畜禽繁殖與改良16人工授精

動(dòng)物人工授精2012/11/211第一節(jié)人工授精概述

一、自然交配種公畜與發(fā)情母畜直接交配的配種方式。1.自由交配：公母畜混群飼養(yǎng)，公畜任意和發(fā)情母畜交配。原始交配方式，容易引起近親繁殖。

2.分群交配：在配種季節(jié)，把一頭或數(shù)頭經(jīng)選擇的公畜放入一定數(shù)量的母畜群中進(jìn)行交配。性別比例為1︰10～20（一夫多妻）。

3.圍欄交配：與分群交配相似，配種時(shí)，在圍欄內(nèi)放入一頭母畜與特定的公畜交配。性別比例為1︰1。

4.人工輔助交配：公母畜平時(shí)隔離，到配種季節(jié)，選擇特定的公母畜，人為控制交配，交配完成后即行隔離開來。2012/11/212二、人工授精

人工授精是指用特定的器械采集公畜的精液，通過檢查、稀釋、保存等適當(dāng)處理后，再用器械把精液輸入到發(fā)情母畜的生殖道內(nèi)，以代替公母畜自然交配而繁殖后代的一種繁殖技術(shù)。

1780年，意大利生理學(xué)家Spallanzani將公犬的精子注入母犬生殖道，獲得了3只小犬，這是人類第一次進(jìn)行的人工授精嘗試。1899年，前蘇聯(lián)科學(xué)家開始研究家畜的人工授精技術(shù)，Ivanoff起初的研究對象是馬，但首次成功的卻是牛和綿羊的人工授精。2012/11/213我國家畜的人工授精技術(shù)研究始于1935年的句容種馬場，到1951年以后，隨著我國畜牧業(yè)的迅速發(fā)展，人工授精技術(shù)得到推廣，主要在東北推廣馬的人工授精。奶牛的人工受精始于20世紀(jì)50年代中期，到70年代已經(jīng)普及了冷凍精液人工授精技術(shù)。目前，我國各省、市、自治區(qū)都建有冷凍精液站，城郊和大型乳牛場采用凍精配種的奶牛幾乎為100%。其它家畜凍精人工授精工作也在一定的范圍內(nèi)得到應(yīng)用。2012/11/214三、人工授精的意義1.有效改變家畜的配種過程，提高優(yōu)良種公畜的配種效能和種用價(jià)值，充分發(fā)揮公畜繁殖潛力。

畜種自然交配人工授精豬30～60頭/年200～400頭/年牛20～40頭/年6000～12000頭/年羊30～50只/年7000～10000只/年馬30～50匹/年200～400匹/年2012/11/215

2.加速家畜品種改良，促進(jìn)育種工作進(jìn)程。人工授精大大提高了公畜的配種效能，就能選擇最優(yōu)秀的公畜用于配種，從而成為迅速增殖良種家畜的有效方法和改良畜種進(jìn)行育種工作的有力手段。

3.減少了種公畜的飼養(yǎng)頭數(shù)，降低飼養(yǎng)管理費(fèi)用。

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4.配種時(shí)公母畜互不接觸，可防止某些生殖疾病的傳播。由于人工授精所用精液a.必須經(jīng)過檢查，以保證質(zhì)量，b.必須嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，只有健康的公母畜才能用作人工授精，c.通過發(fā)情鑒定可以掌握適宜的配種時(shí)機(jī)，d.能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)某些生殖疾病，因此可減少和防止因本交引起的傳染性疾病，如布氏桿菌病、毛滴蟲病、胎兒弧菌病、傳染性流產(chǎn)、馬媾疫等。2012/11/2172012/11/218

5.克服公母畜體格懸殊不易交配的困難，有利于提高母畜受胎率?？梢钥朔蚬⒛感篌w格相差太大或因生殖道異常造成交配困難引起的不孕，從而有利于提高母畜的受胎率。2012/11/2196.克服時(shí)間和地域的限制，并可開展國際間的交流與貿(mào)易。優(yōu)良公畜的精液可以長期冷凍保存，而且便于運(yùn)輸，因此可以在任何時(shí)間(即使在公畜死后)、任何地點(diǎn)選用某頭公畜的精液輸精。對一些有特殊遺傳特性或即將絕跡的品種或個(gè)體的精液可以冷凍保存，建立精液基因庫，對家畜的遺傳、育種及動(dòng)物多樣性的保存均具有重大的科學(xué)價(jià)值。2012/11/21107.有利于精液的長期保存與利用8.為開展生殖生物技術(shù)科學(xué)研究提供了有效手段項(xiàng)目自然配種人工授精飼養(yǎng)公牛數(shù)需依母牛數(shù)決定少或無需飼養(yǎng)遺傳選擇性較低較高可配種時(shí)間較長較短同期配種較不易容易疾病控制較不易容易所需技術(shù)無需需配合相關(guān)技術(shù)小知識(shí)2012/11/2111四、人工授精技術(shù)的基本環(huán)節(jié)人工授精技術(shù)的基本技術(shù)環(huán)節(jié)包括采精、精液品質(zhì)檢查、精液的稀釋、精液的分裝、精液的保存（液態(tài)保存、冷凍保存）、精液的運(yùn)輸、冷凍精液的解凍與檢查、輸精等。2012/11/2112第二節(jié)采精

采精就是精液的采集。采精是人工授精的第一個(gè)環(huán)節(jié)，必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程，以保證公畜正常、充分的性行為表現(xiàn)，采集到量多、質(zhì)優(yōu)、無污染的精液。2012/11/2113一、采精前的準(zhǔn)備

（一）場地采精應(yīng)有專用場地，以便公畜建立穩(wěn)固的條件反射；要求寬敞、平坦、安靜、清潔，避免陽光直射，并有采精架保定公畜；在配種站最好建立采精室，并與精液處理室相連，以方便正常工作，同時(shí)也可以控制溫度、濕度光照等條件，便于消毒，保證精液質(zhì)量。室內(nèi)采精場面積一般為10×10m2。2012/11/2114

（二）臺(tái)畜臺(tái)畜的選擇必須滿足種公畜的要求，可利用活臺(tái)畜或者假臺(tái)畜。采精時(shí)用發(fā)情良好的母畜做臺(tái)畜效果最好，經(jīng)過訓(xùn)練的母畜皆可作為臺(tái)畜。2012/11/2115

對于活臺(tái)畜，指使用與公畜同種的母畜、閹畜或另一頭種公畜作臺(tái)畜?；钆_(tái)畜應(yīng)健康、體壯、大小適中、性情溫順、四肢有力。采精前，將臺(tái)畜保定在采精架內(nèi)，臺(tái)畜的尾根部、外陰部、肛門應(yīng)清洗干凈，采精時(shí)將尾巴纏綁在一側(cè)?；钆_(tái)畜2012/11/2116

假臺(tái)畜即采精臺(tái)，模仿母畜體型大小，選用金屬材料或木料做成的具有一定支撐力的支架。假臺(tái)畜要求大小適宜，堅(jiān)實(shí)牢固，表面柔軟干凈，用畜皮、人造革等偽裝。牛采精架的構(gòu)造采精用假臺(tái)畜2012/11/2117

◆在假臺(tái)畜的后軀涂抹發(fā)情母畜的陰道粘液或尿液。其目的是刺激公畜性欲并引誘其爬跨假臺(tái)畜，經(jīng)過幾次采精后即可調(diào)教成功。

◆以發(fā)情母畜誘導(dǎo)，在公畜達(dá)到性高潮時(shí)誘導(dǎo)爬跨假臺(tái)畜。在假臺(tái)畜旁邊牽一發(fā)情母畜，誘使其爬跨數(shù)次，但不使其交配，當(dāng)公畜性欲達(dá)到高峰時(shí)迅速牽走母畜，令其爬跨假臺(tái)畜。公畜調(diào)教的基本方法2012/11/2118公畜調(diào)教的基本方法2012/11/2119公畜調(diào)教的基本方法

