分析化學(xué)：分化紫外可見分光光度法終

儀器分析（InstrumentalAnalysis

）參考書分析化學(xué)手冊（周同惠，汪爾康，陸婉珍院士等編，化學(xué)工業(yè)出版社）分析化學(xué)(上、下冊)(第5版)（武漢大學(xué)出版社）光譜分析儀器使用與維護(hù)（劉崇華編，化學(xué)工業(yè)出版社）氣相色譜新技術(shù)（周良模等編著，科學(xué)出版社）色譜理論基礎(chǔ)（盧佩章等科學(xué)出版社）色譜技術(shù)叢書（任惠敏主編，化學(xué)工業(yè)出版社）萬方數(shù)據(jù)庫（）中國期刊網(wǎng)（/index.htm）中國色譜網(wǎng)站（）色譜網(wǎng)站（）常用搜索引擎：百度（）google學(xué)術(shù)）數(shù)據(jù)庫資源現(xiàn)代儀器分析方法的基本原理現(xiàn)代儀器分析儀器的基本結(jié)構(gòu)現(xiàn)代分析儀器的使用和維護(hù)教學(xué)目標(biāo)教學(xué)重點(diǎn)和難點(diǎn)重點(diǎn)：各類儀器分析方法的基本原理，儀器基本結(jié)構(gòu)、使用方法、日常維護(hù)保養(yǎng)，定性定量計(jì)算方法，分析操作條件的選擇與優(yōu)化。難點(diǎn)：儀器分析方法基本原理，分析操作條件的選擇與優(yōu)化。

學(xué)習(xí)方法

動手動腦，以極大的興趣，積極與課堂互動利用各種學(xué)習(xí)資源自學(xué)，擴(kuò)大知識面，通過思考、分析完成各類練習(xí)

1.緒論容量分析、儀器分析傳感可口可樂酸度的測定?檸檬酸、檸檬酸鈉、咖啡因、苯甲酸鈉、胭脂紅、檸檬黃6種添加劑，而苯甲酸鈉被認(rèn)為可能與咖啡因產(chǎn)生作用，生成國家一類精神藥品安納咖。胭脂紅具有致癌和致突變作用。

UV-VIS法紫外分光光度法Fe3+對MoS2熒光的影響

熒光光譜感謝：閆安、陳程云、林驍、張晗、張倩炎，提供的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)！血鐵濃度檢測多家知名品牌水龍頭含鉛量超標(biāo)

市場上50%的品牌含鉛量超標(biāo)，而從外觀無法辨別。鉛會損害人的神經(jīng)、造血和生殖系統(tǒng)，對兒童危害更大，會影響其生長發(fā)育和智力發(fā)展，嚴(yán)重者造成癡呆。

提醒：別喝滯留水龍頭里的隔夜水如何檢測鉛的含量呢？物質(zhì)燃燒會發(fā)光火藥是我國四大發(fā)明之一物質(zhì)原子的發(fā)射

PEICP原子發(fā)射光譜儀

SK-Ⅱ護(hù)膚潔面霜、SK-Ⅱ活膚抗皺修護(hù)膜、SK-Ⅱ重點(diǎn)凈白精華液分別檢出鉻、鎘等有毒金屬。

“中毒門”SK-Ⅱ事件原子吸收光譜-AAS倩碧、蘭蔻、迪奧、雅詩蘭黛健康元藥業(yè)集團(tuán)如何檢測呢？

7-氨基頭孢烷酸合成各種頭孢菌素的關(guān)鍵性中間體

浙江寧海查獲了大量地溝油，但送檢的樣品中，基本都合適！

拉曼光譜CD光譜殺蟲劑電化學(xué)可口可樂酸度的測定感謝：張倩炎、陳程云、張晗、林驍、閆安提供的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)！乳液油石脂類保濕產(chǎn)品礦物油類多環(huán)芳烴粉底礦物油類

