在外面的那層切下，置于皮氏平皿中，經(jīng)過培養(yǎng)后進行菌落計數(shù)。瓊脂腸法：與注射法類似，只不過用的是塑料試管而不是改造的注射器。廣泛用于肉制品或食品加工設備表面微生物的檢測。缺點同RODAC法，適合菌落分散和表面污染程度較輕的樣品。食品表面微生物的檢測3.瓊脂注射/瓊脂腸法食品表面微生物的檢測19其他檢測方法：1）直接表面檢測法2）粘性薄膜法3）棉拭/瓊脂斜面4）超聲波裝置5）噴霧槍法食品表面微生物的檢測其他檢測方法：食品表面微生物的檢測20第二章食品微生物鑒定技術和方法第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲得和傳統(tǒng)的鑒定方法微生物傳統(tǒng)的鑒定方法細菌：伯杰氏鑒定細菌學手冊（第八版1974、第九版1994）、伯杰氏系統(tǒng)細菌學手冊（第一版）1984~1989，2000年分五卷出版。放線菌：中國科學院微生物研究所編著的放線菌目分科、分屬檢索表真菌：Smith、Alexopoulos(阿歷克索鮑羅斯）、Ainsworth（安斯沃思）的分類系統(tǒng)第二章食品微生物鑒定技術和方法第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲21第二章食品微生物鑒定技術和方法第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲得和傳統(tǒng)的鑒定方法伯杰氏手冊沿革：伯杰氏手冊自從1923年出版第1版，直至1974年第8版，均使用《伯杰氏鑒定細菌學手冊》(Bergey′sManualofDeterminativeBacteriology)。1984年開始至1989年分四卷出版，并改名為《伯杰氏系統(tǒng)細菌學手冊》(Bergey'sManualofSystematicBacteriology)(第一版)1994年又將"系統(tǒng)手冊"1-4卷中有關屬以上分類單元的分類鑒定資料進行少量的修改補充后匯集成一冊仍用原來書名出版，故稱之為《伯杰氏鑒定細菌學手冊》第九版第二章食品微生物鑒定技術和方法第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲22第二章食品微生物鑒定技術和方法第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲得和傳統(tǒng)的鑒定方法第九版《伯杰氏細菌學手冊》簡介：內容分四卷：第1卷：一般醫(yī)學和工業(yè)方面重要的革蘭氏陰性細菌。第2卷：放線菌以外的革蘭氏陽性細菌。第3卷：古細菌、藍細菌及其他革蘭氏陰性細菌。第4卷:放線菌。

第二章食品微生物鑒定技術和方法第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲23第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲得和傳統(tǒng)的鑒定方法新的分類方法:數(shù)值分類、核酸在細菌分類中的應用、遺傳學方法、血清學和化學分類等。鑒定方法的革新。新版在表型特征基礎上，以DNA資料對屬、種的分類地位給予決定性的判斷。將DNA中G+Cmol％含量的測定、DNA雜交、RNA寡核苷酸的順序分析、細胞化學分析、數(shù)值分類等方法應用到細菌的分類學上。第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲得和傳統(tǒng)的鑒定方法新的分類方法:24第二章食品微生物鑒定技術和方法第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲得和傳統(tǒng)的鑒定方法應用原則查閱相關盡可能的資料每一步利用常識、結果判定最少的試驗，最好的結果第二章食品微生物鑒定技術和方法第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲25第二章食品微生物鑒定技術和方法第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲得和傳統(tǒng)的鑒定方法鑒定步驟菌株的純化化能自養(yǎng)菌、光合菌or化能異養(yǎng)菌的確定根據(jù)分離的過程確定形態(tài)、Gram、Spore的確定色素等專一特性碳源的類型、氧化性、發(fā)酵性歸屬；由屬的特征選擇試驗；進一步確定第二章食品微生物鑒定技術和方法第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲26第二章食品微生物鑒定技術和方法第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲得和傳統(tǒng)的鑒定方法應用實例（a-淀粉酶抑制劑產生菌的分離、鑒定、保存）第一步：菌落純菌株的獲得第二步：設計一系列的檢測反應第三步：對照結果定名第四步：保存生化反應平板篩選：“抑制圈和顯色圈法”。第二章食品微生物鑒定技術和方法第一節(jié)食品微生物純培養(yǎng)的獲27第二章食品微生物鑒定技術和方法1.DNA同源性和DNA中（G+C）摩爾分數(shù)（G+C)%=（G+C)/(A+T+C+G)%Tm法（熱變溫度法）測定菌株間相差2.5～4.0％；種間相差5～10％以上；屬間相差10％以上第二節(jié)食品微生物學的現(xiàn)代鑒定方法第二章食品微生物鑒定技術和方法1.DNA同源性和DNA中28每個生物種都有特定的GC%范圍，因此可以作為分類鑒定的指標。細菌的GC%范圍為25--75%，變化范圍最大，因此更適合于細菌的分類鑒定。每個生物種都有特定的GC%范圍，因此可以作29