◆觀看調(diào)教好的公畜爬跨假臺(tái)畜。將需要調(diào)教的公畜拴系在假臺(tái)畜附近，讓其觀看另一頭已經(jīng)調(diào)教好的公畜爬跨假臺(tái)畜采精，然后再誘導(dǎo)其爬跨假臺(tái)畜。2012/11/2120公畜調(diào)教的注意事項(xiàng)2012/11/2121公畜調(diào)教的注意事項(xiàng)1.調(diào)教過程中要反復(fù)進(jìn)行訓(xùn)練，耐心誘導(dǎo)，切勿強(qiáng)迫、恐嚇、抽打等，以防止性抑制而造成調(diào)教困難。2.調(diào)教時(shí)應(yīng)注意公畜外生殖器的清潔衛(wèi)生。3.調(diào)教時(shí)間最好選擇在早上，早上公畜精力充沛，性欲旺盛。4.調(diào)教時(shí)間、地點(diǎn)要固定，每次調(diào)教時(shí)間不宜過長。2012/11/2122

（三）性準(zhǔn)備

公畜在采精前，空爬跨幾次臺(tái)畜，可以提高精子數(shù)量及精子活率，這個(gè)空爬跨過程叫性準(zhǔn)備(也叫性刺激)。常采用以下方法來做好性準(zhǔn)備：1.改換臺(tái)畜

2.變換臺(tái)畜位置

3.觀摩其他家畜爬跨——示范作用

4.自身空爬（有的公畜有自淫現(xiàn)象，就不能性刺激，特別值得注意的是寵物狗）2012/11/21232012/11/2124

（四）藥液的準(zhǔn)備

1.配制稀釋液（后講）。2.配制潤滑劑（在凡士林中加入1/3的液體石蠟，高壓滅菌后涼冷，每周滅菌一次，并潤滑內(nèi)胎）。3.配制70%～75%的酒精。4.配制小蘇打液。取小蘇打粉2g加溫開水100ml，消毒公畜包皮，母畜后軀及洗滌器械、桌面等。5.煤酚皂液（來蘇兒）。取2ml加溫開水100ml，消毒母畜的外陰部。2012/11/2125

（五）器械的消毒

1.將清洗好的集精杯、貯精瓶、紗布、毛巾、潤滑劑等放入高壓滅菌器內(nèi)，以120℃1kg左右的壓力持續(xù)15～20分鐘，也可用一般的鋼筋鍋蒸汽消毒30分鐘。

2.溫度計(jì)、玻璃棒、長柄鉗子，用75%的酒精棉球消毒，晾干后，用滅菌稀釋液沖洗2遍。

3.輸精管等玻璃容器在清洗后，可放在鼓風(fēng)干燥箱中加溫（160℃～180℃）之間，維持20分鐘。2012/11/2126吸管輸精針2012/11/2127二、采精方法

一種理想的采精方法，應(yīng)具備以下四個(gè)條件或者遵循以下四個(gè)基本原則：①可全部收集公畜一次射出的精液②不影響精液品質(zhì)③公畜生殖器官和性機(jī)能不會(huì)受到損傷或影響④器械用具簡單，使用方便目前在生產(chǎn)中常用的采精方法有：假陰道法、手握法、按摩法和電刺激法，其中以假陰道法最為理想。2012/11/21282012/11/2129(一)假陰道法

假陰道法是用模擬母畜陰道環(huán)境制成的人工陰道，誘導(dǎo)公畜在其中射精而獲取精液的方法。1.假陰道的結(jié)構(gòu)和具備條件假陰道是一筒狀結(jié)構(gòu)，主要由外殼、內(nèi)胎、集精杯及其附件組成。外殼為筒狀，可用硬質(zhì)塑料或鍍鋅鐵皮制成；內(nèi)胎為彈性強(qiáng)、薄而柔軟無毒的橡膠筒，裝在外殼內(nèi)，構(gòu)成假陰道內(nèi)壁。2012/11/2130附件包括：1.集精杯由暗色玻璃或膠質(zhì)制成，裝在假陰道的一端。2.膠圈固定內(nèi)胎，保定集精杯。充氣用的3.活塞和4.雙連球。連接集精瓶(豬)或集精管(牛)的5.膠漏斗。為防止精液污染而敷設(shè)在假陰道入口處的6.泡沫塑料墊，用于固定龜頭(豬)用的7.螺旋橡膠圈等。2012/11/2131假陰道2012/11/2132

假陰道在使用時(shí)先安裝內(nèi)胎，然后消毒、沖洗、注水、涂滑潤劑、調(diào)節(jié)溫度和壓力等步驟，使假陰道達(dá)到與母畜陰道環(huán)境相似的條件。(1)適當(dāng)溫度注入相當(dāng)假陰道容積2/3的溫水，采精時(shí)保持38～40℃。集精杯應(yīng)保持34～35℃。

(2)適當(dāng)壓力借助注入水和空氣來調(diào)節(jié)假陰道的壓力。以假陰道內(nèi)胎入口處形成Y

形為宜。

2012/11/2133壓力過大壓力適宜2012/11/2134

(3)適當(dāng)潤滑度用消毒過的潤滑劑對假陰道內(nèi)表面潤滑，涂抹部位是假陰道全長的1/2～1/3。

(4)無菌凡是接觸精液的部分如內(nèi)胎、集精杯及橡膠漏斗均須嚴(yán)格消毒。(5)無破損漏洞外殼、內(nèi)胎、集精杯不得漏水或漏氣。2012/11/21352012/11/2136

采精前，將假陰道入口處用消毒過的紗布2～4層蓋住，防止污染。最好將裝好的假陰道放在40～42℃的恒溫箱內(nèi)，以免采精前溫度下降。在安裝假陰道時(shí)，不同動(dòng)物對上述條件的要求不同。

牛：38℃，其次是壓力和潤滑度。

羊：38℃，其次是壓力和潤滑度。

豬：主要是壓力，其次是潤滑度。馬：主要是壓力，其次是潤滑度。標(biāo)準(zhǔn)壓力，用指頭粗的玻棒從假陰道中不掉下來。2012/11/2137

2.采精操作比較安全而簡單的方法是將假陰道安放在能夠調(diào)節(jié)假陰道角度的假臺(tái)畜后軀內(nèi)，任由公畜爬跨并在假陰道內(nèi)射精。A.安裝假陰道B.引導(dǎo)公畜至臺(tái)畜后面，誘導(dǎo)公畜爬跨C.及時(shí)將陰莖導(dǎo)入假陰道D.向下傾斜假陰道的集精杯端，收集精液E.當(dāng)陰莖回縮自動(dòng)脫出時(shí)，將假陰道直立、放氣、放水F.精液送化驗(yàn)室進(jìn)行檢查2012/11/2138

公牛采精：

采精員站在臺(tái)畜的右后側(cè)，右手握住假陰道，集精杯一端向上。當(dāng)公畜爬跨時(shí)，使假陰道與公畜陰莖伸出方向成直線，迅速將陰莖導(dǎo)入假陰道內(nèi)，公畜的后軀向前沖即射精，隨后將假陰道集精杯一端向下傾斜，以便使精液完全流入集精杯內(nèi)。2012/11/2139

當(dāng)公畜爬下時(shí)，采精人員應(yīng)持假陰道隨陰莖后移，打開開關(guān)，放出空氣，待陰莖自行軟縮脫出后，迅速取下假陰道，立即送往精液處理室檢查，取下集精杯，蓋上集精杯蓋。

