“胃屏復(fù)”對大鼠應(yīng)激性胃黏膜損傷保護(hù)作用的形態(tài)觀察

“胃屏復(fù)”對大鼠應(yīng)激性胃黏膜損傷保護(hù)作用的形態(tài)觀察【摘要】目的以透明質(zhì)酸為基質(zhì)，研制對胃黏膜屏障更具保護(hù)作用的新制劑，探索透明質(zhì)酸對黏膜的保護(hù)作用，拓展透明質(zhì)酸新的應(yīng)用范圍。方法復(fù)制大鼠應(yīng)激性胃黏膜急性出血性糜爛損傷的動(dòng)物模型，制定胃黏膜損傷程度分級標(biāo)準(zhǔn)和研究制劑有效性判定標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)前對實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物灌飼研究制劑3ml，對照組以等量生理鹽水灌胃。同時(shí)設(shè)立模型對照組驗(yàn)證模型。24h后處死動(dòng)物觀察胃黏膜外觀形態(tài)變化；切片觀察胃黏膜病理組織學(xué)改變。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組胃黏膜外觀良好，未見明顯黏膜糜爛和出血灶；對照組則可見散在出血點(diǎn)和黏膜完整性的破壞；模型對照組出現(xiàn)全胃廣泛出血，黏膜表面覆蓋大量凝血塊。實(shí)驗(yàn)組有效率為90%；對照組有效率為22%。統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，P＜。結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示“胃屏復(fù)”對應(yīng)激性胃黏膜損傷具有明顯的保護(hù)作用。由此表明，透明質(zhì)酸可替代胃黏膜屏障的糖蛋白基質(zhì)而具有重要的應(yīng)用開發(fā)價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】透明質(zhì)酸；制劑；形態(tài)學(xué)觀察；動(dòng)物模型

Preparationofprotectinggastromucosaandobservationitseffectonprotectingofacutestressgastromucosadamageinrats

【Abstract】ObjectiveUsedhyaluronicacidasmatrix，WEIPINGFU，anewpreparationofprotectinggastromucosa，wasTheanimalmodelofacutestressgastromucosadamagewasreconstructed.Thestandardsofthegastromucosadamageandtheprotectingeffectwasworkedout.TheanimalsofexperimentalgroupwerepouredtheWEIPINGFU3mlintothestomach，andNS3mlwerepouredintoitincontrastgroupbeforetheexperiment.Theanimalsweretreatedafter24hours，thenthechangesofthegastromucosalmorphologyandpathologichistologywereTheappearanceofgastromucosawasfineandintact；thereweren’tobviousgastromucosalerosionandbleedingpointsintheexperimentalgroup.Itwasseenalotofspreadbleedingpointsanddestroyofgastromucosainthecontrastgroup.Theeffectiverateoftheformeris90%；butthelatteris22%(P＜).ConclusionThetestpreparationhasclearlytheprotectingeffecttothegastromucosadamage.

【Keywords】hyaluronicacid；preparation；morphologicobservation；animalmodel

胃炎、胃黏膜糜爛、出血、胃潰瘍等疾病是危害人類健康的常見病、多發(fā)病。而不同病因?qū)е挛覆∽兙哂泄残缘奶卣魇俏葛つて琳系氖軗p。目前市售的許多藥品也正是基于保護(hù)和修復(fù)受損胃黏膜屏障而發(fā)揮治療作用。因此，人們從未停息對胃黏膜屏障更具保護(hù)作用的新型材料和制劑的研究和探索。本項(xiàng)研究就是以透明質(zhì)酸為基質(zhì)，佐以胃黏膜細(xì)胞營養(yǎng)劑等物質(zhì)而研制的類似天然胃黏膜屏障理化性質(zhì)的一種新型制劑。為了便于表述，暫將該制劑定名為“胃屏復(fù)”。眾所周知，正常胃黏膜屏障是由胃上皮細(xì)胞、泌酸腺的黏液頸細(xì)胞和賁門、幽門腺共同分泌的以糖蛋白和碳酸氫鹽為主要成分的凝膠構(gòu)成。它在胃表面形成厚度約500μm的凝膠層，一方面減少粗糙食物對胃黏膜的機(jī)械性損傷；另一方面有效地保護(hù)胃黏膜免受胃酸和胃蛋白酶的損害。本研究制劑的基質(zhì)透明質(zhì)酸是廣泛存在于動(dòng)物體內(nèi)的一類大分子粘多糖，在溶液中，因其分子存在眾多交聯(lián)鍵而形成分子網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，這就使透明質(zhì)酸溶液同時(shí)具有凝膠彈性和溶液粘性的雙重特性［1］。這種特征與正常胃黏膜屏障的糖蛋白基質(zhì)十分類似。因此，探索和研究透明質(zhì)酸治療胃疾病是對此類大分子粘多糖應(yīng)用領(lǐng)域的新的拓展。目前也尚未查見類似報(bào)道。