GC%測定主要用于對表型特征難區(qū)分的細菌作出鑒定，并可檢驗表型特征分類的合理性，從分子水平上判斷物種的親緣關系。G+C含量的比較主要用于分類鑒定中的否定但具有相似G+C含量的生物并不一定表明它們之間具有近的親緣關系。GC%測定主要用于對表型特征難區(qū)分的細菌G+C含30

同一個種內的不同菌株G+C含量差別應在4～5%以下；同屬不同種的差別應低于10～15%；

G+C含量已經(jīng)作為建立新的微生物分類單元的一項基本特征，它對于種、屬甚至科的分類鑒定有重要意義。

若二個在形態(tài)及生理生化特性方面及其相似的菌株，如果其G+C含量的差別大于5%，則肯定不是同一個種，大于15%則肯定不是同一個屬。同一個種內的不同菌株G+C含量差別應在4～531第二章食品微生物鑒定技術和方法第二節(jié)食品微生物學的現(xiàn)代鑒定方法1.DNA同源性Southernblotting（DNA-DNA)Northernblotting(DNA-RNA)Westernblotting(Pro-Anti)Easternblotting

第二章食品微生物鑒定技術和方法第二節(jié)食品微生物學的現(xiàn)代鑒32第二章食品微生物鑒定技術和方法第二節(jié)食品微生物學的現(xiàn)代鑒定方法2.23S、16S、5SrRNA序列相似性核糖體70S

30S50S

16S213423S+5S蛋白質第二章食品微生物鑒定技術和方法第二節(jié)食品微生物學的現(xiàn)代鑒33第二章食品微生物鑒定技術和方法第二節(jié)食品微生物學的現(xiàn)代鑒定方法16S亞基保守性高，是細菌進化的計時器普遍存在細胞RNA含量較高rRNA穩(wěn)定16sRNA序列保守16sRNA分子量適中16SrRNA基因約含有1540個核苷酸，分可變區(qū)和保守區(qū)，不同微生物可變區(qū)核苷酸序列不同，從而可以利用這些特異性序列進行微生物的鑒定；

第二章食品微生物鑒定技術和方法第二節(jié)食品微生物學的現(xiàn)代鑒348/23/202335

細

菌

域

Domainbacteria

古（生）菌域

Domainarchaea

真

核

生

物

域

Domaineukaryota

紫色細菌

線粒體

甲烷球菌屬

甲烷桿菌屬

真菌

植物

葉綠體

革蘭氏陽性細菌

甲烷八疊球菌屬

極端嗜鹽菌

動物

藍細菌

無硫綠細菌

熱球菌屬

偽變形蟲

纖毛蟲

黃桿菌

棲熱胞菌屬

熱網(wǎng)菌屬

熱變形細菌

粘菌

鞭毛蟲

產液菌屬

微孢子

毛滴蟲

雙滴蟲（假滴蟲屬）

--------------

生物總系統(tǒng)發(fā)育樹（根據(jù)16SrRNA序列比較繪制，引自《布氏微生物學》2000）8/2/202335細菌域Domain35第二章食品微生物鑒定技術和方法第二節(jié)食品微生物學的現(xiàn)代鑒定方法具體測定方法：采用RNaseT1酶可以將16SrRNA酶解在G位點上切割，得到6～20個堿基大小的序列對這些6～20堿基片段進行分離、測序比較不同微生物之間SAB（Dice型相關系數(shù)）的相似性。