2012/11/21402012/11/2141

(二)手握法

手握法適宜于采集豬、犬、狐貍等的精液，具有設(shè)備簡單、操作方便、能采集富含精子部分的精液等優(yōu)點(diǎn)，但其缺點(diǎn)是精液容易污染和受低溫打擊的影響。手握法采精是模仿母豬子宮頸對公豬螺旋狀陰莖龜頭約束力而引起射精的生理刺激，以手握其陰莖龜頭呈節(jié)奏性松緊給予壓力進(jìn)行刺激而采精。當(dāng)公豬爬跨臺(tái)畜陰莖伸出后，采精員握在空拳中，使其陰莖抽動(dòng)片刻后，手指握緊螺旋狀龜頭，然后順勢牽出整個(gè)陰莖，就可采精。

2012/11/21422012/11/2143

采精員蹲在假臺(tái)畜一側(cè)，戴上滅菌手套，待公豬爬跨臺(tái)畜后，用0.1%高錳酸鉀溶液將公豬包皮附近洗凈消毒，并用生理鹽水沖洗，然后將手捏成空拳，于公豬陰莖伸出同時(shí)，導(dǎo)入空拳內(nèi)，一松一緊有節(jié)奏性地施加壓力，以不使陰莖滑脫為標(biāo)準(zhǔn)，待陰莖充分勃起時(shí)即可引起公豬射精。另一只手持保溫的集精瓶(帶有過濾紗布)收集濃精部分的精液。公豬射精停止，可按上述法再次施加壓力，即可第2或第3次射精，待射精全部結(jié)束時(shí)再松開陰莖。2012/11/21442012/11/2145分段采精：棄掉含副性腺分泌物多、精子較少、精液清亮白色的第一段和精液較稀、清亮、精子少的第三段，只收集精液濃、精子多、呈乳白色的第二段精液。2012/11/2146

(三)按摩法

按摩法適用于無爬跨能力的公牛和禽類。對于牛，先將直腸宿糞排除，再將手伸入直腸約25cm處，按摩精囊腺和輸精管壺腹，使精液流出，同時(shí)由助手按摩陰莖S狀彎曲部使陰莖伸出，便于收集精液。雞采精時(shí)由助手兩手分握公雞兩腿，以自然寬度分開，尾部朝向術(shù)者，泄殖腔周圍剪毛消毒后，采精員右手拇指與食指在泄殖腔下部兩側(cè)抖動(dòng)觸摸腹部柔軟處，然后迅速輕輕用力向上抵壓泄殖腔，使交配器翻出；固定在泄殖腔兩上側(cè)的左手拇指和食指微微擠壓，精液即可順利排出。2012/11/2147三、采精頻率

采精頻率是指每周對公畜的采精次數(shù)。1g睪丸組織每周大約生產(chǎn)5000萬精子。

牛：成年公牛一般每周采精2次，每次連續(xù)采精2遍。也可每周采精3次，隔日采精。牛每次射精約為100～150億。羊：附睪貯存量大而射精量少，由于配種季節(jié)短，每天可采精多次而不影響精液品質(zhì)。每次射精約為20～30億。

豬：射精量大，能很快使附睪內(nèi)貯存精子徹底排空，成年公豬采精最好隔日1次。每次射精約為300～500億。

馬：射精量大，很快使附睪內(nèi)貯存精子徹底排空，采精最好隔日1次。每次射精約為100～150億。2012/11/2148

精液品質(zhì)檢查的目的在于確定精液品質(zhì)的優(yōu)劣，以此作為精液稀釋、保存的依據(jù)。同時(shí)，也反映種公畜飼養(yǎng)管理水平和生殖器官的機(jī)能狀態(tài)，以及精液在稀釋、保存、冷凍和運(yùn)輸過程中的品質(zhì)變化及處理效果。采得精液后，要迅速置于37℃條件下進(jìn)行檢查。

第三節(jié)精液品質(zhì)檢查2012/11/2149

在檢查精液過程中應(yīng)注意：首先標(biāo)記清被檢精液的來源，檢查取樣具有代表性；檢查過程中不能使精液受到任何不良因素影響而遭受危害；檢查操作時(shí)力求動(dòng)作迅速，評定結(jié)果準(zhǔn)確。現(xiàn)行評定精液品質(zhì)的方法主要有外觀檢查法、顯微鏡檢查法、生物化學(xué)法等。無論哪一種檢查法，都必須以受精力高低為依據(jù)。2012/11/2150一、精液外觀和精液量1.云霧狀牛、羊、鹿、犬和狐的精液因精子密度大而混濁不透明。肉眼觀察剛采得的新鮮精液時(shí)，可看到如翻騰滾滾的霧狀，這是精子密度大而運(yùn)動(dòng)又非?；钴S的表現(xiàn)。精液混濁度越大，云霧狀越顯著，精子密度和活率也就越高。云霧狀顯著者可用“+++”表示；比較顯著用“++表示；不顯著用“+”表示；如果沒有云霧狀則用“-”表示。馬、豬的精子少，混濁度也較低，云霧狀不顯著。

2.氣味公畜的精液略帶腥味。如有異常氣味，可能是混有尿液、膿液、塵土、糞渣或其他異物的表現(xiàn)，應(yīng)廢棄。色澤與氣味檢查可以結(jié)合進(jìn)行，使鑒定結(jié)果更為準(zhǔn)確。

2012/11/2151新鮮收集的羊、牛、馬、豬（從左到右）的射出精液

3.色澤正常精液的顏色為乳白色和灰白色，且精子密度越高，乳白程度越濃，其透明度也就越低。正常牛、羊、鹿、犬和狐的精液均呈乳白色或灰白色，但有時(shí)呈乳黃色（多見于牛)；豬、馬、兔均為淡乳白色或淺灰白色。2012/11/2152

4.射精量

公畜一次采精射出精液的容量。射精量因動(dòng)物種類、品種及個(gè)體的不同而不同。同一個(gè)體也會(huì)因年齡、營養(yǎng)、性準(zhǔn)備、采精方法、采精頻率而有所變化。2012/11/2153畜種馬驢牛羊豬犬兔鹿狐平均射精量（ml）7050412505131正常范圍（ml）30～10020～802～100.5～2150～5002～150.2～22～50.5～3不同品種動(dòng)物射精量2012/11/2154二、精子活率

精子活率：就是指精液中呈直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子數(shù)占總精子數(shù)的百分比。直線運(yùn)動(dòng)的精子是指精子近似直線地從一點(diǎn)移動(dòng)或前進(jìn)到另一點(diǎn)，也稱為有效精子。精子的運(yùn)動(dòng)方式有擺動(dòng)、旋轉(zhuǎn)、曲線前進(jìn)和直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)幾種。其中只有直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子才具有正常的生存和受精能力，與精子的受精力密切相關(guān)。2012/11/2155精子活率的測定是評定精液品質(zhì)優(yōu)劣的一個(gè)重要指標(biāo)。一般在采精后、精液處理前后、輸精前都應(yīng)進(jìn)行檢查。2012/11/2156

精子活率的檢查通常是在200～400倍顯微鏡下進(jìn)行。由于精子受溫度的影響較大，檢查時(shí)應(yīng)在37℃左右進(jìn)行，最好用帶有電熱裝置的顯微鏡。

2012/11/2157

精子活率一般采用十級評分法來表示。即按精子直線運(yùn)動(dòng)占視野中精子的估計(jì)百分比來表示。若精子100%呈直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)，則評為1.0，90%即為0.9，依此類推。一般新鮮精液活率為0.7～0.9左右。其中奶牛的精液比水牛高，驢的比馬的高，豬的濃精和牛相似。為了保證有較高的受胎率，用于輸精的精子活率應(yīng)達(dá)到一定等級，液態(tài)保存的精液應(yīng)在0.5～0.6以上，冷凍保存的精液在0.3以上。2012/11/2158牛精子活力檢查的程序載玻片預(yù)溫精液稀釋取樣檢查鏡檢活力估測活力記錄將恒溫加熱板放在載物臺(tái)上，打開電源并調(diào)整控制溫度至37℃，然后放置載玻片