GC氣相色譜

禁用藥物有138種，體內(nèi)代謝后要檢測的物質(zhì)近400種；而尿液中還有很多干擾物質(zhì)。

要求查出1毫升尿液中含有的2納克興奮劑。

（相當(dāng)于5個標(biāo)準(zhǔn)游泳池的水量中放入一小勺糖）。含量很低！種類比較多，定性定量困難。儀器分析方法討論不能用化學(xué)分析法，為什么？相關(guān)樣本中檢測對象含量很低；種類比較多，定性定量困難。通常借助于一種特殊的儀器高效液相相色譜儀對尿液中興奮劑分析檢測問題：色譜如何完成性質(zhì)接近混合物的分離？學(xué)生討論不同的人逛同一條街，有的人需3小時，有的人卻只要15min學(xué)生總結(jié)基于商店對人的吸引力。大洋味中味東百真維斯以純邦威雌二醇己烯雌酚炔諾酮雞肉中雌性激素HPLC圖鹽酸克倫特羅（瘦肉精）健美豬

高效液相色譜HPLC應(yīng)用領(lǐng)域社會：體育（興奮劑）、生活產(chǎn)品質(zhì)量（魚新鮮度、食品添加劑、農(nóng)藥殘留量）、環(huán)境質(zhì)量（污染實(shí)時檢測）、法庭化學(xué)（DNA技術(shù)，物證）化學(xué)：新化合物的結(jié)構(gòu)表征；分子層次上的分析方法；生命科學(xué)：DNA測序；活體檢測；環(huán)境科學(xué)：環(huán)境監(jiān)測；污染物分析；材料科學(xué)：新材料，結(jié)構(gòu)與性能；藥物：天然藥物的有效成分與結(jié)構(gòu)，構(gòu)效關(guān)系研究；外層空間探索：微型、高效、自動、智能化儀器研制。儀器分析的發(fā)展趨勢1、微型化、自動化、智能化。手持式電化學(xué)生物傳感器芯片實(shí)驗(yàn)室

2、遙測、動態(tài)、無損分析遠(yuǎn)程醫(yī)療敦煌莫高窟壁畫無損分析3、聯(lián)用技術(shù)氣質(zhì)聯(lián)用液質(zhì)聯(lián)用4、重點(diǎn)在生命科學(xué)核磁共振蛋白芯片一、儀器分析法的定義

采用比較復(fù)雜或特殊的儀器設(shè)備，通過測量物質(zhì)的某些物理或物理化學(xué)性質(zhì)的參數(shù)及其變化來獲取物質(zhì)的化學(xué)組成、成分含量及化學(xué)結(jié)構(gòu)等信息的一類方法。這種方法要用到特殊的儀器設(shè)備!

儀器分析法的分類光學(xué)分析法

原子發(fā)射光譜法（AES）原子吸收光譜法（AAS）紫外-可見光分光光度法（UV－Vis）紅外吸收光譜法（FT－IR）核磁共振波譜法（NMR）

X射線衍射法（X－ray）原子熒光光譜法（AFS）等電化學(xué)分析法

電位分析法電導(dǎo)分析法庫侖分析法等

儀器分析法的分類(續(xù))色譜分析法

氣相色譜分析法液相色譜分析法其它分析法

質(zhì)譜法熱分析

儀器分析法的特點(diǎn)分析速度快；靈敏度高；容易實(shí)現(xiàn)在線分析和遙控檢測；

易于實(shí)現(xiàn)自動化與智能化；能獲取物質(zhì)結(jié)構(gòu)、組分價態(tài)、元素在微區(qū)的空間分布等諸多信息；操作簡便，樣品用量少

儀器分析法的局限性儀器設(shè)備復(fù)雜，價格高，對維護(hù)及環(huán)境要求比較高；儀器分析是一種相對分析方法，一般需要用已知組成標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)來對照；相對誤差比較大，一般不適用于常量和高含量分析；

教學(xué)目標(biāo)關(guān)鍵能力能按說明書制定儀器操作規(guī)程；操作儀器工作軟件；對新產(chǎn)品能設(shè)計(jì)合理的分析方案，完成分析任務(wù)；能發(fā)現(xiàn)并解決分析過程中出現(xiàn)的一般性技術(shù)問題。專門技術(shù)能力現(xiàn)代儀器分析方法的基本原理現(xiàn)代儀器分析方法的實(shí)驗(yàn)技術(shù)現(xiàn)代分析儀器的使用和維護(hù)第四章紫外-可見分光光度法（Ultravioletandvisiblespectrophotometry,UV/VIS）中國的《墨經(jīng)》

墨子和他的學(xué)生做了世界上最早的“小孔成像”實(shí)驗(yàn)，并對實(shí)驗(yàn)結(jié)果作出了精辟的見解?！赌?jīng)》中對此解釋道：“景光之人煦若射，下者之入也高，高者之入也下?！?/p>

