生理學(xué)實驗蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備專家講座

試驗一

蛙坐骨神經(jīng)---腓腸肌標(biāo)本制備生理學(xué)實驗蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備專家講座第1頁1.學(xué)習(xí)生理學(xué)試驗基本組織分離技術(shù)；2.學(xué)習(xí)和掌握制備蛙類坐骨神經(jīng)---腓腸肌標(biāo)本方法；【試驗?zāi)繕?biāo)】生理學(xué)實驗蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備專家講座第2頁【試驗原理】蛙類一些基本生理活動規(guī)律與恒溫動物相同，而維持其離體組織正?；顒铀枥砘瘲l件比較簡單，易于建立和控制。所以，在試驗中慣用蟾蜍或蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)原來觀察興奮與興奮性、刺激與肌肉收縮等基本生理現(xiàn)象和過程。故制備坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本是生理試驗中必須掌握一項基本技能。生理學(xué)實驗蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備專家講座第3頁【試驗對象】

蟾蜍或蛙

【試驗器材和藥品】

蛙板、普通剪刀、手術(shù)剪、鑷子、探針、玻璃分針、蛙釘、滴管、培養(yǎng)皿、鋅銅弓、任氏液。生理學(xué)實驗蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備專家講座第4頁【試驗方法】1.破壞腦和脊髓

取蟾蜍一只，用自來水沖洗潔凈。左手握住蟾蜍，用食指按壓其頭部前端，拇指按壓背部，右手持探針由枕骨大孔垂直刺入椎管。然后探針改向前刺入顱腔，左右攪動充分搗毀腦組織。然后將探針抽回至進(jìn)針處，再向后刺入脊椎管，重復(fù)抽插搗毀脊髓（圖1-1）。此時如蟾蜍四肢松軟，呼吸消失，表明腦和脊髓已完全破壞，不然應(yīng)按上法重復(fù)進(jìn)行。生理學(xué)實驗蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備專家講座第5頁圖1-1圖1-1破壞蟾蜍腦脊髓方法生理學(xué)實驗蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備專家講座第6頁2.剪除軀干上部及內(nèi)臟

左手捏住蟾蜍脊柱，右手持粗剪刀在前肢腋窩處連同皮膚、肌肉、脊柱一并剪斷。左手握住蟾蜍后肢，用拇指壓住骶骨，使蟾蜍頭與內(nèi)臟自然下垂，右手持普通剪刀，沿脊柱兩側(cè)剪除一切內(nèi)臟及頭胸部，留下后肢、骶骨、脊柱以及脊柱兩側(cè)坐骨神經(jīng)（圖1-2）剪除過程中注意勿損傷坐骨神經(jīng)。圖1-2剪除軀干上部及內(nèi)臟圖1-2生理學(xué)實驗蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備專家講座第7頁3.剝皮

握緊脊柱斷端（注意不要握住或壓迫神經(jīng)），右手握住其上皮膚邊緣，用力向下剝掉全部后肢皮膚（圖1-3）。把標(biāo)本放入盛有任氏液培養(yǎng)皿中。將手及用過剪刀、鑷等全部手術(shù)器械洗凈，再進(jìn)行下面步驟。圖1-3生理學(xué)實驗蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備專家講座第8頁4.分離兩腿

用鑷子夾住脊柱將標(biāo)本提起，后面朝上，剪去向上突起尾骨（注意勿損傷坐骨神經(jīng)）。然后沿正中線用剪刀將脊柱和恥骨聯(lián)合中央辟開兩側(cè)大腿，并完全分離。將兩條腿浸入任氏液培養(yǎng)皿中。5.制作坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本取一蛙腿置于蛙板上玻璃板上。生理學(xué)實驗蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備專家講座第9頁（1）游離坐骨神經(jīng)

將腿標(biāo)本腹面朝上放置，用玻璃針沿脊柱旁游離坐骨神經(jīng)，將坐骨神經(jīng)連同2～3節(jié)脊椎骨用粗剪刀從脊柱上剪下來。再將標(biāo)本后面朝上放置，把梨狀肌及其附近結(jié)締組織剪去。循坐骨神經(jīng)溝（股二頭肌與半膜肌之間裂縫處），找出坐骨神經(jīng)大腿段（圖1-4）。用玻璃針仔細(xì)剝離游離至腘窩，然后剪去從脊柱根部至腘窩全部坐骨神經(jīng)分支。圖1-4生理學(xué)實驗蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備專家講座第10頁（2）完成坐骨神經(jīng)小腿標(biāo)本

將游離潔凈坐骨神經(jīng)搭于腓腸肌上，在膝關(guān)節(jié)周圍剪掉全部大腿肌肉，并用普通剪刀將股骨刮潔凈，然后在股骨中部剪去上段股骨（保留足夠股骨斷端，用于固定），保留部分就是坐骨神經(jīng)小腿標(biāo)本。生理學(xué)實驗蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備專家講座第11頁（3）完成坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本

將上述坐骨神經(jīng)小腿標(biāo)本在跟腱處穿線結(jié)扎后，于結(jié)扎處遠(yuǎn)端剪斷跟腱。游離腓腸肌至膝關(guān)節(jié)囊將小腿其余部分剪掉，這么就制得一個含有附著在股骨上腓腸肌并帶有支配腓肌坐骨神經(jīng)標(biāo)本(圖1-5)。生理學(xué)實驗蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備專家講座第12頁6.檢驗標(biāo)本興奮性

用經(jīng)任氏液潤濕鋅銅弓輕輕接觸一下坐骨神經(jīng)，如腓腸肌發(fā)生快速而顯著收縮，則表明標(biāo)本興奮性良好，即可將標(biāo)本放在盛有任氏液培養(yǎng)皿中，以備試驗用。若無鋅銅弓，亦可用中等強度單個電刺激作上述測試。圖1-5生理學(xué)實驗蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備專家講座第13頁

【試驗要求】

掌握制備坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本技能，并取得興奮性良好標(biāo)本。

【注意事項】1.操作過程中，勿污染、壓榨、損傷、過分牽拉神經(jīng)和肌肉。