將生理鹽水與精液等溫后，按1:10稀釋取10ul放在預(yù)溫后載玻片中間，蓋上蓋玻片用100倍和400倍觀察判斷視野中前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子占的百分率

按10級制評分和記錄2012/11/2159三、精子密度

精子密度：也稱精子濃度，指精液的單位容積(通常是1ml)內(nèi)所含有的精子數(shù)目。目前測定精子密度的主要方法有目測法、血細(xì)胞計(jì)數(shù)法和光電比色法等。

1.目測法在顯微鏡下根據(jù)精子分布的稠密和稀疏程度，將精子大致分為“密”、“中”、“稀”三個(gè)等級。2012/11/2160

密：表示在整個(gè)視野里精子密度很大，彼此之間空隙很小，很難看到單個(gè)精子運(yùn)動(dòng)情況，每毫升精液中含有精子數(shù)為10億以上。中：表示精子間空隙明顯，彼此間距離約一個(gè)精子的長度，每毫升精液含精子數(shù)大約2～10億。

稀：表示精子分散在視野中，精子之間空隙超過一個(gè)精子的長度，每毫升含2億個(gè)以下。

2012/11/2161

畜種精子密度密中稀牛10～20億/ml8～10億/ml8億/ml以下羊25億/ml以上20～25億/ml20億/ml以下豬、馬2億/ml以上1～2億/ml1億/ml以下2012/11/2162

2.血細(xì)胞計(jì)數(shù)法：用血色素吸管吸取被測精液作100或200倍稀釋，稀釋液用3%NaCl溶液。然后取一滴滴于計(jì)數(shù)板上的蓋玻片邊緣，使精液滲入到計(jì)數(shù)室內(nèi)。在400～600倍顯微鏡下統(tǒng)計(jì)出計(jì)數(shù)室的四角及中央共5個(gè)中方格內(nèi)的80個(gè)小方格內(nèi)的精子數(shù)（X），代入下列公式即為每毫升被測原精液所含的精子數(shù)

X×5×10×稀釋倍數(shù)×1000＝精子數(shù)/mL簡化計(jì)算：5個(gè)大方格的精子數(shù)×5萬×稀釋倍數(shù)為減少誤差，須進(jìn)行兩次計(jì)數(shù)，且誤差小于10%。2012/11/21632012/11/21642012/11/2165

3.光電比色計(jì)測定法目前較準(zhǔn)確用來測定精子密度的一種簡便方法，適用于牛、羊的精液和除去精液膠樣物的各種動(dòng)物精液。其原理是精液中精子越多、其透光性越低。使用光電比色計(jì)通過反射光和透射光檢驗(yàn)，能準(zhǔn)確測定精液中精子的密度。檢測前需先繪制成查數(shù)表。2012/11/2166

3.光電比色計(jì)測定法操作方法：將原精液稀釋成不同比例，并以血細(xì)胞計(jì)數(shù)器測定各種稀釋比例的精子密度，制成標(biāo)準(zhǔn)管，再用光電比色計(jì)測定已知精子密度的各種標(biāo)準(zhǔn)透光度求出相差1%透光率的級差精子數(shù)，根據(jù)其不同透光度與其對應(yīng)的精子數(shù)，制成精子查數(shù)表，也可繪成曲線圖。測定精液樣品時(shí)，只要將原精液按一定比例稀釋，根據(jù)其透光度查對精子查數(shù)表，即可得出精液樣品的精子密度。2012/11/2167四、精子形態(tài)精子形態(tài)是否正常與母畜的受胎率密切相關(guān)。精子形態(tài)檢查有畸形率和頂體異常率檢查兩個(gè)方面。

1.精子畸形率：畸形精子是形態(tài)和結(jié)構(gòu)不正常的精子的統(tǒng)稱。精子畸形率是精液中畸形精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率。根據(jù)精子的畸形部位，可分為4類。

2012/11/2168

第1類：頭部畸形，如頭部巨大、瘦小、細(xì)長、圓形、輪廓不清、皺縮、缺損、雙頭等；

第2類：頸部畸形，如頸部膨大、纖細(xì)、屈折、不全、帶有原生質(zhì)滴、不鮮明、雙頸等；

第3類：中段畸形，如中段膨大、纖細(xì)、不全、帶有原生質(zhì)滴、雙體等；第4類：主段畸形，如主段彎曲、屈折、回旋、短小、長大、缺陷、帶有原生質(zhì)滴、雙尾等，以中段和主段畸形為多。2012/11/2169

2012/11/2170

在正常精液中，一般以精子尾部畸形比較多見，頭部和頸部畸形較少。動(dòng)物精液中畸形精子率一般不會(huì)超過20%。牛不超過18%，水牛不超過15%，羊不超過14%，豬不超過18%，馬不超過12%，狗和狐不超過20%。如果超過20%，則影響受精力，表示精子品質(zhì)不良，不宜用作輸精。2012/11/21711.將1滴精液滴在玻璃片上2.用另一玻片拉向液滴，使玻璃片邊緣附著精液3.將玻片推向另一端2012/11/2172

●精子生成過程受阻●副性腺及尿道分泌物的病理變化●精液處理不當(dāng)，精子遭受外界不良影響的刺激?；尉拥臋z查，可在計(jì)數(shù)死活精子數(shù)的同時(shí)進(jìn)行，也可將精液制成抹片直接在顯微鏡下觀察，或用普通染色液（美藍(lán)）或紅藍(lán)墨水染色，水洗干燥后鏡檢。檢查的精子數(shù)不得少于200個(gè)，計(jì)算畸形百分比，即畸形率。畸形精子出現(xiàn)的主要原因?yàn)槭裁矗?012/11/2173

2.精子頂體異常率

精子頂體異常率是指精液中頂體異常的精子數(shù)占精子總數(shù)的百分率。頂體中含有多種酶類，在受精過程中具有重要作用，因此只有呈直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)并具有完整頂體的精子才具有正常的受精能力。2012/11/2174

2.精子頂體異常率在正常情況下，牛精子頂體異常率為5.9%，豬為2.3%。如頂體異常率顯著增加，例如牛超過14%以上，豬超過4.3%以上，就會(huì)直接影響受精力。頂體異常主要有膨脹、缺損、部分脫落、全部脫落等數(shù)種。頂體異常出現(xiàn)的原因可能與精子生成過程和副性腺分泌物異常有關(guān)，但更重要的可能是由于射出體外后精子受低溫打擊，特別是冷凍方法不當(dāng)而造成。2012/11/2175

頂體異常率的常規(guī)檢查方法是：先同畸形精子檢查一樣制成抹片，待自然干燥后再在固定液中固定片刻，水洗后用姬姆薩緩沖液染色1.5～2.0h，再水洗干燥后，用樹脂封裝，置于1000倍以上顯微鏡或相差顯微鏡下觀察200個(gè)以上的精子，計(jì)算異常率。凡是含有卵黃、甘油成分稀釋液的精液抹片，必須先要在含有甲醛的檸檬酸鹽液中固定，然后在37℃下干燥后，才能染色和鏡檢。2012/11/21762012/11/2177五、精子存活時(shí)間和存活指數(shù)精子存活時(shí)間是指精子在體外一定保存條件下的總生存時(shí)間。存活指數(shù)是指精子存活時(shí)間及精子活率變化的一項(xiàng)綜合指標(biāo)，反映精子活率下降速度。檢查時(shí)，將稀釋后的精液置于一定的溫度下(0～5℃或者37℃)，間隔一定時(shí)間檢查活率，直至無活動(dòng)精子或只有個(gè)別精子呈擺動(dòng)活動(dòng)為止。精子存活時(shí)間越長，指數(shù)越大，說明精子生活力越強(qiáng)，品質(zhì)越好。2012/11/2178精子存活時(shí)間（h）：檢查間隔時(shí)間的總和－最末兩次檢查間隔時(shí)間的一半