1材料與方法

動(dòng)物SD大鼠，雌雄不限，平均體重120g。

研究制劑本研究制劑基質(zhì)為人臍帶透明質(zhì)酸，本室提取，理化特性達(dá)到制劑標(biāo)準(zhǔn)［2］。其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

動(dòng)物模型復(fù)制及標(biāo)本處理［3］大鼠于實(shí)驗(yàn)前禁食48h，仰縛于鼠板，浸入20℃左右水中，水面高度平劍突。24h后麻醉處死。剖開腹腔，在幽門和十二指腸連接處穿線結(jié)扎。然后通過食道注入%中性福爾馬林8ml到胃內(nèi)，結(jié)扎食道。切斷食道和十二指腸摘出全胃。30min后，沿胃大彎將胃切開，平鋪觀察胃黏膜變化。最后將標(biāo)本固定于5%福爾馬林待切片鏡下觀察。

動(dòng)物胃黏膜損傷程度評級標(biāo)準(zhǔn)有效性判斷0級：胃液清晰，黏膜表面無明顯變化，偶可見部分區(qū)域呈斑片狀發(fā)紅，與周圍黏膜境界不明顯，無出血點(diǎn)。Ⅰ級：胃黏液淡黃，黏膜腫脹，反光增強(qiáng)，多處不規(guī)則片狀和線狀充血發(fā)紅區(qū)，但無明顯出血和黏膜糜爛。Ⅱ級：胃液顏色棕紅，內(nèi)可見小片狀凝血塊。黏膜上皮完整性受損，可見多處散在出血灶，出血點(diǎn)呈咖啡色，直徑多在1mm以下。Ⅲ級：胃液呈黑褐色，內(nèi)有大量凝血塊。表層黏膜剝脫，黏膜面覆蓋片狀新鮮和陳舊出血凝塊，用水沖洗后可見黏膜糜爛面。

實(shí)驗(yàn)組黏膜損傷在Ⅰ級以下為有效；Ⅱ級以上為無效。

實(shí)驗(yàn)分組取動(dòng)物30只，隨機(jī)分成3組，每組10只。即：實(shí)驗(yàn)組、對照組和模型對照組。實(shí)驗(yàn)組在48h禁食后每只用研究制劑3ml灌胃；對照組采用生理鹽水3ml灌胃；模型對照組不做灌胃處理。

切片方法石蠟切片，HE染色。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理對實(shí)驗(yàn)資料收集整理后采用χ2檢驗(yàn)。

2結(jié)果

實(shí)驗(yàn)后不同組別胃黏膜受損程度實(shí)驗(yàn)后3組動(dòng)物胃黏膜損傷外觀形態(tài)變化情況見圖1。

圖1〓“胃屏復(fù)”對應(yīng)激性胃黏膜損傷保護(hù)作用的形態(tài)變化比較

從實(shí)驗(yàn)標(biāo)本可見，實(shí)驗(yàn)組大鼠胃黏膜表面外觀良好，無明顯黏膜糜爛和出血灶，僅在部分新鮮標(biāo)本可觀察到幽門部黏膜腫脹和斑狀充血發(fā)紅區(qū)。而對照組則可見散在出血點(diǎn)和黏膜完整性的破壞。模型對照組大多出現(xiàn)全胃廣泛出血，黏膜表面覆蓋大量凝血塊。根據(jù)上述黏膜損傷評級標(biāo)準(zhǔn)，3組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃黏膜受損的評級情況見表1。

表1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物細(xì)黏膜受損的評級(只)注：與對照組比較P＜

3組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃黏膜損傷評級分布表明，實(shí)驗(yàn)組大多為0級和Ⅰ級，對照組多為Ⅱ級，模型對照組多數(shù)為損傷嚴(yán)重的3級變化。另外，對照組有1只、模型對照組2只動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)過程中死亡。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃黏膜的病理組織學(xué)變化將上述3組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃標(biāo)本分別進(jìn)行病理組織學(xué)觀察，結(jié)果見圖2、3、4。

