經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)

經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第1頁(yè)急性毒性試驗(yàn)試驗(yàn)動(dòng)物選擇（物種和品系，年紀(jì)和體重，性別，分組，預(yù)檢，禁食）(who?)受試物（what?)染毒方法(how?)劑量選擇（how?)毒性作用觀察(ending)經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第2頁(yè)

一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)1.學(xué)習(xí)急性毒性試驗(yàn)試驗(yàn)設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)2.掌握灌胃技術(shù)，隨機(jī)分組方法3.掌握LD50計(jì)算方法4.觀察和描述受試物中毒特征5.掌握急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第3頁(yè)急性毒性作用：指機(jī)體一次接觸或二十四小時(shí)內(nèi)屢次接觸化學(xué)物后在短期（最長(zhǎng)到14天）內(nèi)所發(fā)生毒性效應(yīng)，包含普通行為、外觀改變、大致形態(tài)改變以及死亡效應(yīng)。經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第4頁(yè)

LD50：半數(shù)致死劑量

指導(dǎo)起一組受試試驗(yàn)動(dòng)物半數(shù)死亡劑量。常見以表示急性毒性大小。其值越小，表示外源化學(xué)物毒性越強(qiáng)；反之，毒性越低。

LD50是經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算得到毒性參數(shù)，是一個(gè)統(tǒng)計(jì)量，受試驗(yàn)動(dòng)物個(gè)體易感性差異影響較小，所以是最主要急性毒性參數(shù)。經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第5頁(yè)二、試驗(yàn)原理

選擇健康試驗(yàn)動(dòng)物，依據(jù)體重按隨機(jī)分組方法，依據(jù)LD50計(jì)算設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)將動(dòng)物分成數(shù)個(gè)染毒組。給予受試物后，了解動(dòng)物所產(chǎn)生急性毒性反應(yīng)及其嚴(yán)重程度，中毒死亡特征以及可能死亡原因，觀察受試物毒性反應(yīng)與劑量關(guān)系，求出半數(shù)致死劑量（LD50），并依據(jù)LD50值將受試物進(jìn)行急性毒性分級(jí)。此次試驗(yàn)采取改進(jìn)寇氏法。改進(jìn)寇氏法：利用劑量對(duì)數(shù)與死亡率呈S型曲線而設(shè)計(jì)方法。要求以下：

每個(gè)染毒劑量組動(dòng)物數(shù)相同，各劑量組組距呈等比級(jí)數(shù)，死亡率呈正態(tài)分布，最低劑量組死亡率<20％，最高劑量組死亡率>80%。經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第6頁(yè)三、材料和試劑

1.試驗(yàn)動(dòng)物：健康成年小鼠，昆明種，普通級(jí)，雌雄各60只2.器材：灌胃針，注射器，吸管，容量瓶，滴管，動(dòng)物體重秤等3.試劑：受試物為1.3g/ml敵敵畏油溶液（湖北荊州），植物油，苦味酸（染色標(biāo)識(shí)）。經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第7頁(yè)四、操作步驟1.試驗(yàn)動(dòng)物選擇：昆明種小鼠，雌雄各60（早晨）2.試驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分組和標(biāo)識(shí)（早晨）3.劑量設(shè)計(jì)及受試物配制（早晨）4.經(jīng)口染毒（下午）5.中毒體征和動(dòng)物死亡情況觀察統(tǒng)計(jì)（下午）6.LD50計(jì)算（次日下午）7.結(jié)果評(píng)價(jià)、完成實(shí)習(xí)匯報(bào)（次日下午）經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第8頁(yè)

雌雄分開分組，每種性別分6組，每組10只1.動(dòng)物稱重：按體重分在不一樣籠中待分組

<16g,16g~,18g~,20g~,22g~,>24g2.隨機(jī)分組方法每種性別隨機(jī)分為6組：A、B、C、D、E，F(xiàn),每輪分別從籠中取一只動(dòng)物按以下次序到各組，直到動(dòng)物取完。(雌雄分別分組）第一輪：A、B、C、D、E、F

第二輪：B、C、D、E、F、A

第三輪：C、D、E、F、A、B

第四輪：D、E、F、A、B、C

第五輪：E、F、A、B、C、D

第六輪：F、A、B、C、D、E......

雌雄各5組為劑量組，各剩一組作為溶劑對(duì)照（只灌植物油）和備用。分完組后在籠子上做好標(biāo)識(shí)，動(dòng)物暫不標(biāo)識(shí)，下午灌胃前再標(biāo)識(shí)。

試驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分組

經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第9頁(yè)

劑量設(shè)計(jì)預(yù)試驗(yàn)得出LD100、LD0

，各設(shè)置五個(gè)劑量組，n=5i=(lgLD100-lgLD0)/(n-1)，k=10i雌性：LD100=240mg/kgLD0=90mg/kg雄性：LD100=250mg/kgLD0=100mg/kg經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第10頁(yè)改進(jìn)寇氏法1、劑量設(shè)置：雌雄，等比數(shù)級(jí)，灌胃容量：0.1ml/10g雌LD100=240mg/kg,LD0=90mg/kg,k=1.28