精子存活指數(shù)＝每前后相鄰兩次檢查精子活率的平均數(shù)與間隔時(shí)間乘積的總和。2012/11/2179六、精子代謝能力精子能量代謝的強(qiáng)弱在一定程度上反應(yīng)了精子的生理特征及其受精潛能。在正常情況下，精子代謝主要利用生活環(huán)境中的外源性物質(zhì)，其中以糖類為主，精子可通過糖酵解或呼吸作用而獲得能量?？梢?，精子代謝能力越強(qiáng)，消耗的糖和氧氣越多，表現(xiàn)活動(dòng)力越強(qiáng)。2012/11/2180六、精子代謝能力1.精子耗氧量測定指以1億個(gè)精子在37℃的條件下每小時(shí)內(nèi)所消耗的氧氣的微升數(shù)。將已知精子密度的一定數(shù)量的精液置于37℃的溫箱中孵育1h，用瓦氏呼吸器測定其耗氧量，則可計(jì)算出精子耗氧率。

2.精液果糖分解測定精液中果糖分解能力與精子活率有密切的關(guān)系。果糖測定是以1億精子在37℃和嫌氧條件下每小時(shí)消耗果糖的毫克數(shù)。2012/11/2181

3.美藍(lán)褪色試驗(yàn)美藍(lán)是一種氧化還原劑，氧化后呈藍(lán)色，而還原后呈無色。精子在美藍(lán)溶液中，呼吸時(shí)氧化脫氫，美藍(lán)獲得氫離子后便由藍(lán)色還原為無色。因此，根據(jù)美藍(lán)溶液褪色時(shí)間的快慢，便可估測精子的活率和密度的高低。2012/11/2182

七、精液的細(xì)菌學(xué)檢查精液中病原微生物及菌落數(shù)量已列入評定精液品質(zhì)檢查的重要指標(biāo)，并作為海關(guān)進(jìn)出口精液的重要檢驗(yàn)項(xiàng)目。精液中如果含有大量細(xì)菌微生物的存在，不僅會(huì)影響精子壽命和降低受精能力，而且還將導(dǎo)致有關(guān)疾病的傳播。精液中如果含有病原微生物，每毫升精液中細(xì)菌菌落數(shù)超過1000個(gè)，則視為不合格。2012/11/2183計(jì)算機(jī)輔助精子分析（computerassistantsemenassay,CASA)2012/11/21842012/11/2185一、精液稀釋的目的

精液稀釋是在精液中加入一定量按特定配方配制的、適宜于精子存活并保持受精能力的稀釋液。1.延長精子的存活時(shí)間。通過降低精液能量消耗，補(bǔ)充適量營養(yǎng)和保護(hù)物質(zhì)，抑制精液中有害微生物活動(dòng)，可延長精子的壽命。

2.擴(kuò)大精液容量，提高配種率。即提高一次射精量可配母畜頭數(shù)。

3.便于精液長期保存和運(yùn)輸。第四節(jié)精液的稀釋2012/11/2186二、稀釋液的主要成份及作用

稀釋液：加入精液中的等滲溶液。（一）主要成份1.奶類：牛奶、羊奶、奶粉，最好是各種鮮奶，其目的是為精子提供能量。鮮奶用前在92～95℃的條件下，經(jīng)10min的熱處理，除去其中的乳烴素，然后過濾，除去泡沫。

2.卵黃：含有卵磷酯，用1周以內(nèi)的新鮮雞蛋，涼開水洗凈外殼，用75%的酒精消毒一次，晾干，打開后用注射器吸取卵黃。

2012/11/21873.甘油（丙三醇）：三個(gè)“－OH”親水性強(qiáng)，具有抗凍作用。4.Tris（三羥基甲基氨基甲烷，三基）：非電解胺化物。作用：①調(diào)節(jié)pH值；②保護(hù)精子具有受精能力和不被凍傷等。5.糖類（果糖、葡萄糖等）：①抗凍；②提供能量；③降低電解質(zhì)濃度。

6.其它：丙二醇、生理鹽水、酶類、非電解質(zhì)、激素、維生素等。

2012/11/21882012/11/2189

（二）稀釋液中各成份

1.稀釋劑：擴(kuò)大精液容量，要求必須是等滲溶液，例如奶類、糖類、生理鹽水等。2.營養(yǎng)劑：為精子提供營養(yǎng)和能量等，補(bǔ)充精子在代謝過程中的能量消耗。精子代謝只是單純的分解作用，不能通過同化作用將外界物質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)樽陨沓煞帧Ｌ穷悾ㄆ咸烟?、果糖、乳糖等）、奶類、卵黃等。3.保護(hù)劑：保護(hù)精子的作用，以免受到各種不良外界環(huán)境的危害。2012/11/2190

①降低精液中（精清）的電解質(zhì)濃度（糖類、磷酸鹽、酒石酸鹽等）精清中電解質(zhì)濃度很高，生理上具有激發(fā)精子活動(dòng)，有利于精子和卵子結(jié)合受精。但同時(shí)也能促進(jìn)精子早衰，破壞精子脂蛋白膜，使精子失去電荷聚集能力，不利于精液保存。一般常用的非電解質(zhì)、弱電解質(zhì)有各種糖類、氨基乙酸、甘氨酸等。

各種成分的具體作用：2012/11/2191

②緩沖物質(zhì)的作用：緩沖劑（檸檬酸鈉、酒石酸鉀鈉等）緩沖物質(zhì)是用以保持精液適當(dāng)?shù)膒H值。常用的緩沖劑有檸檬酸鈉、酒石酸鉀鈉、磷酸二氫鉀以及三羥甲基氨基甲烷(Tris)等。2012/11/2192

③防止冷休克（低溫打擊）的作用當(dāng)精子從體溫降到20℃時(shí)對其活力影響不大，當(dāng)精液從20℃下降至10℃，則有較大影響，會(huì)使精子遭受冷打擊而喪失活率。卵黃和奶類等含有卵磷脂，防止冷休克的發(fā)生。

當(dāng)從10℃降到0℃（急劇降溫10～20分鐘），就會(huì)造成精子的不可逆性死亡，即冷休克。這是因?yàn)榫雍械目s醛磷脂融點(diǎn)高，在低溫下容易凝結(jié)，而不能被精子利用，造成精子不可逆的冷休克。2012/11/2193

④抗凍作用：具有抗冷凍危害的作用。精液在冷凍過程中，精子內(nèi)外環(huán)境的水分，必須經(jīng)歷液態(tài)和固態(tài)的過程，這種物態(tài)的轉(zhuǎn)化對精子具有極大的危害。而抗凍物質(zhì)有助于減輕或消除這種危害。一般常用于抗凍的保護(hù)物多采用甘油、糖類、二甲基亞砜（DMSO），TRIS等。

⑤抗菌作用。在采精過程中即便在嚴(yán)格的操作下，也難免要受到某些細(xì)菌等有害微生物的污染，而精液和稀釋液又都是病原微物良好的培養(yǎng)基。常用的抗生素有青霉素、鏈霉素、氨苯磺胺素、林肯霉素、多粘菌素等。2012/11/21944.其它類物質(zhì)