這是對光沿直線傳播的第一次科學(xué)解釋。牛頓光學(xué)實(shí)驗(yàn)其實(shí)還有肉眼看不到的紫外光！

德國科學(xué)家里特，1801年在研究光譜的不同部分對氯化銀的作用時發(fā)現(xiàn)：隨著向紫光方向移動，化學(xué)活性增加，在紫外部分，仍存在著一種不可見射線，使氯化銀變黑，從而發(fā)現(xiàn)了紫外線。

1為什么上述溶液呈現(xiàn)不同的顏色？兩個問題2將溫度計(jì)置不同光區(qū)，有何現(xiàn)象？而后將KMnO4溶液置于溫度計(jì)和光區(qū)之間，又有何現(xiàn)象？

由于溶液對光的選擇性吸收引起的，溶液呈現(xiàn)的是被吸收物質(zhì)的互補(bǔ)色。單色光復(fù)色光互補(bǔ)光原因

如何更精確地(或通過什么儀器）說明物質(zhì)具有選擇性吸收不同波長的光的性質(zhì)？

問題（續(xù)）1-c(KMnO4)=1.56×10-4mol·L-12-c(KMnO4)=3.12×10-4mol·L-13-c(KMnO4)=4.68×10-4mol·L-1

KMnO4溶液的光吸收曲線吸收曲線測定方法最大吸收峰第一節(jié)

光學(xué)分析概論一、電磁輻射和電磁波譜二、光學(xué)分析法及其分類三、光譜法儀器——分光光度計(jì)赫茲----德國物理學(xué)家

赫茲對人類偉大的貢獻(xiàn)是用實(shí)驗(yàn)證實(shí)了電磁波的存在，發(fā)現(xiàn)了光電效應(yīng)。

1888年，成了近代科學(xué)史上的一座里程碑。開創(chuàng)了無線電電子技術(shù)的新紀(jì)元。赫茲對人類文明作出了很大貢獻(xiàn)，正當(dāng)人們對他寄以更大期望時，他卻于1894年因血中毒逝世，年僅36歲。為了紀(jì)念他的功績，人們用他的名字來命名各種波動頻率的單位，簡稱“赫”。一、電磁輻射和電磁波譜1．電磁輻射（電磁波，光）：以巨大速度通過空間、

不需要任何物質(zhì)作為傳播媒介的一種能量。2．電磁輻射的性質(zhì)：具有波、粒二向性波動性：粒子性：vEB實(shí)驗(yàn)測得真空中光速

高能輻射區(qū)γ射線能量最高，來源于核能級躍遷

χ射線來自內(nèi)層電子能級的躍遷光學(xué)光譜區(qū)紫外光來自原子和分子外層電子能級的躍遷可見光紅外光來自分子振動和轉(zhuǎn)動能級的躍遷波譜區(qū)微波來自分子轉(zhuǎn)動能級及電子自旋能級躍遷無線電波來自原子核自旋能級的躍遷3．電磁波譜：電磁輻射按波長順序排列，稱~。γ射線→

X射線→紫外光→可見光→紅外光→微波→無線電波波長長電磁波譜1031061091012101510221031001061091013105102HZ1KHZ1MHZ1GHZ1T1km1m1cm11nmA01μmX射線紫外線可見光紅外線微波高頻電視調(diào)頻廣播雷達(dá)無線電射頻電力傳輸射線γ頻率波長二、光學(xué)分析法及其分類（一）光學(xué)分析法依據(jù)物質(zhì)發(fā)射的電磁輻射或物質(zhì)與電磁輻射相互作用而建立起來的各種分析法的統(tǒng)稱~。（二）分類：

1．光譜法：利用物質(zhì)與電磁輻射作用時，物質(zhì)內(nèi)部發(fā)生量子化能級躍遷而產(chǎn)生的吸收、發(fā)射或散射輻射等電磁輻射的強(qiáng)度隨波長變化的定性、定量分析方法

按能量交換方向分吸收光譜法發(fā)射光譜法按作用結(jié)果不同分原子光譜→線狀光譜分子光譜→帶狀光譜續(xù)前2．非光譜法：利用物質(zhì)與電磁輻射的相互作用測定電磁輻射的反射、折射、干涉、衍射和偏振等基

