腎素-血管緊張素系統(tǒng)調節(jié)劑對hel細胞增殖的影響

腎素-血管緊張素系統(tǒng)調節(jié)劑對hel細胞增殖的影響

腎素-血管緊張素系統(tǒng)（ras）能調節(jié)血壓和水電解質的平衡。該系統(tǒng)由血管緊張素原(angiotensinogen,AGT)、腎素(renin)、血管緊張素(angiotensin,Ang)、血管緊張素轉化酶(angiotensin-convertingenzyme,ACE)及各血管緊張素受體組成。近年來研究發(fā)現(xiàn),RAS的2個主要活性成分AngII及Ang-(1-7)對細胞增殖及凋亡有調控作用,惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展與RAS的異常激活及成分失衡密切相關真性紅細胞增多癥(polycythemiavera,PV)是一種獲得性克隆性造血干細胞腫瘤,其發(fā)病機制為造血干細胞水平發(fā)生了JAK2突變,使得JAK2過度激活下游通路導致細胞惡性增殖和凋亡抑制材料和方法細胞培養(yǎng)HEL細胞由第三軍醫(yī)大學預防系惠贈。HEL細胞懸于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液于37℃及5%CO細胞凋亡和周期氯沙坦(美國默沙東公司)、替米沙坦(德國勃林格殷格翰公司)、阿利吉侖(瑞士諾華公司)、Ang-(1-7)(中國吉爾生化有限公司)。CCK試劑盒(日本株式會社同仁化學研究所)。AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡雙染試劑盒(美國BectionDickinson公司)。PI/RNase流式細胞周期試劑盒(中國賽默飛世爾科技有限公司)。MODEL680酶標儀(美國伯樂公司)。CytoFLEX流式細胞儀(美國Beckmancoulter公司)。藥物干預組氯沙坦、替米沙坦和阿利吉侖按10測定植物生長曲線取對數(shù)生長期的HEL細胞,每孔100μl接種于96孔培養(yǎng)板中,每列的第1孔不加細胞,為調零孔。24h后分別加入5個不同濃度的4種藥物,每個濃度設3個復孔。I組為對照組,Ⅱ-V組為實驗組(分別為氯沙坦、替米沙坦、阿利吉侖、Ang-(1-7))。96孔板每孔加CCK-810μl,混勻,37℃孵育,設定時間點為3、6、12和18d4個時間點進行篩選濃度。根據(jù)實驗結果有效藥物的最佳干預濃度設定時間點為6、9、12和15d4個時間點。酶標儀檢測波長450nm的每孔吸光度值,求其平均值,根據(jù)吸光度值作生長曲線。根據(jù)下列公式計算細胞存活率。流式細胞術檢測各組藥物對hel細胞的死亡取HEL細胞2×10均數(shù)標準差ue0afsd對所有計量資料行正態(tài)檢驗,所有數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布,用均數(shù)±標準差(ue0af±SD)表示。多組比較采用單因素方差分析。所有的數(shù)據(jù)均通過SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結果不同濃度組的藥物梯度的測定10各組藥物對hel細胞生長的影響10各組藥物對hel細胞周期的影響10各組藥物對hel細胞死亡的影響10ang1-7的降解循環(huán)RAS是由兩個軸構成。腎素、AGT、ACE分別由腎臟、肝臟、肺組織分泌后,腎素將AGT轉化為AngI,ACE將AngI裂解為AngII,AngII通過AT1受體結合而產生收縮血管效應,此為ACE-AngII-AT1受體軸;ACE2將AngII轉換為Ang-(1-7),后者通過與Mas受體結合而產生與AngII相反的擴張血管效應,此為ACE2-Ang-(1-7)-Mas受體軸。此外,AngI在ACE2作用下,先生成Ang-(1-9),后經ACE轉化為Ang-(1-7),此為Ang-(1-7)的次要來源。Ang-(1-7)的代謝則由ACE降解為Ang-(1-5)而滅活既往學者研究發(fā)現(xiàn),PV患者AngⅡ與血管緊張素Ⅱ受體1(angiotensinⅡtype-1receptor,AT1R)的表達是異常增高的本研究結果顯示,調節(jié)RAS的4種藥物中Ang-(1-7)有顯著抑制作用,而ARB僅有輕度抑制作用,腎素抑制劑幾乎沒有抑制作用。由圖2可以看出,ARB制劑阻斷AngⅡ和AT1受體的結合,將導致AngⅡ向Ang-(1-7)轉化增多,推斷ARB制劑對HEL細胞輕度的抑制作用可能源于Ang-(1-7)的增多;AngⅠ、AngⅡ分別是Ang-(1-7)的次要來源和主要來源,阿利吉侖作為腎素抑制劑,降低AngⅠ、AngⅡ水平必然導致Ang-(1-7)的匱乏;結合本研究結果提示RAS中真正對HEL細胞生長起抑制作用的是Ang-(1-7)。正常的紅系造血調控依賴EPO與受體結合活化JAK2而激活下游通路,引起紅系的增殖和分化;而JAK2突變導致異常活化JAK2持續(xù)激活下游通路,導致HEL細胞惡性增殖和凋亡抑制,這種活化是非EPO依賴的本研究顯示,Ang-(1-7)明顯抑制HEL細胞的生長周期,用10Ang-(1-7)明顯抑制HEL細胞的生長,其機