第二章食品微生物鑒定技術和方法第二節(jié)食品微生物學的現(xiàn)代鑒36第二章食品微生物鑒定技術和方法第二節(jié)食品微生物學的現(xiàn)代鑒定方法SAB=2×NAB/（NA+NB）NAB代表兩菌所含相同寡核苷酸的堿基總數(shù)，NA和NB分別代表兩菌寡核苷酸所含堿基總數(shù)SAB等于1，說明所比較的兩菌株rRNA序列相同，是同一進化時間的微生物，若SAB值小于0.1，兩菌親緣關系很遠第二章食品微生物鑒定技術和方法第二節(jié)食品微生物學的現(xiàn)代鑒37第二章食品微生物鑒定技術和方法第二節(jié)食品微生物學的現(xiàn)代鑒定方法分子生物學技術在細菌鑒定中的應用核酸探針技術核酸擴增技術（PCR技術）基因芯片技術第二章食品微生物鑒定技術和方法第二節(jié)食品微生物學的現(xiàn)代鑒388/23/202339

核酸探針技術原理：兩條不同來源的核酸鏈如果具有互補的堿基序列，就能夠特異性的結合而成為分子雜交鏈。據(jù)此，將己知核苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法標記，加入己變性的被檢DNA樣品中，在一定條件下即可與該樣品中有同源序列的DNA區(qū)段形成雜交雙鏈，從而達到鑒定樣品中DNA的目的。

這種能認識到特異性核苷酸序列有標記的單鏈叫DNA分子核酸探針或基因探針。

8/2/202339核酸探針技術原理：兩條39

制備核酸探針要注意兩個關鍵性的問題：1.要選擇特異性強而又無交叉反應的核酸(DNA或RNA)片段，可通過核酸重組和克隆以及人工合成、PCR擴增等技術獲得2.標記物，當前常用同位素(32P、35S等）、光生物素及地高辛(digoxigenin)標記。核酸探針技術已被用于檢驗食品中一些常見的病原菌。如產腸毒素性大腸桿菌、沙門氏菌。制備核酸探針要注意兩個關鍵性的問題：408/23/202341

PCR（PolymeraseChainReaction）即聚合酶鏈式反應，又稱為無細胞克隆系統(tǒng)，是1985年由Mullis創(chuàng)建的一項DNA體外擴增技術。PCR的全過程由變性（denature）、退火（annealing）和延伸（extension）三步組成的若干個循環(huán)，每步之間通過溫度的改變來實現(xiàn)轉換。其基本原理是在體外對一特定的雙鏈DNA片段（或稱靶DNA)進行高效擴增。首先將靶DNA雙鏈加熱變性為單鏈，然后加入兩段人工合成的與靶DNA兩端鄰近序列互補的寡核苷酸片段作為引物(primer)，即左端引物和右端引物，該對引物與互補的DNA單鏈堿基互補結合后，在有DNA多聚酶和四種dNTPs底物存在的情況下，引物沿模板DNA鏈（靶DNA單鏈）按5’→3’方向延伸，自動合成新的DNA雙鏈。8/2/202341PCR（Polymeras418/23/202342

PCR技術有快速、特異、敏感等特點，因而該技術在食品中致病菌的檢測方面具有很大的應用潛力。PCR技術能快速地檢出肉食品中的沙門氏菌，檢測的敏感性和特異性均為100%，保證了檢測的準確性。PCR還可用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定，它是在同一PCR反應管中同時加上多種病原微生物的特異性引物，進行PCR擴增?？捎糜谕瑫r檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。8/2/202342PCR技術有快速、特異、428/23/202343基因芯片（genechip）又稱DNA微陣列（DNAmicroarray），是指將許多特定的寡居核苷酸片斷或基因片段作為探針，有規(guī)律的排列固定于支持物上形成的DNA分子陣列。芯片與待測的熒光標記樣品的基因按堿基配對原理進行雜交后，在通過激光共聚焦熒光監(jiān)測系統(tǒng)等對其表面進行掃描即可獲取樣品分子的數(shù)量和序列信息。由于該技術同時將大量的探針固定于支持物上，所以可以一次性對大量序列進行檢測和基因分析，解決了傳統(tǒng)的核酸印跡雜交（southernblot和northernblot等）操作復雜，操作序列數(shù)量少等缺點。基因芯片技術的突出特點在于其高度的并行性、多樣化、微型化和自動化，以及靈敏、高效和低成本等優(yōu)點。8/2/202343基因芯片（genech43第二章食品微生物鑒定技術和方法第二節(jié)食品微生物學的現(xiàn)代鑒定方法3.寡核苷酸種類4.可溶性蛋白質總量或形態(tài)學、生理生化特征的數(shù)值分類法5.細胞壁分析6.血清反應法7.細胞脂肪酸組成分析第二章食品微生物鑒定技術和方法第二節(jié)食品微生物學的現(xiàn)代鑒44第二章食品微生物鑒定技術和方法1.化學方法熱穩(wěn)定性核酸酶法（金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus））鱟試劑法（Limulusamoebocytelysate（LAL）assay）（適用于G-細菌）ATP測定法（適用于活細胞）輻射線測定法熒光或發(fā)色測定法第三節(jié)食品微生物快速檢測技術第二章食品微生物鑒定技術和方法1.化學方法第三節(jié)食品微451.化學方法1）熱穩(wěn)定性核酸酶法（金黃色葡萄球菌（S.aureus））

