淺論多藥效學(xué)指標(biāo)評(píng)價(jià)烏鱉顆粒中黃狗腎提取工藝

淺論多藥效學(xué)指標(biāo)評(píng)價(jià)烏鱉顆粒中黃狗腎提取工藝【摘要】目的采用多藥效學(xué)指標(biāo)確定烏鱉顆粒中黃狗腎的提取工藝。方法比較黃狗腎95%乙醇提取和70%乙醇提取兩種工藝對(duì)卵巢摘除大鼠雌激素活性以及對(duì)幼鼠子宮、卵巢發(fā)育的影響。結(jié)果兩種提取工藝的提取物均可使卵巢摘除大鼠血清雌二醇水平增高;95%乙醇工藝提取還具有提高大鼠雌激素活性及促進(jìn)幼鼠子宮、卵巢生長(zhǎng)的作用。結(jié)論烏鱉顆粒中黃狗腎飲片應(yīng)采用95%乙醇提取。

【關(guān)鍵詞】烏鱉顆粒;黃狗腎;提取工藝;多藥效學(xué)指標(biāo)評(píng)價(jià)

Abstract：ObjectiveTodefinetheextractionprocessofDogPenisinWubieGranulesbymultiplepharmacodynamicsindicators.MethodsRatovarieswereremovedbyoperation.Theeffectof95%alcoholextractionand70%alcoholextractionwerecomparedonuterusandovariesdevelopmentofimmaturemiceandestrogenactivityofratswithoperation.ResultsProductsofbothprocessescouldraiseE2levelinserumofratswithoperation,95%alcoholextractioncouldalsoenhanceestrogenactivityofratsanddeveloputerusandovariesofimmaturemice.ConclusionDogPenisinWubieGranulesshouldbeextractedby95%alcohol.

Keywords：WubieGranules;DogPenis;extractionprocess;multiplepharmacodynamicsindexevaluation

烏鱉顆粒來(lái)源于江蘇省中醫(yī)院名老中醫(yī)夏桂成教授臨床經(jīng)驗(yàn)方,由黃狗腎、制何首烏和鱉甲等7味藥組成,臨床上用于治療卵巢功能早衰。黃狗腎為犬科動(dòng)物狗CanisfamiliarisL.的干燥陰莖和睪丸,具有暖腎、壯陽(yáng)、益精功效[1]。目前黃狗腎文獻(xiàn)報(bào)道比較少,物質(zhì)基礎(chǔ)研究薄弱,有效成分尚不明確,為保證制劑療效,筆者采用多藥效學(xué)指標(biāo)評(píng)價(jià)方法對(duì)黃狗腎提取工藝進(jìn)行探索。

1實(shí)驗(yàn)材料1動(dòng)物

雌性SD大鼠,體重120～140g,由浙江大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(浙)2008-0033。ICR小鼠,體重14～18g,由揚(yáng)州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(蘇)2007-0001。2儀器

SP-756PC型紫外可見分光光度計(jì)(上海光譜儀器有限公司);LDZ5-2型離心機(jī)(北京京立離心機(jī)有限公司);r-911全自動(dòng)放免計(jì)數(shù)儀(中國(guó)科技大學(xué)實(shí)業(yè)總公司);FA1004電子分析天平(上海精科天平廠)。3藥物與試劑

六味地黃丸(河南宛西制藥股份有限公司,批號(hào)090872)。黃狗腎及方中飲片均購(gòu)于江蘇省醫(yī)藥公司,經(jīng)鑒定符合相關(guān)要求。紅四氮唑(TTC,上海試劑三廠,批號(hào)961115);四氯乙烯(中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司,批號(hào)20010203);無(wú)水乙醇(上海久億化學(xué)試劑有限公司,批號(hào)20090210)。雌二醇(E2)試劑盒(北京華英生物技術(shù)研究所,批號(hào)20091128);促卵泡激素(FSH)試劑盒(北京華英生物技術(shù)研究所,批號(hào)20091128);黃體生成素(LH)試劑盒(北京華英生物技術(shù)研究所,批號(hào)20091128)。

2方法與結(jié)果

供試液制備方法

工藝A提取液：按處方比例稱取飲片,黃狗腎加10倍量95%乙醇回流提取2次,每次1h,濾過(guò),藥液與藥渣備用;枸杞子、茯苓加10倍量水煎煮2次,每次1h,濾過(guò),合并濾液,濃縮至相對(duì)密度為(60℃測(cè))的浸膏,備用;黃狗腎藥渣與方中其他飲片加10倍量水煎煮2次,每次2h,濾過(guò),合并濾液,濃縮至相對(duì)密度(80℃測(cè)),加乙醇至含量為60%,靜置48h,抽濾,濾液與黃狗腎液合并回收乙醇至盡,再與枸杞子、茯苓提取液合并即得。

