蛋白質(zhì)的分離、純化和相對(duì)分子量的測(cè)定_第1頁(yè)
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蛋白質(zhì)的分離、純化和相對(duì)分子量的測(cè)定_第3頁(yè)
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Protein

蛋白質(zhì)的分離純化一、蛋白質(zhì)分離純化的一般原則總目標(biāo)：增加制品純度或比活1.預(yù)處理：因動(dòng)/植物/細(xì)菌而異2.粗提：采用鹽析/等電點(diǎn)沉淀/有機(jī)溶劑等方法將蛋白質(zhì)沉淀。3.精制：采用電泳技術(shù)和層析技術(shù)是不同蛋白質(zhì)分離。4.結(jié)晶二、蛋白質(zhì)的分離純化方法（一）根據(jù)分子大小不同的純化方法

1、透析和超過濾利用蛋白質(zhì)分子不能透過半透膜將其與小分子物質(zhì)分開半透膜為玻璃紙或纖維素材料血液透析小分子溶出小分子被帶出透析機(jī)透析液加壓血液2、密度梯度（區(qū)帶）離心60000~80000轉(zhuǎn)/分重力60萬～80萬倍3凝膠過濾

凝膠過濾層析也稱分子篩層析、排阻層析。是利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小不同來進(jìn)行分離。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)，多是交聯(lián)的聚糖(如葡聚糖或瓊脂糖)類物質(zhì)，小分子物質(zhì)能進(jìn)入其內(nèi)部，流下來速度慢，而大分子物質(zhì)卻被排除在外部，下來的速度快，當(dāng)一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時(shí)，溶液中的物質(zhì)就按不同分子量篩分開了。

3、凝膠過濾（二）利用溶解度差別的純化方法1.等電點(diǎn)沉淀調(diào)整溶液pH不同蛋白在各自pI處依次沉淀

2.鹽溶和鹽析3.有機(jī)溶劑分級(jí)分離法降低介電常數(shù)爭(zhēng)奪水化膜（三）根據(jù)蛋白質(zhì)帶電性質(zhì)分離1電泳各種蛋白質(zhì)都有其特有的等電點(diǎn)，在高于其等電點(diǎn)PH的緩沖液中，將形成帶負(fù)電荷的質(zhì)點(diǎn)，在電場(chǎng)中向正極泳動(dòng)，在同一條件下，不同蛋白質(zhì)帶電荷有差異，分子量大小也不同，所以泳動(dòng)速度不同。（三)根據(jù)電荷不同的分離方法—電泳原理：蛋白質(zhì)在非等

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