實(shí)驗(yàn)組大鼠全胃切片觀察可見黏膜完整性良好，未見明顯的糜爛出血灶，部分區(qū)域可見血管擴(kuò)張充血。圖2〓實(shí)驗(yàn)組大鼠胃黏膜病理組織學(xué)變化圖3〓對照組大鼠胃黏膜病理組織學(xué)變化

圖3顯示，對照組大鼠胃黏膜層糜爛出血，完整性破壞，黏膜下層充血，全胃切片可見多發(fā)出血灶。

模型對照組胃切片可見胃黏膜廣泛出血，部分區(qū)域出血深達(dá)黏膜下層，胃黏膜完整性嚴(yán)重破壞。全胃切片可見以幽門竇區(qū)域受損最重。

圖4〓模型對照組大鼠胃黏膜病理組織學(xué)變化

3討論

無論原發(fā)性胃疾病還是繼發(fā)性胃損傷，黏膜屏障的受損和完整性破壞往往是最常見的病理形態(tài)學(xué)變化。因此，探索更為有效的胃黏膜屏障保護(hù)方法和制劑不僅可應(yīng)用于胃疾病治療；而且對于預(yù)防嚴(yán)重創(chuàng)傷、休克、心衰、重癥感染等危重疾病向多系統(tǒng)器官功能衰竭轉(zhuǎn)化也具有十分重要的意義。如前所述，本研究旨在利用透明質(zhì)酸形成分子凝膠而構(gòu)成細(xì)胞周基質(zhì)的特性［4］，模擬和替代受損的胃黏膜糖蛋白基質(zhì)，以達(dá)到保護(hù)胃黏膜屏障的目的。從結(jié)果可見，實(shí)驗(yàn)前灌飼“胃屏復(fù)”研究制劑的實(shí)

驗(yàn)組胃黏膜得到了有效保護(hù)。10只動(dòng)物中有9只黏膜損傷程度處于較輕微的0級或Ⅰ級。而對照組和模型對照組黏膜受損程度均為Ⅱ級和Ⅲ級。以實(shí)驗(yàn)有效性標(biāo)準(zhǔn)判斷，那么“胃屏復(fù)”對胃黏膜損傷保護(hù)的有效率達(dá)到90%。由此表明，以透明質(zhì)酸作為基質(zhì)的研究制劑對胃黏膜損傷的保護(hù)作用十分明顯。這不僅拓寬了透明質(zhì)酸的研究領(lǐng)域，而且還具有重要的開發(fā)應(yīng)用價(jià)值。

本項(xiàng)研究所采用的動(dòng)物模型為應(yīng)激性胃黏膜急性出血性糜爛損傷模型，這是復(fù)制胃黏膜損傷較經(jīng)典實(shí)驗(yàn)方法。其特點(diǎn)是能較好地反映人類應(yīng)激性胃黏膜損傷的病理形態(tài)特征。同時(shí)方法簡單，成功率高，資料顯示該方法成功率達(dá)90%以上［3］。在本項(xiàng)研究中，如果以大鼠胃黏膜損傷Ⅱ級和Ⅲ級為成功，那么模型對照組的成功率為100%。因此該模型不失為研究胃黏膜屏障保護(hù)極具實(shí)用價(jià)值的較好方法。

需要表明，本研究是將透明質(zhì)酸作為胃黏膜屏障保護(hù)基質(zhì)的初步實(shí)驗(yàn)探索。雖然透明質(zhì)酸與胃黏膜屏障中的糖蛋白基質(zhì)都具有粘彈性的共性特征，但前者的外源性加入和后者的內(nèi)源性產(chǎn)生對二者與黏膜表層的附著能力之間是否存在差異，尚缺乏實(shí)驗(yàn)依據(jù)。同時(shí)，透明質(zhì)酸是由葡糖醛酸-N-乙酰氨基葡糖為雙糖單位組成的高分子多糖，而當(dāng)進(jìn)入胃內(nèi)酸性環(huán)境后，其大分子必然逐漸降解為小分子，粘彈性也會隨著分子量的下降而減小，因此如何穩(wěn)定透明質(zhì)酸的分