湖南甜茶的主要成分分析及毒理學(xué)研究

湖南甜茶的主要成分分析及毒理學(xué)研究

湖南甜茶屬于殼斗科，石科植物的葉子主要產(chǎn)于湖南湘西、懷化、湖南海底。它也分布在湖北省、四川省、浙江省、廣東省、廣東省、廣東省以及印度、泰國(guó)、老撾和其他省份。作為一種茶類水果，這類植物已有幾千年的歷史。據(jù)數(shù)據(jù)，湖南省甜茶具有清熱、止瀉藥、清熱解毒、緩解壓力等功效，對(duì)關(guān)節(jié)炎和糖尿病具有輔助作用，具有潤(rùn)肝腎、潤(rùn)肺、咳嗽、降壓、瘦脂的作用，尤其是對(duì)降低血壓和分解脂肪的影響。這是一種珍貴的野生植物，具有茶、糖和藥的三種功能。這種物質(zhì)不同于普通茶葉、普通草本植物甜菊，以及廣西和其他地方甜茶（薔薇科）。它是一種天然的甜味飲料，具有高糖和低溫暖度。紅茶和綠茶香氣濃郁，口感濃郁持久。是一種需要開(kāi)發(fā)的天然綠色飲料和甜味素的資源。楊大堅(jiān)等人對(duì)湖南甜茶的甜味成分和黃酮類物質(zhì)進(jìn)行了分析和毒性試驗(yàn)，但對(duì)湖南甜茶成分的分析和毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果未詳細(xì)報(bào)告。3月至5月，應(yīng)仔細(xì)檢查該資源，并對(duì)湖南省甜茶的成分進(jìn)行分析、毒性試驗(yàn)、療效提取及應(yīng)用。結(jié)果如下所述。1材料和方法1.1樣品固定和制樣材料采自湖南漣源山區(qū)海拔400~500m的高山上,分別于3月下旬、4月中旬、5月上旬采樣3次.鮮葉采回后,立即在當(dāng)?shù)剡M(jìn)行樣品固定及甜茶初制,具體制樣方法如下.甜茶樣品固定:汽蒸殺青2~3min;抖散攤涼于70~80℃焙籠上烘干;粉碎過(guò)孔徑為0.425mm篩即得供試樣.傳統(tǒng)炒青、傳統(tǒng)蒸青、工夫紅茶型甜茶的毛茶制作工藝與普通茶葉的加工工藝相同;所有茶樣均粉碎過(guò)孔徑0.425mm篩.1.2方法1.2.1總灰、粗纖維、總黃酮類化合物總量測(cè)定水分、水浸出物、茶多酚、氨基酸、還原糖、總灰分、粗纖維采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法[5~10]測(cè)定,咖啡堿含量采用高效液相色譜法測(cè)定,黃酮類化合物總量采用三氯化鋁比色法測(cè)定.1.2.2原子分光光度法樣品采用濕法消化,其中K,Na用火焰光度法,Ca,Mg,Fe,Cu,Mn,Zn,Co,Ni用原子吸收分光光度法,Se用示波極譜法,As用砷斑法測(cè)定.1.2.3甜味素的制備甜味素含量分析采用重量法.取甜茶樣品50g,粉碎后用乙醇回流提取,將乙醇提取物用水溶解,用石油醚脫色,再用乙酸乙酯萃取,將乙酸乙酯萃取液水浴蒸干,所得固體物質(zhì)用熱水溶解,通過(guò)大孔徑吸附樹(shù)脂柱,用乙醇溶液洗脫.洗脫液經(jīng)濃縮后上硅膠柱,用氯仿—甲醇(9:1)洗脫,得無(wú)色的甜味素晶體,稱重,計(jì)算結(jié)果.1.2.4g/ld50急性毒性(LD50)測(cè)定:按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為大鼠.精子畸變?cè)囼?yàn):采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為20只昆明種健康雄性小白鼠,分4組,每組5只.試驗(yàn)劑量根據(jù)樣品急性經(jīng)口試驗(yàn)結(jié)果(LD50≥10000mg/kg),分別為5000.0mg/kg(1/2LD50),2500.0mg/kg(1/4LD50),1250.0mg/kg(1/8LD50);陰性對(duì)照組用蒸餾水,試驗(yàn)方法為連續(xù)5d灌胃法.Ames試驗(yàn):采用衛(wèi)生部頒布的《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》中的平板常規(guī)摻入法,試驗(yàn)菌株為TA97,TA98,TA100,TA102(由廣州市衛(wèi)生防疫站毒理科提供),每皿劑量分別為5,0.5,0.05mg.小鼠胸骨髓微核試驗(yàn):按衛(wèi)生部頒《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》中的微核試驗(yàn)方法進(jìn)行.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為35只昆明種健康小鼠,平分為7組,試驗(yàn)劑量分別為2500.0mg/kg(1/4LD50),625.0mg/kg(1/16LD50),156.0mg/kg(1/64LD50),39.0mg/kg(1/256LD50),10.0mg/kg(1/1000LD50).