①酶類：乳酸脫氫酶，細(xì)胞色素氧化酶，琥珀酸脫氫酶，β-葡萄糖苷酸酶，谷草轉(zhuǎn)氨酶，過氧化氫酶，粘蛋白酶等。

②激素：催產(chǎn)素，PGE2，PGF2α,T等。

③維生素：VC,VB2,B12,VE等。酶類、激素類、維生素類等，有助于調(diào)節(jié)和改善精子外在環(huán)境的理化特性，以及母畜生殖道的生理機(jī)能，以利于提高受精機(jī)會(huì)，促進(jìn)合子發(fā)育。④常溫保存時(shí)通入CO2可延長保存時(shí)間。⑤在顆粒精液中加入染料用作標(biāo)志等。2012/11/2195三、稀釋液配制的注意事項(xiàng)

1.消毒：配制好的稀釋液，瓶口用硫酸紙包好，外用布蓋上，扎緊，置高壓鍋中，0.8kg、105℃的壓力維持30min；糖類稀釋液只能用0.5kg的壓力，或用水煮沸30min即可。2.用于配制稀釋液以及封裝保存精液的一切用品，都必須消毒，使用前再用稀釋液沖洗2～3次。3.稀釋液應(yīng)新鮮、無菌，現(xiàn)用現(xiàn)配。2012/11/21964.在稀釋液中加入卵黃、奶類及抗菌素等藥物應(yīng)在稀釋液降溫到35℃以下時(shí)再加入。

5.稀釋液加入卵黃和抗菌素前應(yīng)過濾。0.02～0.2μm濾膜。6.成本低，配制方便，精子存活率高，受胎率高。2012/11/2197四、精液的稀釋

（一）稀釋液的種類根據(jù)性質(zhì)和用途可分為4類。1.現(xiàn)用稀釋液：適用于采精后立即授精，以單純擴(kuò)大精液容量，增加輸精母畜頭數(shù)為目的。此類型稀釋液以簡單的等滲的糖類和奶類為主體。

2.常溫保存稀釋液：適用于精液在常溫下作短期保存，具有以糖類和弱酸鹽為主體的pH偏低的特點(diǎn)。

3.低溫保存稀釋液：適用于精液低溫保存，具有含卵黃或奶液為主體的抗冷休克特點(diǎn)。2012/11/2198

4.冷凍保存稀釋液：適用于精液超低溫冷凍保存，具有甘油、二甲亞砜等抗凍物質(zhì)為主體特點(diǎn)，此類稀釋液比較復(fù)雜，有僅一種稀釋液組成，也有由多種稀釋液組成。2012/11/2199

（二）精液稀釋的方法

1.先將稀釋精液所用的器具加溫到30～35℃，并用等溫稀釋液沖洗2～3次（防止溫度和滲透壓的損害）。2.新采集的精液及時(shí)稀釋，室溫低于20℃時(shí)，要用精液無菌保溫箱。精液放置時(shí)間過長則會(huì)降低精子活率，一般在0.5h內(nèi)進(jìn)行稀釋。

2012/11/211003.稀釋液與精液的溫度必須一致，可用消毒溫度計(jì)測量。采精時(shí)集精杯加保溫措施，稀釋液預(yù)先加溫到30℃左右，置于精液保溫箱中。

4.在稀釋精液時(shí)，將稀釋液沿杯壁緩緩加入精液中，一般將稀釋液與精液置于預(yù)定溫度的保溫瓶中作等倍稀釋處理。然后輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)精液瓶或用滅菌棒攪動(dòng)，使之混勻。2012/11/21101

5.如果進(jìn)行低倍稀釋（3～5倍）可一次完成，若高倍稀釋時(shí)則須分兩步進(jìn)行，即先低倍稀釋，防止精子所處的環(huán)境突然改變，對精子造成打擊。間隔1.5～2h后，精液降至保存（平衡）溫度時(shí)，進(jìn)行二次稀釋。6.精液稀釋后，先靜置片刻，再做活率檢查，如果活率沒有變化，則分裝保存。如果活率下降，則說明稀釋或操作不當(dāng)，不宜使用，并檢查原因。2012/11/21102

（二）稀釋倍數(shù)精液的稀釋應(yīng)保證每輸精劑量所含直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子數(shù)不低于輸精標(biāo)準(zhǔn)要求。精液稀釋倍數(shù)應(yīng)根據(jù)以下依據(jù)決定：

1.稀釋液種類：糖類稀釋液→低倍稀釋，奶類稀釋液→高倍稀釋。

2.保存時(shí)間：時(shí)間長→高倍稀釋，時(shí)間短→低倍稀釋。

3.精液保存方法：冷凍保存稀釋倍數(shù)應(yīng)低一些，而液態(tài)保存稀釋倍數(shù)可高些。

4.畜種：羊、牛、鹿精子密度大，稀釋的倍數(shù)應(yīng)大一點(diǎn)，而豬、馬密度小，則不宜作高倍稀釋。2012/11/21103（三）每次輸精保持受精力所需的最低有效精子數(shù)畜種牛山羊豬馬稀釋倍數(shù)10～402～42～42～3輸精量（mL）0.2～10.5～130～4015～30有效精子數(shù)2000～5000萬5000萬2億2.5～5億牛：射精量8ml，活率0.7，密度12億個(gè)/ml，每毫升精液中有效精子數(shù)12×0.7=8.4億個(gè)，若每毫升稀釋后的精液中含有3000萬個(gè)有效精子，則每毫升可稀釋倍數(shù)8.4億÷0.3億=28倍?？上♂專?ml×28=224ml，可供224頭母牛輸精。2012/11/21104一、保存目的

1.延長精子存活時(shí)間，保持其受精能力；2.擴(kuò)大種公畜（優(yōu)良）精液利用率；3.方便運(yùn)輸，擴(kuò)大精液的利用范圍。二、保存方法

（一）常溫保存法

常溫保存是指在15～25℃之間的溫度范圍內(nèi)保存精液的方法。

1.原理：利用稀釋液的弱酸性（pH6.2～6.4）環(huán)境抑制精子活動(dòng)，以減少其能量消耗，使精子保持在可逆性的靜止?fàn)顟B(tài)而不失去受精能力。即當(dāng)精液pH值降低到一定的酸度時(shí)，精子運(yùn)動(dòng)及代謝受到可逆性抑制，但當(dāng)pH值恢復(fù)到精液正常的pH值時(shí)，精子可以復(fù)蘇，從而對精液進(jìn)行保存的方法。第五節(jié)精液的保存2012/11/21105

2.調(diào)整pH的方法：為了使稀釋液的pH達(dá)到所需范圍，可以選用下面三種方法中的一種：（1）向稀釋液中輸入CO2，如伊里尼變溫稀釋液(IVT)。（2）利用精子在保存過程中自己產(chǎn)生的CO2，自行調(diào)節(jié)pH，如康奈爾大學(xué)稀釋液(CUE)。（3）在稀釋液中配有酸類物質(zhì)和充以氮?dú)猓缫阉嵯♂屢杭耙恍┲参镏海ㄒ♂屢?，CME）。2012/11/21106牛冷凍精液稀釋液配方

●海帶多糖0.025～

0.2％、葡萄糖2～

2.5％、檸檬酸鈉0.9～

1.5％、蒸餾水65～

75％、白蛋白17～

18％、甘油7～

10％、青霉素8.5～

10萬IU

●果糖0.5～1.5％、檸檬酸鈉1～2％、TRIS1.5～3％、青霉素G鈉5～15萬IU、甘油5～8％、低密度脂蛋白5～10%、去離子水92～95％

2012/11/21107

3.稀釋液配制：牛的檸檬酸鉀鈉稀釋液（100ml）。配方：檸檬酸鉀0.11g磺胺粉0.3g檸檬酸鈉0.6g卵黃10ml磷酸氫二鈉0.15g青鏈霉素各10萬葡萄糖0.97g蒸餾水加到100ml