本性質(zhì)變化的分析方法分類：折射法、旋光法、比濁法、χ射線衍射法3．光譜法與非光譜法的區(qū)別：光譜法：內(nèi)部能級發(fā)生變化

原子吸收/發(fā)射光譜法：原子外層電子能級躍遷分子吸收/發(fā)射光譜法：分子外層電子能級躍遷非光譜法：內(nèi)部能級不發(fā)生變化僅測定電磁輻射性質(zhì)改變續(xù)前（三）發(fā)射光譜（四）吸收光譜例：γ-射線；x-射線；熒光例：原子吸收光譜，分子吸收光譜三、光譜法儀器——分光光度計(jì)主要特點(diǎn)：五個單元組成光源單色器樣品池檢測器記錄裝置單波長單光束分光光度計(jì)0.57光源單色器吸收池檢測器顯示輻射源分光系統(tǒng)檢測系統(tǒng)目視比色法標(biāo)準(zhǔn)系列未知樣品特點(diǎn)利用自然光比較吸收光的互補(bǔ)色光準(zhǔn)確度低（半定量）不可分辨多組分方法簡便，靈敏度高早期的顯示方法第二節(jié)紫外-可見吸收光譜一、紫外-可見吸收光譜的產(chǎn)生二、紫外-可見吸收光譜的電子躍遷類型三、相關(guān)的基本概念四、吸收帶類型和影響因素五、Lamber-Beer定律六、偏離Beer定律的因素一、紫外-可見吸收光譜的產(chǎn)生1．分子吸收光譜的產(chǎn)生——由能級間的躍遷引起能級：電子能級、振動能級、轉(zhuǎn)動能級躍遷：電子受激發(fā)，從低能級轉(zhuǎn)移到高能級的過程續(xù)前

2．分子吸收光譜的分類：

分子內(nèi)運(yùn)動涉及三種躍遷能級，所需能量大小順序3．紫外-可見吸收光譜的產(chǎn)生

由于分子吸收紫外-可見光區(qū)的電磁輻射，分子中價電子（或外層電子）的能級躍遷而產(chǎn)生（吸收能量=兩個躍遷能級之差）若用一連續(xù)的電磁輻射照射樣品分子，將照射前后的光強(qiáng)度變化轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柌⒂涗浵聛?，就可得到光?qiáng)度變化對波長的關(guān)系曲線，即為分子吸收光譜紫外可見吸收光譜示意圖美洛昔康UV

分子軌道理論：

當(dāng)兩個原子結(jié)合，組成共價鍵時，原子中參與成鍵的電子組成新的分子軌道，兩個成鍵原子的原子軌道組成一個能量較低的成鍵軌道和一個能量較高的反鍵軌道。同時由于電子對組成共價鍵可以分為σ鍵和π鍵二、紫外-可見吸收光譜的電子躍遷類型價電子：σ電子→飽和的σ鍵

π電子不飽和的π鍵

n電子O,N,S,X紫外可見吸收光譜是由分子中價電子能級躍遷產(chǎn)生的——這種吸收光譜取決于價電子的性質(zhì)

1.電子類型形成單鍵的σ電子C-H、C-C

形成雙鍵的π電子C=C、C=O

未成對的孤對電子n電子C=O：

例：COHnpsH軌道：電子圍繞原子或分子運(yùn)動的幾率軌道不同，電子所具有能量不同基態(tài)與激發(fā)態(tài)：電子吸收能量，由基態(tài)→激發(fā)態(tài)c成鍵軌道與反鍵軌道：σ<π<n<π*<σ*能量n→π*躍遷nσσ→σ*n→σ*π→π*σ*π*π躍遷所需能量為：

σ→σ*

n→σ*

π→π*

n→π*分子中電子的能級和躍遷

電子躍遷類型：

（1）

σ→σ*躍遷成鍵σ電子躍遷到反鍵σ*軌道所產(chǎn)生的躍遷σ→σ*躍遷所需能量很大，相當(dāng)于遠(yuǎn)紫外的輻射能，＜200nm

飽和烴只能發(fā)生σ→σ*躍遷例：CH4

λmax=125nmC2H6

λmax=135nm

常用飽和烴類化合物作紫外可見吸收光譜分析的溶劑sp*s*RKE,Bnp

E只能被真空紫外分光光度計(jì)檢測到(2)

n→σ*躍遷未共用電子對n電子躍遷到反鍵σ*軌道所產(chǎn)生的躍遷，這類躍遷所需能量比σ→σ*躍遷小，200nm左右（150~250nm）吸收概率較小，ε在102~103范圍內(nèi)，中吸收含有未共用電子對的雜原子（N、O、S、X）的飽和化合物發(fā)生n→σ*躍遷;

