生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)?zāi)磻?yīng)市公開課獲獎?wù)n件省名師優(yōu)質(zhì)課賽課一等獎?wù)n件

生物技術(shù)試驗(yàn)—凝集反應(yīng)免疫學(xué)教研室劉平1/22凝集反應(yīng)【試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)】1．了解凝集反應(yīng)原理、基本類型及其臨床意義。2．掌握玻片凝集試驗(yàn)、間接凝集試驗(yàn)試驗(yàn)方法和結(jié)果分析。2/22【概述】

在一定濃度電解質(zhì)溶液中，顆粒性抗原與對應(yīng)抗體結(jié)合后，出現(xiàn)肉眼可見凝集塊，稱為凝集反應(yīng)。

抗原特異性抗體特異結(jié)合電解質(zhì)＋抗原抗體復(fù)合物3/22 凝集反應(yīng)是一個定性檢測方法，也能夠進(jìn)行半定量檢測。因?yàn)槟磻?yīng)方法簡便，當(dāng)前在臨床檢驗(yàn)中仍被廣泛應(yīng)用。 凝集反應(yīng)可分為直接凝集反應(yīng)和間接凝集反應(yīng)。

4/22一、直接凝集反應(yīng)細(xì)菌、細(xì)胞等顆粒性抗原，在適當(dāng)電解質(zhì)參加下可直接與對應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集，稱為直接凝集反應(yīng)。 慣用凝集試驗(yàn)有玻片法和試管法兩種。

5/22玻片凝集試驗(yàn)——ABO血型判定玻片凝集試驗(yàn)為定性試驗(yàn)，普通用已知抗體作為診療血清，與受檢顆?？乖?，如菌液或紅細(xì)胞抗原各加一滴在玻片上，混勻，數(shù)分鐘后即可用肉眼觀察凝集結(jié)果，出現(xiàn)凝集顆粒為陽性。 此法簡便，快速，適合用于從病人標(biāo)本中分離得到菌種診療或分型，也可用于紅細(xì)胞ABO血型判定。6/22【試驗(yàn)原理】人類ABO血型抗原主要有A和B兩種，依據(jù)紅細(xì)胞表面這兩種抗原有沒有可把血型分為四種。據(jù)此，將抗A和抗B抗體分別與待測紅細(xì)胞混合，抗A或（和）抗B抗體與紅細(xì)胞表面上對應(yīng)抗原結(jié)合而引發(fā)紅細(xì)胞凝集，據(jù)其凝集情況便可判定出受試者血型。ABO血型劃分

紅細(xì)胞表面Ag血清中AbA型A抗BB型B抗AAB型A、B—、—O型—、—抗A、抗B7/22【試驗(yàn)材料】1．ABO血型判定試劑盒內(nèi)含抗A分型試劑和抗B分型試劑各1支。2．一次性采血針1枚、潔凈玻片2塊、75％酒精、滅菌棉簽。

8/223．用酒精棉簽消毒被檢者手指尖端，以采血針刺破皮膚，稍加擠壓，使血液流出。用另一載玻片一端取適量血液加入抗抗A分型試劑，并混勻；用另一端再取適量血液加入抗抗B分型試劑，并混勻。用干棉簽止血。4．觀察紅細(xì)胞有沒有凝集發(fā)生。如有凝集，可見紅細(xì)胞凝集成塊；無凝集，紅細(xì)胞呈均勻分散。判定結(jié)果后把玻片放入消毒液中?！驹囼?yàn)方法】1．取潔凈載玻片1塊，并標(biāo)識（如圖）2．將抗A、B分型試劑分別加1滴于標(biāo)識有A、B玻片兩側(cè)。AB抗A抗B9/22【試驗(yàn)結(jié)果】10/22二、間接凝集反應(yīng)

將可溶性抗原或抗體先吸附于適當(dāng)大小顆粒性載體表面（這種載體與免疫無關(guān)），然后與對應(yīng)抗體或抗原結(jié)合，在適量電解質(zhì)存在下，出現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象，稱為間接凝集反應(yīng)。 依據(jù)載體不一樣可將間接凝集反應(yīng)分為：間接血細(xì)胞凝集試驗(yàn)、間接乳膠凝集試驗(yàn)（及間接乳膠凝集抑制試驗(yàn)）和金黃色葡萄球菌協(xié)同凝集試驗(yàn)等。11/22載體可溶性抗原致敏致敏顆粒NS凝集顆粒

間接凝集試驗(yàn)示意圖原理12/22載體種類及其處理方法紅細(xì)胞：

新鮮紅細(xì)胞吸附蛋白質(zhì)能力差。普通先醛化后應(yīng)用。聚苯乙烯膠乳顆粒：

可物理吸附蛋白質(zhì)；常制備帶有化學(xué)活性基團(tuán)顆粒13/22間接凝集抑制試驗(yàn)——妊娠試驗(yàn)【試驗(yàn)原理】可溶性抗原致敏乳膠顆粒與對應(yīng)抗體作用可使乳膠顆粒凝集，此為間接乳膠凝集試驗(yàn)。若使抗體先與可溶性抗原作用，再加入該抗原致敏乳膠顆粒，則乳膠凝集被抑制，此為間接乳膠凝集抑制試驗(yàn)。孕婦尿中絨毛膜促性腺激素（HCG）含量顯著增高。HCG與抗HCG抗體先作用后，再加入HCG致敏乳膠顆粒，不出現(xiàn)凝集反應(yīng)，此為妊娠試驗(yàn)陽性；非孕婦尿中HCG含量不足以消耗掉抗HCG抗體，抗體與后加入HCG致敏乳膠結(jié)合展現(xiàn)凝集現(xiàn)象，則妊娠試驗(yàn)陰性。14/2215/22間接凝集抑制試驗(yàn)待測抗原已知抗體特異結(jié)合抗原抗體復(fù)合物NS＋致敏顆粒無凝集顆粒陽性16/22間接凝集抑制試驗(yàn)待測抗原已知抗體無結(jié)合抗原抗體分散NS＋致敏顆粒有凝集顆粒陰性17/22【試驗(yàn)材料】1．妊娠診療試劑盒：內(nèi)含抗血清（抗HCG）、乳膠抗原（HCG致敏）各一支2．1號尿、2號尿。3．有格玻片和毛細(xì)吸管等。18/22【試驗(yàn)方法】1．在玻片第1、第2內(nèi)分別加1滴1號尿、2號尿。2．每格內(nèi)加入妊娠診療試劑抗血清1滴。輕輕搖動1~2min使其充分混勻。3．每格加入乳膠抗原1滴，輕輕搖動玻片3~5min后觀察結(jié)果，統(tǒng)計(jì)各標(biāo)本有沒有凝集現(xiàn)象。19/22【試驗(yàn)結(jié)果】孕婦尿格呈均勻渾濁乳狀液，無凝集，妊娠試驗(yàn)陽性；正常尿格出現(xiàn)白色細(xì)小凝集物，隨時間延長凝集物變成小塊狀，妊娠試驗(yàn)陰性。待檢尿若為乳狀液，妊娠試驗(yàn)陽性；若出現(xiàn)凝集，則妊娠試驗(yàn)陰性。12孕婦尿正常尿20/22【注意事項(xiàng)】1．試驗(yàn)所用診療試劑用前應(yīng)充分搖勻，而且應(yīng)在使用期內(nèi)使用。2．加樣用滴管及混勻用牙簽不能共用。3．加樣不宜太多，玻片應(yīng)一直保持水平，以防兩格之反應(yīng)液相混。21/22【試驗(yàn)思索】