雄LD100=250mg/kg,LD0=100mg/kg,k=1.26

㈠雌性5個(gè)劑量組

各組濃度㈡雄性5個(gè)劑量組

各組濃度

240mg/Kg24mg/ml250mg/kg25mg/ml

187.5mg/Kg18.8mg/ml198.4mg/kg19.8mg/ml

146.5mg/Kg14.7mg/ml157.4mg/kg15.7mg/ml

114.4mg/Kg11.4mg/ml125.0mg/kg12.55mg/ml

90mg/Kg9mg/ml100mg/kg10mg/ml各組濃度＝各組劑量/灌胃容量例雌性最高劑量組濃度＝最高劑量/灌胃容量＝240mg/kg/0.1ml/10g＝24mg/ml2、每組實(shí)際需要量V＝最終體積＋損耗量＝動(dòng)物數(shù)×平均體重×灌胃容量＋損耗量＝10×25g×0.1ml/10g+2.5ml＝5ml3、雌性最高劑量組溶液(即母液)：雄性最高劑量組溶液（母液）：

24mg/ml配置22.9ml25mg/ml配制24.2ml雌A＝V*K/(K-1)雄A=V*K/(K-1)＝5*1.28/(1.28－1)=5*1.26/(1.26-1)＝22.9ml=24.2ml4、下一組溶液配置：等比稀釋法A*（1/K）雌性=A×（1/k）=22.9×(1/1.28)=17.9ml雄性=A×（1/k）=24.2×(1/1.26)=19.2ml從最高劑量組溶液Aml中取出5ml,作為高劑量組。剩下(A-5)ml,加油5ml，混勻后，再?gòu)闹腥〕?ml作為下一個(gè)劑量組，依次類推，完成時(shí)，最低劑量組體積為A，其余各組體積均為5ml.經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第11頁(yè)經(jīng)口染毒1.稱重并標(biāo)識(shí):(每組10只）頭，背，尾，右前，右中，右后，左后，左中，左前，全白2.灌胃：0.1ml/10g3.中毒體征和動(dòng)物死亡情況觀察（中毒表現(xiàn)參考教材《毒理學(xué)基礎(chǔ)》P123）

經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第12頁(yè)

中毒體征和動(dòng)物死亡情況觀察1、中毒過程：潛伏期、中毒期、恢復(fù)期或死亡時(shí)間（只需統(tǒng)計(jì)中毒出現(xiàn)時(shí)間＆死亡時(shí)間）2、中毒癥狀：參考《毒理學(xué)基礎(chǔ)》P123，表6-13、死亡判斷：呼吸、心跳停頓，瞳孔擴(kuò)散4、尸體解剖：目標(biāo)判斷發(fā)生毒作用靶器官，排除動(dòng)物意外死亡經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第13頁(yè)經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第14頁(yè)

★急性毒性試驗(yàn)原始統(tǒng)計(jì)（14天）

受試物名稱：敵敵畏

受試物性狀：乳油

受試物起源：毒理試驗(yàn)室

動(dòng)物種屬品系：小鼠，昆明種

動(dòng)物起源：同濟(jì)醫(yī)學(xué)院試驗(yàn)動(dòng)物中心

染毒路徑：經(jīng)口灌胃室溫：日期：

劑量組別動(dòng)物性別體重染毒量染毒體征及死亡（mg/kg）編號(hào)（g）(ml)時(shí)間出現(xiàn)時(shí)間時(shí)間試驗(yàn)操作者：試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)者：經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第15頁(yè)★

LD50計(jì)算小鼠經(jīng)口染毒死亡情況（14天）經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第16頁(yè)

結(jié)果計(jì)算與分析

計(jì)算公式：m=lgLD50＝Xk－i（∑p－0.5）

Sm=

式中

Xk：最大劑量對(duì)數(shù)值

q：存活率

∑p：各劑量組死亡率總和

n：各組動(dòng)物數(shù)

Sm：標(biāo)準(zhǔn)差

i:相鄰兩劑量組之對(duì)數(shù)劑量差值

lgLD50及95%可信區(qū)間=m±1.96*Sm

反對(duì)數(shù)求出LD50及95%可信區(qū)間

LD50：注明動(dòng)物種屬，品系，性別，路徑，受試物純度經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第17頁(yè)經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第18頁(yè)等級(jí)劇毒高毒中等毒低毒微毒大鼠經(jīng)口LD50(mg/kg)≤55~50~500~>5000

急性毒性評(píng)價(jià)我國(guó)農(nóng)藥急性經(jīng)口毒性分級(jí)

/Article_Show.asp?ArticleID=659經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第19頁(yè)LD50意義標(biāo)準(zhǔn)化化學(xué)物毒作用強(qiáng)度，評(píng)價(jià)其對(duì)機(jī)體毒性大小，比較不一樣化學(xué)物毒性大??；為其它毒理試驗(yàn)設(shè)計(jì)提供參考；比較不一樣路徑LD50值，取得生物利用度信息；推測(cè)人類致死劑量以及中毒后體征，為臨床中毒治療提供參考。經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第20頁(yè)實(shí)習(xí)匯報(bào)要求一、目標(biāo)意義二、試驗(yàn)原理三、試驗(yàn)材料（試驗(yàn)動(dòng)物，受試物）及儀器四、試驗(yàn)步驟(隨機(jī)分組，試劑配制）五、試驗(yàn)結(jié)果（包含兩個(gè)表、計(jì)算結(jié)果）六、結(jié)果評(píng)價(jià)經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)第21頁(yè)1、說明受試物基礎(chǔ)情況（名稱、純度、狀態(tài)等）和配制方法；2、試驗(yàn)動(dòng)物種屬、等級(jí)。試驗(yàn)前動(dòng)物禁食情況和健康情況；3、染毒劑量（兩人小組）和動(dòng)物分組，體重范圍；4、染毒時(shí)間，染毒連續(xù)時(shí)間，