黃酒糖化菌分離、純化及培養(yǎng)

黃酒糖化菌分離、純化及培養(yǎng)

0不同菌株對(duì)黃油糖化菌的分離、純化和篩選贊揚(yáng)行業(yè)通常將霉素-16作為糖化菌，而麥曲。蘇-16是從自然培養(yǎng)的麥曲中篩選出的一株優(yōu)良菌株,用該菌制成的麥曲釀造黃酒,能保持黃酒的風(fēng)味特色,因而黃酒行業(yè)普遍使用。但黃酒菌株和其它微生物一樣,在長(zhǎng)期的移接轉(zhuǎn)管和保藏中,易受外界的影響而發(fā)生變異、混雜或衰老,造成菌種的退化。為了保證黃酒質(zhì)量的穩(wěn)定,需對(duì)黃酒糖化菌定期進(jìn)行分離、純化和篩選。通過對(duì)黃酒糖化菌的分離、純化和篩選,可使糖化菌株的優(yōu)良性能得以恢復(fù),保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定。本實(shí)驗(yàn)以本公司技術(shù)中心保藏的蘇-16為實(shí)驗(yàn)材料,就黃酒糖化菌的分離、純化、篩選及其性能做了一些研究。1材料表面1.1原始細(xì)菌米曲霉蘇-16:本公司技術(shù)中心保藏,采用麩曲干燥保藏。1.2培養(yǎng)基1.2.1面試培養(yǎng)基10°Bx米曲汁,2%瓊脂,經(jīng)115℃滅菌30min后放置斜面。1.2.2培養(yǎng)基分離12°Bx糯米飯?zhí)且?0.1%去氧膽酸鈉,2%瓊脂,經(jīng)115℃滅菌30min。1.2.3第一學(xué)期的培養(yǎng)基蛋白胨0.7%,瓊脂2%,可溶性淀粉1%,經(jīng)121℃滅菌30min。1.3原材料軋碎小麥和麩皮等。2方法2.1分離培養(yǎng)基的制備取少量保藏的錐型瓶種曲,放入無(wú)菌水試管中進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)的稀釋,再用無(wú)菌吸管吸取1mL稀釋液注入無(wú)菌培養(yǎng)皿中,然后再將分離培養(yǎng)基(滅菌冷卻至45℃左右)向加有稀釋液的培養(yǎng)皿中倒入10～15mL,迅速旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿,使之混合均勻。等冷卻凝固后,倒置于30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4d后,挑取單菌落,移植于試管斜面上,并在30℃培養(yǎng)4d后,保藏備用。2.2糖化酶活力的測(cè)定經(jīng)分離純化后的米曲霉,可用透明圈法來(lái)進(jìn)行篩選。淀粉經(jīng)淀粉酶水解后,逐漸降解成小分子糊精,用碘色反應(yīng)顯色法來(lái)測(cè)定,如出現(xiàn)較大的透明圈(與菌落直徑比較),則酶活力一般都較強(qiáng)。同理,淀粉酶和糖化酶的活力都可以用此法測(cè)定。操作方法:配制培養(yǎng)基,滅菌后倒入直徑為9cm的培養(yǎng)皿中,使培養(yǎng)基厚度相等。平置凝固后倒置于30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4d,點(diǎn)植待測(cè)米曲霉孢子,于30℃下培養(yǎng),約3d后把稀碘液倒于菌落周圍,并測(cè)量透明圈大小。2.3麩皮的扣瓶培養(yǎng)將過篩麩皮加80%的水,充分拌勻,分裝于經(jīng)高溫消毒的500mL錐型瓶中,每瓶約裝濕麩皮40g,塞上棉塞,并用牛皮紙包扎,于0.1MPa濕熱殺菌30min,冷卻至30℃左右接入原菌及篩選后菌種孢子,充分搖勻,于30℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng),到一定時(shí)間麩皮表面長(zhǎng)出白色斑點(diǎn),搖瓶一次,稱第一次搖瓶,搖后繼續(xù)培養(yǎng)至長(zhǎng)出少量白色菌絲,麩皮略微轉(zhuǎn)白時(shí)進(jìn)行第二次搖瓶,搖后將麩皮平攤于錐型瓶的底部,一定時(shí)間后菌絲將麩皮連結(jié)成餅狀,即可扣瓶。扣瓶時(shí)要注意輕扣輕放,完成扣瓶后繼續(xù)將錐型瓶置于培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng),直至呈黃綠色。2.4干燥麩曲的培養(yǎng)稱取軋碎的小麥100g于1000mL錐型瓶中,加入30%的水,攪拌均勻,接入0.3%的干燥麩曲,于30℃下培養(yǎng),培養(yǎng)過程中要搖瓶。待開始長(zhǎng)孢子時(shí),結(jié)束培養(yǎng)。3結(jié)果與分析3.1相同菌種培養(yǎng)條件下不同菌種菌落形態(tài)的比較不同的菌種其菌落特征不同,同一菌種因不同的培養(yǎng)條件,其菌落特征也不盡相同,但是同一菌種在相同的培養(yǎng)條件下所形成的菌落形態(tài)應(yīng)該是一致的。根據(jù)分離培養(yǎng)皿中菌落生長(zhǎng)狀況和特征,結(jié)合鏡檢觀察,挑出了3個(gè)典型的單菌落,編號(hào)分別為1#、2#和3#,原始菌為4#。3.2最佳加入0.6ml碘液效果的確定經(jīng)分離純化得到的3個(gè)糖化菌及原始菌,采用顯色試驗(yàn),用碘液溶在水瓊脂中,澆于平板菌落之間。根據(jù)透明圈清晰度,確定100mL水瓊脂加0.6mL碘液效果為最佳。具體結(jié)果見表1。從表1可以看出,分離后的菌落直徑和圈直徑明顯大于原始菌所形成的菌落透明圈直徑,且比值比原始菌也有所增加。說(shuō)明分離后,經(jīng)過篩選得到的菌株酶活力比原始菌株大。3.3糖化力和液化力對(duì)經(jīng)過用透明圈法篩選得到的1#菌株和原始菌株4#進(jìn)行糖化力和液化力的比較測(cè)定。糖化力為1g絕干麥曲在30℃糖化1h所產(chǎn)生的葡萄糖克數(shù),液化力以液化液達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)終點(diǎn)色的時(shí)間(min)計(jì)。結(jié)果見表2。從表2可以看出,篩選出的1#菌株的糖化力和液化力明顯高于4#原始菌株。形態(tài)特征和顯微構(gòu)造顯示,篩選出的1#菌株更粗壯。3.4麥曲中使用情況檢測(cè)結(jié)果黃酒生產(chǎn)使用的是麥曲,所以,最后需對(duì)菌種在麥曲中使用情況進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果見表3。從表3可以發(fā)現(xiàn),篩選后的菌株較原始菌株的性能