TNAIA 0220-2023 青貯飼料中9種真菌毒素的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜 質(zhì)譜法

ICS65.120CCSB20

TB團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/NAIA0220-2023青貯飼料中9種真菌毒素的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法Determinationof9MycotoxinsinsilageLiquidchromatography-massspectrometry2023-08-28發(fā)布 2023-08-31實(shí)施寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì) 發(fā)布前言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì)提出并歸口?；刈遄灾螀^(qū)吳忠市利通區(qū)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心、寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì)。本文件為首次發(fā)布。PAGEPAGE1青貯飼料中9種真菌毒素的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法范圍FB1FB2AFB1AFB29種真菌毒素測(cè)定的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜分析方法。9農(nóng)作秸稈，其它類型青貯飼料可參考本文件。規(guī)范性引用文件（有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。原理0.1%甲酸乙腈溶液提取，經(jīng)混合凈化材料萃取凈化后，取適量上清液經(jīng)氮?dú)獯蹈珊笠译嫠芤憾ㄈ?，?jīng)超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，外標(biāo)法定量。試劑與材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水符合GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。乙腈（CH3CN）：色譜純。甲醇（CH4O）：色譜純。氯化鈉（NaCl）：分析純。無水硫酸鎂（MgSO4）：分析純。檸檬酸鈉（C6H5O7Na3）：分析純。檸檬酸二鈉鹽（C6H6Na2O7）：分析純。0.1%80%乙腈溶液（8+2，體積比）20mL80mL乙腈中混勻，加入0.1%甲酸。50%乙腈溶液（5+5，體積比）：50mL50mL乙腈中混勻。FB1（CAS116355-83-0，純度≥98FB2（CAS號(hào)116355-84-1，純度≥97.9%）、伏馬毒素FB3（CAS號(hào)136379-59-4，純度≥98.5%）、脫（CAS99.383-（CAS50722-38-8，純度≥99.015-（CAS88337-96-6，純度≥99.8）、玉米赤霉烯酮（CAS17924-92-4，純度≥99.7）AFB1（CAS1162-65-8，純度≥99.0%）AFB2（CAS7220-81-7，純度≥99.0%）。5.10 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：根據(jù)需要分別吸取適量9種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用乙腈稀釋成1.0μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，-18℃下保存。儀器與設(shè)備高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。6.2 0.01g0.0001g。高速萬能粉碎機(jī)：10000r/min。振蕩器。離心機(jī)：4000r/min。渦旋混合器。氮吹儀。離心管：50mL，塑料。濾膜：0.22μm，有機(jī)相。分析步驟試樣的制備青貯飼料樣品于-18℃冷凍冰箱中保存。試驗(yàn)時(shí)將青貯樣品取出，用高速萬能粉碎機(jī)粉碎，分別置于樣品袋中，-18℃冷凍備用。試樣提取與凈化稱取青貯飼料樣品2.00g（精確至0.01g）于50mL離心管，加入20.00mL提取液（5.7），40min4000r/min3min6.00mL2g無水0.5g0.5g15mL40003min3.00mL15mL1.5mL定容液（5.8）溶30s0.22μm濾膜后，上機(jī)測(cè)定。液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定液相色譜參考條件色譜柱：T3柱，100mm×2.1mm1.8μm，或性能相當(dāng)者。柱溫：40℃。進(jìn)樣量：2μL。1。A：水溶液（0.1%甲酸+5mmol/L乙酸銨B：甲醇（0.1%甲酸）。表1 流動(dòng)相、流速及梯度洗脫參考條件時(shí)間，min流速，mL/min流動(dòng)相A，%流動(dòng)相B，%00.490101.00.485152.00.480206.00.4406010.00.4178311.00.4901013.00.49010質(zhì)譜參考條件a）離子源：電噴霧離子源。b）掃描方式：正離子模式和負(fù)離子模式。c）5500V4500Vd）離子源溫度：550℃。霧化氣、氣簾氣、碰撞氣、輔助加熱氣均為高純氮?dú)?，使用前?yīng)調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測(cè)要求。23。表2 ESI+監(jiān)測(cè)模式分析參數(shù)名稱保留時(shí)間/min定性離子對(duì)/m/z定量離子對(duì)/m/z碰撞能量/eV伏馬毒素FB18.45722.4/334.4722.4/352.4722.4/334.45450伏馬毒素FB29.69706.4/336.51706.4/318.61706.4/336.515054伏馬毒素FB39.15706.4/336.50706.4/318.60706.4/336.505050脫氧雪腐鐮刀菌烯醇3.82297.1/249.1297.1/203.2297.1/249.116213-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇6.07339.2/203.2339.2/231.1339.2/203.2211815-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇6.07339.3/321.2339.3/137.1339.3/321.21219黃曲霉毒素B17.42313.1/285.1313.1/241.1313.1/285.13350黃曲霉毒素B27.19315.1/287.1315.1/259.1315.1/287.13540玉米赤霉烯酮9.74317.1/175.0317.1/273.0317.1/175.0-32-27色譜測(cè)定與確證液和待測(cè)樣液中毒素的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi)。在上述儀器條件下，伏馬毒素FB1FB23-15-B1B2的保留時(shí)間分8.45、9.69、9.15、3.82、6.07、6.07、7.42、7.19、9.74min，多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)色譜圖A4判斷樣品中存在對(duì)應(yīng)的被測(cè)物。表4定性確證相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度>50%20%至50%10%至20%≤10%允許的相對(duì)偏差±20%±25%±30%±50%空白試驗(yàn)除不稱取試樣外，均按上述操作步驟同時(shí)進(jìn)行。結(jié)果計(jì)算和表達(dá)用色譜數(shù)據(jù)處理或按式（1）計(jì)算試樣中各真菌毒素的含量，計(jì)算結(jié)果需將空白值扣除。XACSV1V3ASmV2

……（1）式中：X——試樣中真菌毒素的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；A——試樣中真菌毒素的峰面積；V1——試樣中加入的提取溶液體積，單位為毫升（mL）；V2——分取溶液體積，單位為毫升（mL）；V3——定容溶液體積，單位為毫升（mL）；CS——標(biāo)準(zhǔn)工作液中真菌毒素的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；AS——標(biāo)準(zhǔn)工作液中真菌毒素的峰面積；m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。注：測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。精密度15%。定量限和回收率定量限FB1FB2FB30.050mg/kg、黃曲霉B1B20.00100.103-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、15-0.50mg/kg。回收率本方法的添加濃度和回收率范圍見附錄B。附錄A（資料性）9種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液在青貯飼料基質(zhì)中選擇離子監(jiān)測(cè)LC-MS圖LC-MS圖，見圖A.1。圖A.19種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液在青貯飼料基質(zhì)中選擇離子監(jiān)測(cè)LC-MS圖附錄B（資料性）青貯飼料樣品中添加濃度及回收率范圍9種真菌毒素在青貯飼料中的添加濃度及回收率范圍見表B.1。表B.1 9種真菌毒素在青貯飼料中的添加濃度及回收率范圍（%）名稱添加濃度（mg/kg）回收率范圍（%）RSD(%)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇DON0.573～908.41.091～1023.62.093～1051.53-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇0.587～1045.81.090～1012.62.099～1043.415-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇0.591～1003.51.093～1023.62.095～1011.8玉米赤霉烯酮0.0175～882.00.0686～1033.40.386～921.5黃曲霉毒素AFB10.00182～1024.50.0057