TGDFS 14-2022 木姜葉柯甜茶質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)規(guī)程

ICS67.050CCSX04GDFS廣 東 省 林 學(xué) 會(huì) 團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/GDFS14—2022木姜葉柯甜茶質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)規(guī)程CodeofpracticeonqualitydeterminationofLithocarpuslitseifolius（發(fā)布稿）2022-06-06發(fā)布 2022-06-06實(shí)施廣東省林學(xué)會(huì)??發(fā)布T/GDFS14—2022T/GDFS14—2022II前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由廣東省林學(xué)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：廣東省林業(yè)科學(xué)研究院。本文件主要起草人：曾雷、王頌、徐巧林、王志宏、黃俊彬、陳穎樂、黃文妍、余玉娟。T/GDFS14—2022T/GDFS14—2022PAGEPAGE1木姜葉柯甜茶質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了木姜葉柯(Hance)Chun）甜茶檢測(cè)指標(biāo)、檢測(cè)方法等技術(shù)要求。本文件適用于木姜葉柯甜茶的質(zhì)量測(cè)定。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法《中華人民共和國(guó)藥典（2020年版）》附錄薄層色譜法《中華人民共和國(guó)藥典（2020年版）》附錄高效液相色譜法《中華人民共和國(guó)藥典（2020年版）《中華人民共和國(guó)藥典（2020年版）《中華人民共和國(guó)藥典（2020年版）》附錄浸出物測(cè)定法術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。木姜葉柯甜茶Chun)干燥的葉。原材料主要產(chǎn)地為湖南、江西、重慶、四川、廣西、廣東等?。▍^(qū)）。三葉苷trilobatinCHO，分子量4364。根皮苷phlorizinCHO，分子量4364。檢測(cè)指標(biāo)外觀指標(biāo)木姜葉柯甜茶外觀指標(biāo)見表1。表1 木姜葉柯甜茶外觀指標(biāo)項(xiàng)目指標(biāo)顏色葉片兩面同色或葉背帶蒼灰色，葉片主要顏色可分為綠色與紫色。無(wú)霉變現(xiàn)象。氣味氣味甘，嫩葉有甜味。形狀大多數(shù)呈橢圓形、倒卵狀橢圓形或卵形，很少為狹長(zhǎng)橢圓形，長(zhǎng)8cm～18cm，寬3cm～8cm，頂部漸尖或短突尖，基部楔形至寬楔形，全緣，中脈在葉面凸起，支脈纖細(xì)。質(zhì)地葉無(wú)毛，紙質(zhì)至近革質(zhì)。理化指標(biāo)木姜葉柯甜茶理化指標(biāo)見表2。表2 木姜葉柯甜茶理化指標(biāo)項(xiàng)目指標(biāo)水分含水率（%）總灰分總灰分的含量（%）醇溶性浸出物醇溶性浸出物的含量（%）主要特征成分TLC法：熒光斑點(diǎn)HPLC法:保留時(shí)間、峰面積檢測(cè)方法外觀檢測(cè)理化檢測(cè)執(zhí)行《中國(guó)藥典》（2020年版）附錄水分測(cè)定法規(guī)定的第一法測(cè)定。總灰分執(zhí)行《中國(guó)藥典》（2020年版）附錄灰分測(cè)定法規(guī)定的總灰分測(cè)定法測(cè)定。醇溶性浸出物（2020年版95%乙醇作為溶劑。主要特征成分TLC取本品粉末1.0g，加入60%乙醇溶液30mL超聲處理30min，過(guò)濾，濾液蒸干，加入10mL二級(jí)水使其溶解，過(guò)濾，加入20mL飽和正丁醇溶液振搖提取，用20mL二級(jí)水洗滌轉(zhuǎn)移全部正丁醇提取液到旋轉(zhuǎn)1.0mL1.0g，同法制成對(duì)照藥材溶液。參照《中華人民共和國(guó)藥典》（2020年版）附錄—薄層色譜法，吸取上述兩種溶液各10G為展開劑進(jìn)行展開，取出并晾干，噴以2365nm)下檢視。供試品TLC色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果圖片見附錄圖A.1。HPLC色譜參考條件色譜柱：InetSutainC8(250mm4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈（A）-.04%甲酸（B）梯度洗脫（表2）；流速：0.8mL·mi；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：5.0μL。檢測(cè)波長(zhǎng)：根皮苷（85n）三葉苷（285nm）?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)品色譜圖見圖B.1。表3 梯度洗脫流動(dòng)相比例時(shí)間（min）A(%)B(%)0.01287214.00287230.00406035.00287235.0159540.0059540.01287245.002872標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備精確稱取真空干燥至恒定質(zhì)量的根皮苷對(duì)照品20.0mg、三葉苷19.0mg，分別置于10mL容量瓶中，加入70%乙醇溶解并定容，搖勻，即得根皮苷和三葉苷單一標(biāo)準(zhǔn)品母液。精密吸取兩種單一標(biāo)準(zhǔn)品母液0.15mL，置于10mL容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，搖勻，得混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。供試品溶液制備將樣品干燥、粉碎、研磨，樣品過(guò)65目篩，備用。稱取木姜葉柯樣品粉末0.25g，置于25.0mL具塞錐形瓶中，加入70%乙醇10mL，100W、40kHz條件下超聲提取30min，取出、放冷、定容、搖勻、離心，取上清液1mL置于10mL70%乙醇定容，搖勻，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，取濾液供測(cè)試。木姜葉柯樣品HPLC圖見圖C.1。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制依次精密量取采取5.2.4.2.2方法配制的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.005mL、0.01mL、0.025mL、0.05mL、0.1mL、0.25mL、0.5mL和1.0mL置于1.0mL容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，得系列質(zhì)量濃度溶液。取各個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液各5μL注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積。以樣品濃度XY為0.9999，線性范圍0.15μg/mL–29.40μg/mL；三葉苷Y＝1.5891X-0.8743，為0.9998，線性范圍0.14μg/mL–27.93μg/mL。同法逐級(jí)稀釋，分別以信噪比S/N＝3和S/N＝10的進(jìn)樣濃度確定檢測(cè)限和定量限。樣品測(cè)定分別取木姜葉柯粗粉，按5.2.4.2.3的方法每份樣品平行制備3份供試品溶液，按5.2.4.2.1的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，利用5.2.4.2.4的方法建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算各供試品中根皮苷、三葉苷成分的含量。建檔附 錄 A（資料性）TLCA-紫外燈（365nm）；DY為大葉甜茶；DZ為甜茶對(duì)照品；SYG為三葉苷標(biāo)準(zhǔn)品；GPG為根皮苷標(biāo)準(zhǔn)品；ZY為紫葉甜茶；JY為尖葉甜茶圖A.1木姜葉柯薄層層析