含-NH2

、-OH、-X例：CH3OHλmax=184nmCH3Brλmax=204nmsp*s*RKE,Bnp

E（3）π→π*躍遷π電子躍遷到反鍵π*軌道所產(chǎn)生的躍遷，這類躍遷所需能量比σ→σ*躍遷小，若無共軛，與n→σ*躍遷差不多。200nm左右吸收強(qiáng)度大，ε在104~105范圍內(nèi)，強(qiáng)吸收若有共軛體系，波長向長波方向移動，相當(dāng)于200~700nm含不飽和鍵的化合物發(fā)生π→π*躍遷

C=O,C=C,C≡C

(4)n→π*躍遷n電子躍遷到反鍵π*軌道所產(chǎn)生的躍遷，這類躍遷所需能量較小，吸收峰在200~400nm左右吸收強(qiáng)度小，ε

＜102，弱吸收含雜原子的雙鍵不飽和有機(jī)化合物

C=SO=N--N=N-

例：丙酮λmax=280nm

n→π*躍遷比π→π*躍遷所需能量小,吸收波長續(xù)前注：紫外光譜電子躍遷類型：n—π*躍遷

π—π*躍遷飽和化合物無紫外吸收電子躍遷類型與分子結(jié)構(gòu)及存在基團(tuán)有密切聯(lián)系根據(jù)分子結(jié)構(gòu)→推測可能產(chǎn)生的電子躍遷類型；根據(jù)吸收譜帶波長和電子躍遷類型→推測分子中可能存在的基團(tuán)（分子結(jié)構(gòu)鑒定）三、相關(guān)的基本概念1．吸收光譜（吸收曲線）：不同波長光對樣品作用不同，吸收強(qiáng)度不同以λ~A作圖next2．吸收光譜特征：定性依據(jù)吸收峰→λmax

吸收谷→λmin

肩峰→λsh

末端吸收→飽和σ-σ躍遷產(chǎn)生圖示back續(xù)前3．生色團(tuán)（發(fā)色團(tuán)）：能吸收紫外-可見光的基團(tuán)有機(jī)化合物：具有不飽和鍵和未成對電子的基團(tuán)

具n電子和π電子的基團(tuán)產(chǎn)生n→π*躍遷和π→π*躍遷躍遷E較低例：C＝C；C＝O；C＝N；—N＝N—

4．助色團(tuán)：本身無紫外吸收，但可以使生色團(tuán)吸收峰加強(qiáng)同時使吸收峰長移的基團(tuán)有機(jī)物：連有雜原子的飽和基團(tuán)例：—OH，—OR，—NH—，—NR2—，—X注：當(dāng)出現(xiàn)幾個發(fā)色團(tuán)共軛，則幾個發(fā)色團(tuán)所產(chǎn)生的

吸收帶將消失，代之出現(xiàn)新的共軛吸收帶，其波

長將比單個發(fā)色團(tuán)的吸收波長長，強(qiáng)度也增強(qiáng)λmax=254nmε

=230λmax=270nmε

=12505．紅移和藍(lán)移：

由于化合物結(jié)構(gòu)變化（共軛、引入助色團(tuán)取代基）或采用不同溶劑后

吸收峰位置向長波方向的移動，叫紅移（長移）6．增色效應(yīng)和減色效應(yīng)

增色效應(yīng)：吸收強(qiáng)度增強(qiáng)的效應(yīng)