陰性對(duì)照組用蒸餾水,陽(yáng)性對(duì)照組用CP(環(huán)磷酰胺),劑量均為100.0mg/kg.2結(jié)果與分析2.1湖南甜茶的最佳采摘期常量成分分析結(jié)果見(jiàn)表1.由表1可知,湖南甜茶茶多酚、氨基酸含量比普通綠茶低,咖啡堿含量很低,而水溶性物質(zhì)含量高達(dá)40%以上,特別是具有藥理功能的黃酮類物質(zhì)比普通茶葉高得多.說(shuō)明湖南甜茶不同于普通茶葉,而有其自身特性,可作為一種新的飲料資源.分析結(jié)果表明:湖南甜茶的最佳采摘期應(yīng)該是3月底至4月初,因?yàn)檫@段時(shí)間采摘的鮮葉經(jīng)加工后,其水浸出物及黃酮總量都比較高,如果時(shí)間太早,不僅浪費(fèi)資源,而且此時(shí)葉和莖都太嫩,內(nèi)含成分不夠豐富;時(shí)間太遲,則莖葉較老,粗纖維含量快速增加,黃酮類等有效成分含量較低.2.2內(nèi)部元素比較從無(wú)機(jī)元素的分析結(jié)果(表2)可見(jiàn):湖南甜茶毛茶的無(wú)機(jī)元素比較齊全,對(duì)人體有用的元素如Fe,Mn,Zn,Se達(dá)到了一定含量,而Pb,As(As≤0.2mg/kg)等有害元素含量非常低,符合茶葉型產(chǎn)品的質(zhì)量衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn).2.3湖南甜茶甜味素成分湖南甜茶水浸提液甘甜可口,但分析結(jié)果證明,其水溶性還原糖的含量較低,顯然其甜味不是可溶性還原糖所致,而是一種非糖物質(zhì).按照文獻(xiàn)的方法,測(cè)得A3,A4,A5,B3,B4,B5,C3,C4,C5,D3,D4,D5號(hào)樣品甜味素含量分別為:9.82%,11.01%,8.72%,8.87%,10.54%,8.03%,9.45%,10.23%,8.03%,8.74%,10.83%,7.32%.周文華等報(bào)道,湖南甜茶甜味素成分均系黃酮甙類物質(zhì),這是一類甜度很高(甜度相當(dāng)于蔗糖的300倍),但熱量非常低的甜味物質(zhì).因此這種甜茶不僅可以作為嗜好甜味但又不宜攝入過(guò)多糖類物質(zhì)的肥胖消費(fèi)者飲用,還可以將其中的甜味物質(zhì)提取、分離純化得到一類新型甜味添加劑.這類甜味劑可供糖尿病患者食用,且對(duì)糖尿病還有一定療效.根據(jù)文獻(xiàn)提供的試驗(yàn)方法,將所得甜味劑進(jìn)一步純化,獲得了3種無(wú)色晶體.經(jīng)分析鑒定,這3種物質(zhì)分別與文獻(xiàn)報(bào)道的根皮甙、三葉甙、3-羥基根皮甙一致.2.4不同濃度甜茶精子畸變?cè)囼?yàn)急性毒性(LD50)大于1х105mg/kg,根據(jù)衛(wèi)生部頒布的《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)》急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn),湖南甜茶為無(wú)毒物質(zhì).精子畸變?cè)囼?yàn),3個(gè)甜茶樣品組精子畸變率分別為5.90%,10.50%,8.10%,陰性對(duì)照組畸變率為10.37%,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后結(jié)果表明,湖南甜茶精子畸變?cè)囼?yàn)為陰性.Ames試驗(yàn),每皿5,0.5,0.05mg3個(gè)劑量對(duì)每個(gè)菌株突變均小于2,根據(jù)《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》,甜茶樣品Ames試驗(yàn)為陰性.小鼠胸骨髓微核試驗(yàn),5個(gè)樣品組與陰性對(duì)照組的微核出現(xiàn)率均小于0.2%,低于陽(yáng)性對(duì)照組(4.93%),表明甜茶對(duì)小鼠胸骨髓微核試驗(yàn)為陰性.3湖南甜茶的開(kāi)發(fā)湖南甜茶各項(xiàng)毒理試驗(yàn)均為陰性,無(wú)突變、畸變現(xiàn)象,證明其食用安全性高.Pb,As等有害元素含量非常低,符合國(guó)家食品衛(wèi)生質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),是一種可安全食用的野生植物資源.湖南甜茶茶多酚、氨基酸含量比普通綠茶低,咖啡堿含量更低,但總黃酮量比普通綠茶高,并且還含有普通綠茶所不具有的甜味素,且甜味素含量高達(dá)10%以上.湖南甜茶由于咖啡堿含量低,因此多飲不會(huì)帶來(lái)因中樞神經(jīng)興奮而導(dǎo)致的失眠等副作用.其黃酮類物質(zhì)具有清除人體自由基、抗衰老、擴(kuò)