仿制藥品生物等效性試驗

仿制藥品制劑的

生物等效性試驗

一、專業(yè)術(shù)語定義

1.生物利用度（Bioavailability）：表示治療活性藥物達(dá)到體循環(huán)的速度和程度的量度。2.生物等效性（Bioequivalence）：生物等效藥品是指在相同實驗條件下以相同劑量給藥，試驗藥品與參比藥品的吸收速度和吸收程度沒有明顯差異，可認(rèn)為兩制劑具有生物等效性；對于某些藥品的吸收程度相同但吸收速度不同而又不影響治療的藥品，也可認(rèn)為兩制劑具有生物等效性。專業(yè)術(shù)語定義

3.生物等效藥品（Bioequivalentdrugproducts）：具有生物等效性特征的兩種藥品為生物等效藥品。4.制劑等效性（pharmaceuticalequivalence）：仿制藥品與參比藥品的藥劑等效性必須：兩制劑有相同活性成分，相同劑型，相同規(guī)格，相同給藥途徑，相同給藥劑量和給藥方法，但不要求輔料和釋放機(jī)制與參比制劑相同。5.修飾釋放制劑（Modifiedreleasedosageform）：

系指通過修飾藥物劑型，改變藥物釋放的時間過程，或定位釋放，或為方便用藥而達(dá)到治療目的而制備的藥物制劑。緩釋制劑、控釋制劑、延遲釋放制劑和延時釋放制劑均為修飾釋放制劑的不同類型。常釋制劑（Immediatereleasedosageform）：國內(nèi)稱之為普通制劑，為采用常規(guī)制劑學(xué)方法，而未采用修飾釋放技術(shù)制備的藥物制劑為常釋制劑，如常規(guī)片劑、膠囊劑和顆粒劑等。

專業(yè)術(shù)語定義

二、體內(nèi)藥物測定用生物樣品分析方法的建立和驗證

生物樣品可根據(jù)需要選擇全血、血清、血漿或尿液測定其中藥物或活性代謝物的濃度用于生物利用度和生物等效性研究，具有取樣量少、藥物濃度低、內(nèi)源性物質(zhì)干擾大（如激素、維生素、膽汁以及可能同服的其他藥物）、個體的差異大等原因，因此必須根據(jù)待測物的結(jié)構(gòu)、生物樣品來源和預(yù)期的濃度范圍，建立靈敏、專一、精確、的生物分析方法，并經(jīng)驗證后才能用于臨床試驗。體內(nèi)藥物測定用生物樣品分析方法的建立和驗證

1.生物樣品分析方法目前常用的幾種分析方法有：（1）色譜法：氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法（LC－MS、LC-MS-MS，GC-MS，GC-MS-MS）等，可用于大多數(shù)藥物的檢測；（2）免疫學(xué)方法：放射免疫分析法、酶免疫分析法、熒光免疫分析法等，多用于蛋白質(zhì)多肽類物質(zhì)檢測；（3）生物測定和微生物學(xué)方法。分析一般首選色譜法，如HPLC、GC法或LC－MS、GC－MS法，這類方法靈敏度、特異性、準(zhǔn)確性一般都能適應(yīng)臨床藥代研究的需要，多數(shù)實驗室也具備條件，因此應(yīng)用最廣。2.方法學(xué)驗證為了保證分析方法可靠，一般應(yīng)進(jìn)行以下幾方面的考察：（1）特異性：特異性是指在樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法能夠準(zhǔn)確、專一地測定分析物的能力。必須證明所測定物質(zhì)是受試藥品的原形藥物或特定活性代謝物、內(nèi)源性物質(zhì)和相應(yīng)代謝物、降解產(chǎn)物無干擾。如生物樣本分析法為色譜法，應(yīng)至少提供空白生物樣品、空白生物樣品加入標(biāo)準(zhǔn)品及服藥后生物樣品的色譜圖，以反映分析方法的特異性。體內(nèi)藥物測定用生物樣品分析方法的建立和驗證

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍：標(biāo)準(zhǔn)曲線反映了所測定物質(zhì)濃度與儀器響應(yīng)值之間的關(guān)系，一般用回歸分析方法（如用加權(quán)最小二乘法）所得的回歸方程來評價。應(yīng)提供標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程和相關(guān)系數(shù)，說明其線性相關(guān)程度。標(biāo)準(zhǔn)曲線高低濃度范圍為線性范圍，在線性范圍內(nèi)濃度測定結(jié)果應(yīng)達(dá)到試驗要求的精密度和準(zhǔn)確度。體內(nèi)藥物測定用生物樣品分析方法的建立和驗證