工藝B提取液：按處方比例稱取飲片,黃狗腎加10倍量70%乙醇回流提取2次,每次1h,濾過(guò),藥液與藥渣備用;其余6味飲片的處理同工藝A。

陽(yáng)性對(duì)照液：取六味地黃丸搗碎,研成粉狀,然后加入蒸餾水混溶,即得。

陰性對(duì)照液：按處方比例稱取飲片(缺黃狗腎),飲片的處理同工藝A。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)用—(—用)±s表示,采用t檢驗(yàn),用統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

對(duì)卵巢摘除大鼠雌激素活性的影響

取雌性SD大鼠85只,除正常對(duì)照組10只外,其余75只去除雙側(cè)卵巢,手術(shù)后2周,將手術(shù)成功的大鼠隨機(jī)分組,每組10只。各組按下述劑量每日灌胃給予相應(yīng)藥物1次,正常對(duì)照組和模型組：等量生理鹽水;陽(yáng)性對(duì)照組：3g/kg六味地黃丸;工藝A組：11g/kg;工藝B組：11g/kg;陰性對(duì)照組：11g/kg。每日灌胃1次,連續(xù)給藥4周。末次給藥30min后,每鼠陰道內(nèi)緩緩注入新鮮配制的25mg/mLTTC水溶液mL,于陰道內(nèi)停留30min,取血,離心,取血清測(cè)E2、FSH、LH水平。立即處死,剪取大鼠陰道,縱行切開,分離陰道,剪碎后置離心試管中,加入無(wú)水乙醇和四氯乙烯混合溶液4mL,浸泡提取2h,2000r/min離心5min。吸取上清液,以無(wú)水乙醇和四氯乙烯混合液作空白對(duì)照,于490nm處測(cè)定A值[2-4]。

結(jié)果表明,工藝A組和工藝B組均可使卵巢摘除大鼠血清E2水平增高,與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義()。提示工藝A組和工藝B組具有調(diào)節(jié)機(jī)體激素水平的作用。工藝A組的OD值與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(),提示工藝A組可明顯增加大鼠陰道角化上皮細(xì)胞,具有提高雌激素活性的作用。見表1、表2。表1對(duì)卵巢摘除大鼠血清E2、FSH、LH活性的影響(—(—的)±s)表2對(duì)卵巢摘除大鼠雌激素活性的影響(—(—巢)±s)

對(duì)幼鼠子宮、卵巢發(fā)育的影響

取未成熟ICR健康雌性幼鼠(體重14～18g)60只,隨機(jī)分為空白對(duì)照組(灌胃等量生理鹽水)、陽(yáng)性對(duì)照組(g/kg)、工藝A組(g/kg)、工藝B組(g/kg)、陰性對(duì)照組(g/kg)。各組均灌胃給予相應(yīng)藥物,劑量mL/10g,1次/d×10d。末次給藥后12h,脫頸椎處死,解剖,取子宮、卵巢、脾、胸腺,分離脂肪,迅速以電子天平稱重。計(jì)算脾、胸腺、卵巢、子宮系數(shù)。結(jié)果表明,工藝A組促進(jìn)子宮、卵巢和胸腺生長(zhǎng),與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義()。提示工藝A組具有促進(jìn)子宮、卵巢發(fā)育的作用。見表3。表3對(duì)幼鼠子宮、卵巢、脾、胸腺發(fā)育的影響(—(—鼠)±s)

3討論

鞭類中藥飲片的服用方法主要包括研粉吞服、煮食和泡酒內(nèi)服。譚氏等研究結(jié)果表明,狗鞭(黃狗腎)飲片勻漿后的混懸液對(duì)腎陽(yáng)虛型動(dòng)物有不同程度的壯陽(yáng)作用;文獻(xiàn)報(bào)道其主要含雄性激素、蛋白質(zhì)、維生素E、脂肪和有機(jī)纖維等成分。

本試驗(yàn)結(jié)果表明,烏鱉顆粒中黃狗腎不同乙醇濃度提取工藝(工藝A和工藝B)的提取物均可使卵巢摘除大鼠血清E2水平增高;此外,用95%乙醇提取工藝(工藝A)制備的提取物還具有較好的提高大鼠雌激素活性,促進(jìn)子宮、卵巢生長(zhǎng)的作用,這與烏鱉顆粒治療卵巢功能早衰目的一致。綜合上述分析,方中黃狗腎飲片應(yīng)用95%乙醇提取。

提取黃狗腎所用乙醇濃度不同,對(duì)藥效的影響也不同,濃度高者藥效明顯好,這是否提示黃狗腎中極性較低的成分是其有效成分,有待進(jìn)一步研究。

【參考文獻(xiàn)】

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