配制方法：將檸檬酸鉀、檸檬酸鈉、磷酸氫二鈉、葡萄糖和磺胺粉溶于蒸餾水，加熱煮開，并冷卻后加入卵黃和抗菌素，通入CO220～30min，控制pH在6.2～6.4。2012/11/21108

（二）低溫保存法

低溫保存就是將稀釋過的精液置于0～5℃的低溫條件下保存。通常放在冰箱內(nèi)或裝有冰塊的廣口保溫瓶中冷藏。1.原理：在低溫（0～5℃）保存過程中，精子處于休眠狀態(tài)，代謝降到最低水平，并且在采精以及精液稀釋等操作過程中混入的細(xì)菌微生物的繁殖與危害也受到抑制，故精子能夠保存的時(shí)間相對較長。在輸精的時(shí)候，將溫度回升至37℃左右，精子又能逐漸恢復(fù)正常的代謝，并保持其正常的受精能力。然而，精子對冷刺激，特別是溫度急劇下降至10℃以下時(shí)，會(huì)使精子發(fā)生不可逆的冷休克現(xiàn)象。因此，在稀釋液中須添加卵黃、奶類等抗休克物質(zhì)，以提高精子的抗冷能力。2012/11/21109

2.稀釋液（1）牛精液低溫保存稀釋液在0～5℃條件下，有效保存期可達(dá)7d之久。牛的檸檬酸鈉--卵黃稀釋液?；A(chǔ)液：取二水檸檬酸鈉2.9g，加水定溶于100ml。稀釋液：基礎(chǔ)液75ml，卵黃25ml，青鏈霉素各1000IU/ml。（2）豬精液低溫保存稀釋液豬的濃份精液或離心后的精液，可在5～10℃條件下保存3d，且具有受精能力。在0～5℃下也可保存。豬：取新鮮牛、羊奶100ml，煮沸10min，去掉浮沫，冷卻過濾加入青鏈霉素1000單位/ml。2012/11/21110

（3）馬和綿羊精液低溫保存稀釋液由于精液本身的特性以及季節(jié)配種的影響，馬和綿羊精液的低溫保存效果不如其它家畜的效果好。因此，在生產(chǎn)中的應(yīng)用并不普遍。

3.精液保存方法（1）冰箱保存法：冷源是冰箱。將稀釋好的精液裝入貯精瓶封裝后，用12層紗布或3～4層毛巾包裹，外用塑料薄膜用皮筋扎緊，先在室溫下降溫1h，再用8～15℃涼水冷卻1h，然后放入2～5℃的冰箱中逐漸冷卻（2h以上），嚴(yán)格控制溫度，并保持恒定。（2）冰塊保存法。（3）農(nóng)村可用水井或窖進(jìn)行保存。2012/11/21111

4.注意事項(xiàng)

(1)稀釋液必須含有卵黃或奶類；卵黃用量一般在10～30%，牛奶適量。

(2)緩慢降溫牛、羊、驢：20℃—0～5℃，約1～2h，0.2℃/min豬：30℃～15℃→1～2h；15～10℃→6h；10℃～0℃→2～3d。2012/11/21112

（三）超低溫（冷凍）保存

精液冷凍保存，是利用干冰(－79℃)、液氮(－196℃)或其它制冷設(shè)備作為冷源，將精液經(jīng)過特殊處理后，保存在低溫下，以達(dá)到長期保存精液的目的。1.原理精子具有受溫度變化直接影響其本身活動(dòng)力和代謝能力的生物學(xué)特性。精子保存在超低溫狀態(tài)下，其代謝活動(dòng)完全受到抑制，生命以相對靜止?fàn)顟B(tài)保持下來，一旦升溫又能復(fù)蘇而不失去受精能力。精子之所以能夠復(fù)蘇的關(guān)鍵在于精液在冷凍過程中，在冷凍劑的保護(hù)下，防止了精子水分冰晶化對精子的破壞，而盡可能形成玻璃化。2012/11/21113

冰晶化是水在降溫過程中的一定溫度條件下，水分子重新按照幾何圖形排列形成冰晶的過程。冰晶改變了精子膜的溶質(zhì)濃度和滲透壓，造成精子脫水，發(fā)生不可逆的化學(xué)毒害而死亡。冰晶化只有當(dāng)溫度在0～－60℃溫度范圍內(nèi)緩慢降溫時(shí)形成，降溫越慢冰晶越大，－15～－25℃形成冰晶最多。在冷凍精液過程中，只有避開0～－60℃有害溫區(qū)，才有利于精子長期保存。2012/11/21114玻璃化的冰凍狀態(tài)是水在超低溫下，水分子仍然保持原來自然的一種無次序的排列狀態(tài)，形成玻璃樣的堅(jiān)硬而均勻的冰結(jié)。在此狀態(tài)下，精子不會(huì)發(fā)生細(xì)胞脫水，結(jié)構(gòu)維持正常，解凍后可以復(fù)蘇。2012/11/21115

2.冷源

干冰：（-79℃），液N：（-196℃），液O：（-183℃），液H：（-253℃），液He：（-269℃）。2012/11/211163.劑型目前廣泛應(yīng)用的劑型為細(xì)管型，在冷凍精液早期也曾使用過顆粒型和安瓿型。

（1）細(xì)管型以長125～133mm、容量為0.25或0.5ml的各種顏色的聚氯乙烯復(fù)合塑料細(xì)管，通過吸引裝置將平衡后的精液進(jìn)行分裝、封口，置液氮蒸氣上冷卻，再浸入到液氮中保存。細(xì)管型精液具有許多優(yōu)點(diǎn)，適于快速冷凍，精液細(xì)管內(nèi)徑小，每次凍制細(xì)管多，精液受溫均勻，冷凍效果好，精液不必暴露就可直接輸入母畜子宮內(nèi)因而不受污染，劑量標(biāo)準(zhǔn)化，標(biāo)記明顯，精液不易混淆，容積小，便于大量保存，精液消耗少，輸精母畜受胎率高。適用于機(jī)械化生產(chǎn)。2012/11/21117細(xì)管型凍精設(shè)備2012/11/21118細(xì)管型凍精設(shè)備2012/11/21119

（2）顆粒型將0.1ml精液滴凍在經(jīng)液氮冷卻的聚乙烯氟板或金屬板上，制成顆粒。其優(yōu)點(diǎn)是方法簡便、易于制作，成本低，體積小，便于大量貯存。但缺點(diǎn)也較多，如劑量不標(biāo)準(zhǔn)，精液暴露在外容易受到污染，不易標(biāo)記，易混淆，大多需解凍液解凍等，故許多國家已不用這種方法。（3）安瓿[bù]

型采用硅酸鹽硬質(zhì)玻璃制成的安瓿，盛裝精液劑量多為0.5～1ml。優(yōu)點(diǎn)是劑量標(biāo)準(zhǔn)，不受污染，標(biāo)記明顯。缺點(diǎn)是生產(chǎn)工藝復(fù)雜，成本比較高；易破碎，體積和占用的空間比較大；解凍后需要轉(zhuǎn)移到輸精器內(nèi)方可使用。2012/11/21120