標(biāo)準(zhǔn)樣品：在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣品，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算質(zhì)控樣品和未知樣品中分析物濃度。不同生物樣品應(yīng)配制標(biāo)準(zhǔn)樣品制備各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)濃度個數(shù)取決于分析物可能的濃度范圍和分析物/響應(yīng)值關(guān)系的性質(zhì)。應(yīng)使用與待測樣品相同生物介質(zhì)，一般用6-8個濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，對于非線性相關(guān)可能需要更多濃度點(diǎn)。線性范圍要能覆蓋全部待測的生物樣品濃度范圍，不得用線性范圍外推的方法求算未知樣品的濃度。建立標(biāo)準(zhǔn)曲線時應(yīng)隨行空白生物樣品，但計算時不包括該點(diǎn)，僅用于評價干擾。體內(nèi)藥物測定用生物樣品分析方法的建立和驗證

（3）精密度與準(zhǔn)確度：精密度是指在確定的分析條件下，相同介質(zhì)中相同濃度樣品的一系列測量值的分散程度。通常用質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）來考察方法的精確度。一般RSD應(yīng)小于15％，在定量下限（LowerLimitofquantitation，LLOQ）附近RSD應(yīng)小于20％。體內(nèi)藥物測定用生物樣品分析方法的建立和驗證

準(zhǔn)確度是指在確定的分析條件下，測得的生物樣品濃度與真實濃度的接近程度(即質(zhì)控樣品的實測濃度與真實濃度的偏差)，常以回收率表示。重復(fù)測定已知濃度分析物樣品可獲得準(zhǔn)確度。一般應(yīng)在85％～115％范圍內(nèi)(一般偏差應(yīng)少于15％)，在LLOQ附近應(yīng)在80％～120％范圍內(nèi)。體內(nèi)藥物測定用生物樣品分析方法的建立和驗證

一般要求選擇3個濃度的質(zhì)控樣品同時進(jìn)行方法的精密度和準(zhǔn)確度考察：低濃度選擇在定量下限（LLOQ）附近，其濃度在LLOQ的3倍以內(nèi)；高濃度接近于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限。每一濃度至少測定5個樣品。體內(nèi)藥物測定用生物樣品分析方法的建立和驗證

（4）定量下限（LowerLimitofquantitation，LLOQ）定量下限是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點(diǎn)，表示測定樣品中符合準(zhǔn)確度和精密度要求的最低藥物濃度。LLOQ應(yīng)能滿足測定3～5個消除半衰期時樣品中的藥物濃度或能檢測出Cmax的1/10～1/20時的藥物濃度。其準(zhǔn)確度應(yīng)在真實濃度的80%～120%范圍內(nèi)，RSD應(yīng)小于20%。體內(nèi)藥物測定用生物樣品分析方法的建立和驗證

（5）樣品穩(wěn)定性：含藥生物樣品在室溫、冰凍和凍融條件下以及不同存放時間進(jìn)行穩(wěn)定性考察，以確定生物樣品的存放條件和時間。以及考察儲備液的穩(wěn)定性和樣品處理后的穩(wěn)定性。

（6）提取回收率：從生物樣本樣品中回收得到分析物質(zhì)的響應(yīng)值除以純標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生的響應(yīng)值即為分析物的提取回收率。也可以說是將供試生物樣品中分析物提取出來供分析的比例。實驗應(yīng)該考察高、中、低3個濃度的提取回收率，應(yīng)當(dāng)獲得一致、精密和可重現(xiàn)的回收率。體內(nèi)藥物測定用生物樣品分析方法的建立和驗證

（7）方法學(xué)質(zhì)控（QC）在測定生物樣品中的藥物濃度時應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制。一般做法是在每批樣品測定時應(yīng)同時制備空白、低、中、高4份質(zhì)控（標(biāo)準(zhǔn)濃度）樣品或隨行制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法進(jìn)行方法學(xué)質(zhì)控研究。質(zhì)控樣品系將已知量的待測藥物加入到生物介質(zhì)中配制的樣品，用于監(jiān)測生物分析方法的效能和評價每一分析批中未知樣品分析結(jié)果的完整性和正確性。體內(nèi)藥物測定用生物樣品分析方法的建立和驗證

應(yīng)在生物樣品分析方法確證完成之后開始測試未知樣品。推薦由獨(dú)立的人員配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品對分析方法進(jìn)行考核。每個分析批生物樣品測定時應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并隨行測定高、中、低三個濃度的質(zhì)控樣品。每個濃度至少雙樣本。質(zhì)控樣品測定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于15%，低濃度點(diǎn)偏差一般應(yīng)小于20%，最多允許1/3不在同一濃度的質(zhì)控樣品結(jié)果超限。體內(nèi)藥物測定用生物樣品分析方法的建立和驗證

（8）微生物學(xué)和免疫學(xué)分析：上述原則基本適用于生物學(xué)和微生物學(xué)或免疫學(xué)分析，但在方法確證中應(yīng)考慮到其特殊性。微生物學(xué)或免疫學(xué)分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線本質(zhì)上是非線性的。結(jié)果的準(zhǔn)確度是關(guān)鍵的因素。體內(nèi)藥物測定用生物樣品分析方法的建立和驗證

