實(shí)驗(yàn)一 顯微鏡的使用及細(xì)菌的觀察

實(shí)驗(yàn)室規(guī)則接觸到病原菌，一定要堅(jiān)持無(wú)菌操作進(jìn)實(shí)驗(yàn)室穿上白大衣，離開時(shí)反折嚴(yán)禁飲食，也不要以手撫摸頭、面等部位若發(fā)生吸入菌液，割破手指等事故，必須報(bào)告老師接觸過(guò)菌液的吸管、玻片等器材，投入含有2~3%來(lái)蘇兒的容器內(nèi)實(shí)驗(yàn)完畢，整理桌面微生物實(shí)驗(yàn)要求做實(shí)驗(yàn)后要認(rèn)真完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告，所得結(jié)果必須真實(shí)記錄浙江大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

課程名稱：

實(shí)驗(yàn)類型：

實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱：

學(xué)生姓名：

專業(yè)：

學(xué)號(hào)：

同組學(xué)生姓名：

指導(dǎo)老師：

實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：

實(shí)驗(yàn)日期：

年

月

日實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅ū靥睿?shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理（必填）主要儀器設(shè)備操作方法與實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄和處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析（必填）討論、心得實(shí)驗(yàn)一

顯微鏡的使用及細(xì)菌的觀察實(shí)驗(yàn)內(nèi)容操作：油鏡的使用細(xì)菌材料玻片標(biāo)本制備革蘭染色法（GramStain）示教細(xì)菌的基本形態(tài)鏈球菌螺形菌---弧菌（霍亂弧菌）細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)鞭毛（變形桿菌）莢膜（肺炎鏈球菌）芽胞（破傷風(fēng)梭菌）實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆沼顽R的使用和保護(hù)熟悉細(xì)菌的基本形態(tài)和特殊結(jié)構(gòu)的鏡下特點(diǎn)掌握無(wú)菌操作掌握革蘭染色法顯微鏡的使用和保護(hù)---原理油鏡與其他物鏡的不同是載玻片與物鏡之間不是隔一層空氣，而是隔一層油質(zhì)稱為油浸系。這種油常選用香柏油如果玻片與物鏡之間的介質(zhì)為空氣，稱為干燥系，當(dāng)光線通過(guò)載玻片后，受折射發(fā)生散射現(xiàn)象，進(jìn)入物鏡的光線顯然減少，這就降低了視野的照明度香柏油的折射率n＝1.515，與玻璃n＝1.52相近。當(dāng)光線通過(guò)載玻片后，可直接通過(guò)香柏油進(jìn)入物鏡而不發(fā)生折射油浸沒(méi)物鏡介質(zhì)：空氣；香柏油油鏡的識(shí)別油鏡的鏡筒最長(zhǎng)，透鏡直徑最小，上面刻有90倍或100倍或Oil等

油鏡的使用先按低倍鏡到高倍鏡的操作步驟找到物像，并將觀察部分移至視野的中央。轉(zhuǎn)動(dòng)旋轉(zhuǎn)盤，使高倍鏡移向一側(cè)，在蓋玻片上滴一滴香柏油，然后將油鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔，使油鏡下端與香柏油接觸(注意操作動(dòng)作要慢，以免壓碎玻片或損壞鏡頭)。從目鏡內(nèi)觀察，微微上下轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)器，至視野內(nèi)出現(xiàn)清晰的物像時(shí)為止。油鏡使用完畢后，必須用拭鏡紙沾少許二甲苯將油鏡上的香柏油擦凈，并用干的拭鏡紙檫去二甲苯。顯微鏡用畢后，升高鏡簡(jiǎn)，取下玻片標(biāo)本，轉(zhuǎn)動(dòng)旋轉(zhuǎn)盤，使每個(gè)物鏡都不對(duì)準(zhǔn)通光孔，再下降鏡筒，使物鏡接近載物臺(tái)，將聚光鏡降下，最后放回櫥內(nèi)。細(xì)菌材料玻片標(biāo)本制備涂片------干燥------固定涂片：先取一接種環(huán)生理鹽水放于載玻片的一端，左手持菌液試管，右手持接種環(huán)，用接種環(huán)從試管培養(yǎng)液中挑取少許大腸桿菌或葡萄球菌培養(yǎng)物與鹽水混勻，涂成直徑約1厘米的涂片，涂片應(yīng)薄而均勻。干燥：涂片最好放置室溫中，待其自然干燥。固定：手執(zhí)玻片的一端標(biāo)本面向上，在火焰外層較快地來(lái)回通過(guò)三次，約2~3秒，以玻片反面觸及皮膚，以不覺(jué)過(guò)分地燙為度。待放置冷卻后，進(jìn)行染色。掌握無(wú)菌操作拔或塞試管帽時(shí)，應(yīng)將試管口通過(guò)火焰略加燒灼；接種環(huán)使用前后應(yīng)在火焰上燒灼滅菌固定的目的①

殺死微生物，固定其細(xì)胞結(jié)構(gòu)②

保證菌體能牢固地粘附在載玻片上，以免水洗時(shí)被水沖掉③

改變菌體對(duì)染料的通透性，一般死細(xì)胞原生質(zhì)容易著色。

革蘭染色法由丹麥C.Gram于1884年創(chuàng)立，是細(xì)菌學(xué)中很重要的鑒別染色法，通過(guò)此法染色，可將細(xì)菌鑒別為革蘭陽(yáng)性菌（G+）和革蘭陰性菌（G-）兩大類細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)革蘭染色法－－原理G＋菌胞壁結(jié)構(gòu)致密，肽聚糖層厚，脂質(zhì)含量少，乙醇不易透入。同時(shí)乙醇使細(xì)胞壁脫水形成一道屏障，阻止結(jié)晶紫—碘復(fù)合物從胞內(nèi)滲出，故細(xì)菌仍保留初染時(shí)的紫色。G－菌胞壁結(jié)構(gòu)較為疏松，肽聚糖層很薄，外膜含大量脂質(zhì)，易被乙醇溶解，致使細(xì)胞壁通透性變大，使結(jié)晶紫--碘復(fù)合物被乙醇溶解析出而脫色，故細(xì)菌呈復(fù)染時(shí)的紅色革蘭染色方法初染：滴加結(jié)晶紫染液,染1分鐘,水洗.媒染：滴加盧戈氏碘液,作用1分鐘后,水洗.脫色：加95%酒精2~3滴于涂片上,頻頻搖晃3~5秒鐘后,斜持玻