金匱腎氣丸對羥基脲致小鼠腎陽虛的影響

金匱腎氣丸對羥基脲致小鼠腎陽虛的影響

金桂腎丸是經(jīng)典的補陽方。它由地黃、炒山藥、山茱萸、腹瀉、椰子葉、附子、肉桂等藥物組成。具有加熱、補充腎陽、益氣、固本的功效。它也用于臨床治療各種疾病。本實驗以羥基脲造成小鼠腎陽虛模型,以金匱腎氣丸作為治療藥,從多種指標觀察本方對腎陽虛小鼠的藥理作用,為其臨床應(yīng)用提供一定的實驗依據(jù)。1實驗材料1.1動物1.2金盞腎丸6g丸-11.3基質(zhì)溶膠片1.4sod測試盒1.5儀器2方法和結(jié)果2.1模型小鼠皮膚溫度和自主活動次數(shù)的測定昆明種♂小鼠90只,體重20～24g,分為6組,即正常對照組、模型組、陽性藥組和給藥高、中、低劑量組。給藥組分別ig給予金匱腎氣丸混懸液5.0、2.5和1.25g生藥·kg-1,正常組和模型組ig給予同體積的蒸餾水,陽性藥組ig給予右歸丸10.0g·kg-1,小鼠均ig給藥21d,在造模過程中記錄小鼠死亡數(shù)。并于給藥的第8～21天,除正常對照組外,各組動物在ig給水或藥物的同時ig給予羥基脲300mg·kg-1。于末次給藥后1h,采用數(shù)字溫度計測定并記錄各組動物尾巴中段的皮表溫度,采用曠野法測定小鼠自主活動的次數(shù):將小鼠置于圓形無蓋箱中,箱底劃分為36個等格,箱上方約100cm處掛一150W燈泡,亮燈時進行實驗,記錄小鼠放入箱中4min內(nèi)在箱內(nèi)活動的格數(shù)。試驗前一天加水,采用常溫下,取65cm×35cm×25cm規(guī)格的水浴鍋,將小鼠負重(1g橡皮泥/10g體重)放入水中游泳,并開始計時,以小鼠頭部沉入水中10s不能浮出水面為小鼠游泳時間。結(jié)果見表1。表1可見,金匱腎氣丸給藥組小鼠與模型組小鼠相比,高、中劑量組皮溫明顯升高(P<0.05～0.01);各組動物自主活動次數(shù)明顯增加(P<0.05～0.01);高劑量組的負重游泳時間顯著延長(P<0.01),中、小劑量組雖有延長,但無統(tǒng)計學(xué)差異。2.2模型小鼠的存活率測定昆明種♂小鼠110只,體重20～24g,隨機分為6組,即正常對照組、模型組、陽性藥組和給藥高、中、低劑量組。腎陽虛模型制作、分組給藥方法及時間、劑量同實驗2.1,并在造模過程中記錄小鼠死亡數(shù)。于末次給藥后1h,將各組小鼠皮毛淋水后置于籠中,放入-18℃低溫冰箱中,40min后取出,統(tǒng)計各組小鼠存活數(shù),計算存活百分率,用x2檢驗進行統(tǒng)計,結(jié)果可見高劑量組的動物死亡率與模型組比較雖無顯著性差異,但卻呈現(xiàn)明顯下降趨勢。(見表2)2.3血清中sod、mda、gsh-px水平昆明種♂小鼠110只,體重20～24g,隨機分為6組,即正常對照組、模型組、陽性藥組和給藥高、中、低劑量組。腎陽虛模型制作、分組給藥方法及時間、劑量同實驗2.1,并在造模過程中記錄小鼠死亡數(shù),于末次給藥后1h測定血清中SOD、MDA、GSH-PX水平及血清中睪酮含量。血清中SOD、MDA、GSH-PX的測定參照試劑盒說明書操作(結(jié)果見表3)。血清中睪酮含量測定采用時間分辨熒光分析技術(shù),以多標記檢測儀測定各組動物血清中睪酮含量,具體操作參照試劑盒說明書(結(jié)果見表4)。由表3可見,金匱腎氣丸給藥后高、中劑量組小鼠血清中SOD活力明顯增強、MDA含量明顯下降(P<0.05～0.01);高劑量組的GSH-PX活力明顯升高(P<0.05)。表4可見,金匱腎氣丸高、中劑量組小鼠血清中睪酮水平明顯高于模型組(P<0.01),且已恢復(fù)到正常水平。2.4動物死亡計數(shù)以上幾個實驗中,其分組方法、給藥劑量及天數(shù)、造模手段等均相同,且造模過程中均出現(xiàn)動物死亡,現(xiàn)將幾批動物死亡總數(shù)累積,計算其死亡率,統(tǒng)計結(jié)果見表5。結(jié)果可見,金匱腎氣丸高劑量組小鼠在羥基脲造模過程中死亡率明顯低于模型組(P<0.01)。3金保持和血清中sod、gsh-px活力,為小鼠腎腎陽虛模型組小鼠與正常對照組小鼠相比,其皮溫降低,自主活動次數(shù)明顯減少,負重游泳時間明顯縮短,耐寒能力明顯下降,血清中SOD、GSH-PX活力顯著降低,MDA含量顯著升高,血清中睪酮含量明顯降低,且小鼠死亡率明顯高于給藥組。而金匱腎氣丸給藥組小鼠與模型組相比,皮溫明顯升高,自主活動次數(shù)明顯增加,負重游泳時間顯著延長,耐寒能力明顯提高,血清中睪酮含量明顯升高,且高劑量組小鼠死亡率明顯降低,表明本品有一定的溫腎助陽作用;給藥組血清中SOD、GSH-PX活力顯著升高,MDA含量顯著降低,則表明服用本品后,小鼠的體內(nèi)過氧化自由基清除能力增強。以上結(jié)果表明金匱腎氣丸對于羥基脲引起的小鼠腎陽虛有明顯的防治作用,這就為金匱腎氣丸這一經(jīng)典名方溫補腎陽的傳統(tǒng)功效提供了一定的實驗依據(jù)。昆明種小白鼠,♂,清潔級,購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院上海實驗動物中心,合格證號:中科(滬)動管第99004號。批號20011115,江蘇省中醫(yī)藥研究院制劑研究室提供。用時加蒸餾水研勻,配成適宜濃度的混懸液供ig給藥。右歸丸(1.8g·10丸-1):批號20010302,河南省宛西制藥股份有限公司提供。用時加蒸餾水研勻,配成適宜濃度的混懸液供ig給藥。魯衛(wèi)藥準字(1995)第024014號,批號20010401,濟南制藥廠生產(chǎn),用時研細加適量蒸餾水配成所需濃度的混懸液備用(批號20020112)、MDA測試盒(批號20020123)、GSH-PX測試盒(批號20020116)均購自南京建成生物工程研究所。睪酮