減色效應(yīng)：吸收強(qiáng)度減小的效應(yīng)7．強(qiáng)帶和弱帶：

εmax>105→強(qiáng)帶

εmin<103→弱帶

吸收峰位置向短波方向藍(lán)移（紫移，短移）第三節(jié)基本原理*****一、Lamber-Beer定律二、吸光系數(shù)和吸收光譜三、偏離Beer定律的因素四、透光率的測量誤差一、Lamber-Beer定律：吸收光譜法基本定律Lambert-Beer定律是說明物質(zhì)對單色光吸收的強(qiáng)弱與吸光物質(zhì)的濃度（C）和液層厚度（l）間的關(guān)系的定律，是光吸收的基本定律，是紫外-可見光度法定量的基礎(chǔ)。Sample(conc.C)PathlengthlI0It透光率：T吸光度：ALambert-Beer定律:當(dāng)一束平行的單色光通過溶液時，溶液的吸光度(A)與溶液的濃度(C)和光程(b)的乘積成正比。A=E·C·l討論：一．Lamber-Beer定律的適用條件（前提）*****二．該定律適用于固體、液體和氣體樣品三．在同一波長下，各組分吸光度具有加和性應(yīng)用：多組分測定二、吸光系數(shù)和吸收光譜1．吸光系數(shù)的物理意義：單位濃度、單位厚度的吸光度

討論：

1）E=f（組分性質(zhì)，溫度，溶劑，λ）當(dāng)組分性質(zhì)、溫度和溶劑一定，E=f（λ）

2）不同物質(zhì)在同一波長下E可能不同（選擇性吸收）

同一物質(zhì)在不同波長下E一定不同

3）E↑，物質(zhì)對光吸收能力↑,定量測定靈敏度↑→定性、定量依據(jù)續(xù)前2．吸光系數(shù)兩種表示法：

1）摩爾吸光系數(shù)ε：在一定λ下，C=1mol/L，L=1cm時的吸光度

2）百分含量吸光系數(shù)

/比吸光系數(shù)：在一定λ下，C=1g/100ml，L=1cm時的吸光度

3）兩者關(guān)系*****3．吸收光譜（吸收曲線）：λ~A最大吸收最小吸收特征值→定性依據(jù)肩峰末端吸收

安絡(luò)血的分子量為236，將其配成100ml含0.4962mg的溶液，裝于1cm吸收池中，在入max為355nm處測得A值為0.557，試計(jì)算安絡(luò)血的百分吸光系數(shù)和摩爾吸光系數(shù)。例題：解：A=εCL=CL，故=A/CL=0.557/(0.4962×10-3×1)=1122.531(100mL/gcm-1)因ε=M/10=1122.531×236/10=26491.737(Lmol-1cm-1)三、偏離Beer定律的因素依據(jù)Beer定律，A與C關(guān)系應(yīng)為經(jīng)過原點(diǎn)的直線偏離Beer定律的主要因素表現(xiàn)為以下兩個方面（一）光學(xué)因素（二）化學(xué)因素光學(xué)因素：化學(xué)因素：非單色光的影響雜散光的影響反射和散射光的影響非平行光的影響熒光物質(zhì)的影響溶液濃度的影響化學(xué)平衡的改變

紫外-可見分光光度計(jì)由光源、單色器、吸收池、檢測器以及數(shù)據(jù)處理及記錄（計(jì)算機(jī)）等組成。第四節(jié)紫外分光光度計(jì)

工作原理及儀器結(jié)構(gòu)框圖光源：鎢燈或鹵鎢燈——可見光源350~1000nm氫燈或氘燈——紫外光源200~360nm2.

單色器

單色器的作用是將來自光源的光按波長的長短順序分散為單色光并能隨意調(diào)節(jié)所需波長的光。主要由入射狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件、物鏡和出射狹縫組成。(1)入射狹縫用于限制雜散光進(jìn)入單色器；(2)準(zhǔn)直鏡將入射光束變?yōu)槠叫泄馐筮M(jìn)入色散元件；(4)物鏡將出自色散元件的平行光聚焦于出口狹縫；(5)出射狹縫用于限制通帶寬度。(3)色散元件把混合光分散為單色光，是單色器的關(guān)鍵部分；常用的色散元件有：棱鏡、光柵、濾光片。3．吸收池：液池，樣品池

玻璃——能吸收UV光，僅適用于可見光區(qū)

石英——不能吸收紫外光，適用于紫外和可見光區(qū)要求：匹配性（對光的吸收和反射應(yīng)一致）如何配對能達(dá)到匹配性？000000續(xù)前5．記錄裝置：訊號處理和顯示系統(tǒng)光電池光電管光電倍增管二極管陣列檢測器4．檢測器：將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柕难b置光電倍增管光電倍增管是檢測微弱光信號的光電元件。它由密封在真空管殼內(nèi)的一個光陰極、多個倍增極（亦稱打拿極）和一個陽極組成。通常兩極間的電壓為75-100V，九個倍增極的光電倍增管的總放大數(shù)為106-107