4.精液冷凍保存的稀釋液根據(jù)配制要求和稀釋的需要，可將冷凍保存稀釋液分別制成三種溶液。A.基礎(chǔ)液：將糖類、鹽類，成批量的制成溶液，并密封保存。奶類經(jīng)熱處理。B.I液：根據(jù)每次采精所需的冷凍稀釋液的量，在基礎(chǔ)液中加入一定量的卵黃和抗生素等配制成，用作第一次稀釋?；A(chǔ)液+卵黃+抗生素。C.II液：取需要量的I液，按照比例加入經(jīng)滅菌的甘油，配制成含有甘油的II液，用作精液的第二次稀釋。Ⅰ液+甘油。牛精液冷凍保存稀釋液主要有3種：卵黃－檸檬酸鈉－甘油液、卵黃－糖類－甘油、奶類－甘油液。2012/11/21121例：牛細(xì)管用冷凍稀釋液基礎(chǔ)液：2.9%的檸檬酸鈉液。Ⅰ液：取基礎(chǔ)液80mL，卵黃20mL，青霉素10萬單位。Ⅱ液：含7%甘油的Ⅰ液。牛顆粒用冷凍稀釋液基礎(chǔ)液：蔗糖（乳）12g，蒸餾水加至100mL。Ⅰ液：基礎(chǔ)液80mL+卵黃20mL+青霉素10萬單位。Ⅱ液：含7%甘油的Ⅰ液。2012/11/21122稀釋液成分與配比◆冷凍保存稀釋液的成分

※低溫保存劑(卵黃、奶類)防凍保護(hù)劑(甘油)※維持滲透壓物質(zhì)(糖類、檸檬酸鈉等)※抗菌素及其他添加劑◆牛精液冷凍保存稀釋液●乳糖-卵黃-甘油(乳卵甘液)●蔗糖-卵黃-甘油(蔗卵甘液)●葡萄糖-卵黃-甘油(葡卵甘液)●葡萄糖-檸檬酸鈉-卵黃-甘油液(葡檸卵甘液)2012/11/21123國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：牛冷凍精液細(xì)管型容量為0.25ml,含直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子不低于1000萬個(gè)；顆粒型精液容量為0.1ml，含直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)不低于1200萬個(gè)。解凍后精子活力不低于0.3。0.25ml細(xì)管型冷凍精液稀釋倍數(shù)應(yīng)該為：X=直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)/ml×預(yù)測精子活力(≥0.3)×0.25ml/1000萬

精液冷凍前的稀釋倍數(shù)2012/11/21124

5.冷凍精液的制作技術(shù)

（1）精液的稀釋采用的冷凍精液劑型不同，所采用的稀釋液的配方、稀釋倍數(shù)和次數(shù)也不盡相同，一般多采用一次或二次稀釋法。A一次稀釋法：常用于顆粒精液，將含有甘油抗凍劑的稀釋液按稀釋比例一次同溫稀釋精液。B二次稀釋法：常用于細(xì)管精液的冷凍，也適用于安瓿冷凍。將采出的精液在等溫條件下，先用不含甘油的I液稀釋至最終倍數(shù)的一半。稀釋后的精液經(jīng)1～1.5h緩慢降溫至4～5℃。再用含有甘油的II液在等溫條件下做等量的第二次稀釋。2012/11/21125

（2）精液平衡精液經(jīng)含有甘油的稀釋液（II液）稀釋后，緩慢降溫至4～5℃并放置一段時(shí)間，以增強(qiáng)精子的抗凍性，起到抗凍保護(hù)作用，這個(gè)處理過程稱做平衡。平衡時(shí)間通常為2～4h為宜。2012/11/21126（3）精液的冷凍

A顆粒冷凍法：在裝有液氮的廣口保溫容器上置一個(gè)銅紗網(wǎng)(或鋁飯盒)，距液氮面1～3cm，預(yù)冷數(shù)分鐘，使其溫度維持在－80～－120℃，也可用聚四氟乙烯板（氟板）代替銅紗網(wǎng)，先在液氮中浸泡數(shù)分鐘后，置于距液氮面2cm處，然后將經(jīng)平衡的精液定量均勻而整齊的滴于其上，每粒0.1ml，停留2～4min后，當(dāng)精液顏色變白時(shí)，將顆粒置于液氮中。取出1～2粒解凍，活率達(dá)到0.3以上者貯存于液氮灌中。2012/11/21127冷凍精液顆粒制作精液顆粒2012/11/21128

B細(xì)管精液冷凍法：將細(xì)管放在距離液氮面上2～3cm的銅紗網(wǎng)上，停留5min左右，等精液凍結(jié)后，移入液氮中貯存。細(xì)管冷凍的自動(dòng)化操作是使用控制液氮噴量的自動(dòng)記溫速凍器，5～－60℃每分鐘降4℃，－60℃后盡快降到－196℃。2012/11/21129（4）精液的解凍

細(xì)管型、安瓿型凍精：直接將其投入到38～40℃的溫水中，待凍精融化一半時(shí)，立即取出備用。

顆粒型凍精：①干解凍：將凍精顆粒直接放入38℃～40℃的小試管中解凍，待溶化到1/2時(shí)取出在常溫下完全解凍；②濕解凍：在預(yù)熱的試管中加入解凍液（VB12等），待融化到1/2左右取出，在常溫下完全解凍。2012/11/211302012/11/21131

6.精液冷凍保存的注意事項(xiàng)：（1）冷凍精液的包裝上須明確標(biāo)明公畜品種、編號(hào)、生產(chǎn)日期、精子活率及數(shù)量，將冷凍精液分類裝入液氮罐提筒內(nèi)，浸入液氮貯存。（2）冷凍精液的保存原則是精液細(xì)管不能脫離液氮，因而必須定期向液氮灌內(nèi)添加液氮，當(dāng)液氮消耗掉1/2時(shí)應(yīng)補(bǔ)充。

冬季1次/月，夏季2～3次/月。2012/11/21132（3）取細(xì)管精液時(shí)，動(dòng)作要快，不可將精液提筒超出液氮灌頸部下沿，精液脫離液氮的時(shí)間不得超過10秒鐘。（4）保存中不同品種和不同個(gè)體的精液不能混雜。

（5）液氮灌要輕拿輕放，安放牢固，避免強(qiáng)烈震動(dòng)。2012/11/21133

輸精就是將一定量的合格精液輸入到發(fā)情母畜生殖道內(nèi)的一定部位，從而使其達(dá)到妊娠的操作技術(shù)，是人工授精的最后一個(gè)環(huán)節(jié)。一、輸精前的準(zhǔn)備1.輸精器械的準(zhǔn)備輸精器械在使用前必須經(jīng)過徹底的洗滌和消毒，最后用稀釋液沖洗。

第六節(jié)輸精2012/11/21134

2.母畜的準(zhǔn)備接受輸精的母畜要進(jìn)行保定，并對母畜的外陰及其附近皮膚用肥皂水擦洗干凈，并用消毒液進(jìn)行消毒，然后用溫水或生理鹽水沖洗擦干。2012/11/21135

3.精液的準(zhǔn)備液態(tài)保存的精液活率不低于0.6，冷凍保存的精液解凍后精子活率不低于0.3。4.輸精人員準(zhǔn)備輸精員的指甲必須剪短磨光，洗滌干凈，用75%的酒精消毒，同時(shí)手臂也應(yīng)消毒并涂以稀釋液或生理鹽水作潤滑劑。在條件允許的情況下，輸精員最好戴手套進(jìn)行操作。2012/11/21136二、輸精的基本要求

輸精的技術(shù)要求包括輸精量、輸精時(shí)間、輸精次數(shù)以及輸精部位的確定。在進(jìn)行人工授精時(shí)，動(dòng)物的種類不同，對輸精的要求也就有所不同。一般情況下，各種動(dòng)物都適宜在排卵前的4～8h進(jìn)行輸精。在生產(chǎn)中，常用發(fā)情鑒定來判定適宜的輸精時(shí)間。2012/11/21137品種排卵時(shí)間理論輸精時(shí)間實(shí)際輸精時(shí)間輸精量輸精部位牛發(fā)情結(jié)束后10h左右排卵前7～8h早上發(fā)情，下午輸精，并進(jìn)行二次輸精（第二天早上）1～1.5mL，有效精子數(shù)不少于1千萬個(gè)子宮頸深部豬