3.分析數(shù)據(jù)的報告

研究報告應(yīng)包括對測定方法的詳細(xì)描述：提供典型的色譜圖：至少要求提供空白生物樣品色譜圖，空白生物樣品體外加入標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖以及用藥后生物樣品的色譜圖。校正曲線應(yīng)提供測定數(shù)據(jù)及校正曲線，回歸方程和相關(guān)系數(shù)（r），r要求大于0.99；生物學(xué)、微生物學(xué)和免疫學(xué)方法r要求大于0.95。提供測定的精密度和準(zhǔn)確度，測定的最低定量限，提取回收率，樣品穩(wěn)定性和質(zhì)控數(shù)據(jù)。體內(nèi)藥物測定用生物樣品分析方法的建立和驗證

三、仿制常釋制劑的生物等效性

1.目的：以便申報者通過這一試驗進(jìn)入常釋制劑簡易申請。2.管理要求①國家藥品監(jiān)督管理局為法定受理和批準(zhǔn)仿制藥品簡易申請的權(quán)利機(jī)構(gòu)。常釋制劑的簡易申請必須證明其仿制藥品與參比藥品在藥學(xué)上和生物學(xué)上具有等效性。②仿制藥品的藥學(xué)等效性：仿制藥品與參比藥品比較必須滿足藥學(xué)等效性的條件，即：相同活性成分，相同劑型，相同規(guī)格，相同給藥途徑，相同給藥劑量和給藥方法，但不要求輔料和釋放機(jī)制與參比制劑相同。③生物等效性：要求證明仿制藥品與指定參比藥品生物等效，為此必須按此指南進(jìn)行一系列生物等效試驗。④在進(jìn)行生物等效性試驗前，必須按中國藥典要求進(jìn)行體外溶出度實驗。

仿制常釋制劑的生物等效性

3.生物等效性的基本要求申報者申報的常釋制劑仿制藥品的人體生物等效性試驗必須證明兩制劑的吸收速度和程度無顯著差異，主要藥代參數(shù)（AUC、Cmax、Tmax）經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理等效。為滿足仿制藥品與參比藥品生物等效的基本要求，必須進(jìn)行單劑量空腹交叉試驗：以仿制藥品與參比藥品相同劑量進(jìn)行單劑量二周期二處理的隨機(jī)交叉試驗。4.單劑量空腹交叉試驗(1)設(shè)計在健康受試者進(jìn)行的本雙交叉試驗為單劑量、二處理、二周期、二順序的交叉試驗。仿制常釋制劑的生物等效性(2)要求①仿制藥品與參比藥品的服用劑量相同；所用劑量一般應(yīng)與臨床用藥劑量一致；在測定靈敏度有限時，可適當(dāng)增加劑量時，也不得超過臨床最大劑量；②受試者應(yīng)隨機(jī)分組，二組例數(shù)相同；③二期試驗的清洗期應(yīng)大于該藥的7倍半衰期，一般應(yīng)間隔一周或更長時間；④試驗方案必須經(jīng)過醫(yī)學(xué)倫理委員會討論批準(zhǔn)。仿制常釋制劑的生物等效性

(3)試驗條件①研究機(jī)構(gòu)必須是符合GCP規(guī)范的臨床藥理研究部門；②研究機(jī)構(gòu)必須有一定的數(shù)量的不同學(xué)科的研究人員；③研究機(jī)構(gòu)必須具備一定的分析測試條件；④在獲得正式批件后，提出的試驗方案必須經(jīng)過醫(yī)學(xué)倫理委員會討論通過后執(zhí)行。仿制常釋制劑的生物等效性

(4)試驗藥品和參比藥品①試驗藥品必須是經(jīng)藥政管理部門審核同意進(jìn)行人體生物等效性試驗的試驗藥品；②參比藥品必須是經(jīng)檢驗合格已上市藥品（進(jìn)口藥品國內(nèi)未上市的不能作為參比）；③申辦單位必須提供試驗藥品和參比藥品的溶出度數(shù)據(jù)。仿制常釋制劑的生物等效性

(5)受試者①例數(shù)：一般不少于18例，在某些情況下，應(yīng)根據(jù)統(tǒng)計學(xué)要求確定例數(shù)。②年齡和性別：18-45歲，同批試驗者的年齡范圍不得相差10歲，除特殊要求外，一般為男性受試者。③體重：按體重指數(shù)（體重kg/身高m2）評價，在20-24范圍內(nèi)；或按標(biāo)準(zhǔn)體重（(身高cm-80)×0.7或(身高cm-170)×0.6+62）±10評價。④病史、體格檢查、臨床實驗室檢查（血液學(xué)、血液生化、心電圖等），有特殊要求時，應(yīng)增加相應(yīng)檢查項目（除降糖藥外可不查血糖