光電倍增管的暗電流是儀器噪音的主要來源陰極陽極紫外-可見分光光度計(jì)，按其光學(xué)系統(tǒng)可分為單光束與雙光束分光光度計(jì)、單波長與雙波長分光光度計(jì)。原理：由光源發(fā)出的連續(xù)光譜，進(jìn)入單色器經(jīng)色散元件分光，獲得的單色光分別通過參比溶液和樣品溶液，進(jìn)行光強(qiáng)度（吸收）的測定。0.575光源單色器吸收池檢測器顯示三、紫外-可見分光光度計(jì)的類型1.單光束分光光度計(jì)

單光束分光光度計(jì)只有一個光通道，分光后的單色光直接透過吸收池，交互測定樣品池和參比池，結(jié)構(gòu)簡單，適用于測定特定波長的吸收，進(jìn)行定量。但儀器受電源、光源、檢測器等波動的影響較大，不能扣除這些波動的干擾，空白樣品和待測樣品單獨(dú)測量，每換一個波長都要用空白溶液重新校正，不能準(zhǔn)確地扣除空白值。PicturesofsinglebeamUV-Visspectrophotometers(Spectronic20D)ZeroAdjust100%AdjustWavelengthselectorreadoutsSampleCompartmentWavelengthselectorZeroAdjust100%Adjust原理：由光源發(fā)出的光通過單色器分光，將一束單色光從狹縫送出，經(jīng)光束分裂器分成強(qiáng)度相等的兩束光，一束通過參比池，另一束通過樣品池，儀器測得的是透過樣品溶液和參比溶液的光信號強(qiáng)度之比，比值即為試樣的透光率T，經(jīng)對數(shù)變換可轉(zhuǎn)換為吸光度A。比值光源單色器吸收池檢測器顯示光束分裂器2.雙光束分光光度計(jì)PyeUnicamSP8-200紫外可見分光光度計(jì)光路圖BlackMirrorOpen

優(yōu)點(diǎn):由于單波長雙光束分光光度計(jì)一次測量可同時得到樣品溶液相對空白溶液的透光度，因此雙光束儀器可以消除光源強(qiáng)度變化和電源不穩(wěn)定可能引起的誤差，并且可以方便地對全波段進(jìn)行掃描。儀器樣品室缺點(diǎn):儀器較單光束儀昂貴，要求待測樣品與參比以及它們的吸收池完全匹配，更多的移動部分。第五節(jié)定性和定量分析一、定性分析二、定量分析

定性鑒別純度檢查和雜質(zhì)限量測定單組分的定量方法多組分的定量方法一、定性分析（一）定性鑒別定性鑒別的依據(jù)→吸收光譜的特征吸收光譜的形狀吸收峰的數(shù)目吸收峰的位置（波長）吸收峰的強(qiáng)度相應(yīng)的吸光系數(shù)續(xù)前1．對比吸收光譜的一致性同一測定條件下，與標(biāo)準(zhǔn)對照物譜圖或標(biāo)準(zhǔn)譜圖進(jìn)行對照比較續(xù)前2．對比吸收光譜的特征值續(xù)前3．對比吸光度或吸光系數(shù)的比值：例：標(biāo)準(zhǔn)品uv圖合成樣品1uv圖合成樣品2uv圖續(xù)前（二）純度檢查和雜質(zhì)限量測定1．純度檢查（雜質(zhì)檢查）1）峰位不重疊：

找λ→使主成分無吸收，雜質(zhì)有吸收→直接考察雜質(zhì)含量2）峰位重疊：

主成分強(qiáng)吸收，雜質(zhì)無吸收/弱吸收→與純品比較，E↓

雜質(zhì)強(qiáng)吸收>>主成分吸收→與純品比較，E↑，光譜變形續(xù)前2．雜質(zhì)限量的測定：例：腎上腺素中微量雜質(zhì)——腎上腺酮含量計(jì)算

2mg/mL-0.05mol/L的HCL溶液，λ310nm下測定規(guī)定A310≤0.05即符合要求的雜質(zhì)限量≤0.06%二、定量分析（一）單組分的定量方法1．吸光系數(shù)法2．標(biāo)準(zhǔn)曲