通過測定食物中的熱穩(wěn)定性核酸酶可以檢測出食物中存在的大量的金黃色葡萄球菌。這是由于其產生熱穩(wěn)定性核酸酶以及凝固酶。研究表明：有0.34單位的熱穩(wěn)定性核酸酶存在時，表明有某種金黃色葡萄球菌生長，而此時腸毒素的含量還不會導致食物中毒。0.34單位的熱穩(wěn)定性核酸酶相當于金黃色葡萄球菌產生9.5×10－3ug腸毒素。熱穩(wěn)定性核酸酶檢測法可以作為指示金黃色葡萄球菌生長的方法。第三節(jié)食品微生物快速檢測技術1.化學方法第三節(jié)食品微生物快速檢測技術461.化學方法

2）鱟試劑法鱟試劑法又稱鱟變形細胞溶解物實驗。革蘭氏陰性菌可通過產生的內毒素進行鑒定，內毒素是由菌體外膜裸露的脂多糖和被外膜包圍的脂A構成的。鱟變形細胞溶解物實驗采用來自馬蹄蟹血液的血細胞溶菌蛋白。溶菌蛋白是已知的對內毒素最敏感的物質。鱟實驗是在少量的溶菌液中加入食物懸液或其他待測樣品，并在37℃培養(yǎng)1h。內毒素的存在會導致胞溶物凝膠。鱟試劑能檢出1.0pg脂多糖。由于大腸桿菌含有3.0fg脂多糖，所以能檢出＜300個革蘭氏陰性菌。1.化學方法

2）鱟試劑法47鱟試劑法鱟試劑法首次應用于食品檢驗是檢測碎牛肉中的腐敗菌。內毒素的滴定度隨著革蘭氏陰性細菌數(shù)量的增加而增加。由于冷藏鮮肉的變質通常是由革蘭氏陰性菌引起的，所以鱟試劑法是快速檢測革蘭氏陰性菌總菌數(shù)的好方法。這種方法適合于評價巴氏殺菌前后乳的大腸菌群衛(wèi)生質量。鱟試劑法483）ATP法ATP在細胞死亡2h后消失，并且每個細菌細胞中的ATP含量恒定，每個細胞約含有10－18－10－17mol，相當于105cfu的細菌含有4×104mol/LATP。一種最簡單的ATP測定法之一是利用螢火蟲的蟲熒光素－熒光素酶系統(tǒng)測定。在ATP存在時，用熒光檢測器檢測熒光素酶發(fā)射的熒光強度。螢火蟲熒光素的發(fā)光量與添加的ATP量成正比。在106－109cfu/g范圍內，微生物的ATP含量和細菌數(shù)呈線性關系。ATP法已經(jīng)用于雞肉、豬肉和牛肉的檢測。（cfu/mL指的是每毫升樣品中含有的細菌群落總數(shù)）3）ATP法49第二章食品微生物鑒定技術和方法第二節(jié)食品微生物學的現(xiàn)代鑒定方法4）輻射測定法

利用培養(yǎng)基中14C標記的代謝物為基礎，當微生物利用這些物質時，釋放14CO2并用放射能計數(shù)器檢測。

14C標記的葡萄糖。對那些不能利用葡萄糖的微生物，14C標記的甲酸鹽或14C標記的谷氨酸鹽。第二章食品微生物鑒定技術和方法第二節(jié)食品微生物學的現(xiàn)代鑒504）輻射測定法整個程序如下：向15ml帶蓋的血清瓶中加入12－36ml含標記代謝物的培養(yǎng)基，通過充入適當?shù)臍怏w保持需氧或厭