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槐米中蘆丁和槲皮素的測定
蝗蟲是豆科植物的一種干燥的花蕾,主要有效的成分是黃酮類化合物,如蘆丁和蚱??刹捎锰J丁為對照以紫外分光光度法測定槐米中的總黃酮量,也可用薄層色譜法或高效液相色譜法測定槐米中蘆丁或槲皮素含量,但用薄層色譜法同時測定槐米中的蘆丁和槲皮素的含量則未見報道。本文用薄層色譜掃描法分離和測定了槐米中的蘆丁和槲皮素。1材料和機器1.1化學試劑與試劑CS-9301型雙波長薄層掃描儀(日本島津公司);UV-1型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠);聚酰胺薄膜片(浙江臺州四青生化材料廠);蘆丁、槲皮素對照品(中國藥品生物制品檢定所);十二烷基硫酸鈉(SDS)為上?;瘜W試劑采購供應站日本進口分裝;其他試劑均為分析純;槐米樣品為廣州市市售,由本院生藥教研室鑒定。1.2并定容液濃度精密稱取蘆丁對照品20.01mg,加甲醇溶解并定容至10mL,濃度為2.001mg/mL。精密稱取槲皮素對照品20.04mg,加甲醇溶解并定容至20mL,濃度為1.002mg/mL。1.3鉻層的分離和掃描條件1.3.1展開劑上展開用定量毛細管吸取供試液,于聚酰胺薄膜上點樣,以微乳液十二烷基硫酸鈉-正丁醇-正己烷-水-甲酸(0.27∶0.63∶0.10∶3∶0.2)為展開劑上行展開,展程約10cm。取出晾干,均勻噴灑1%三氯化鋁乙醇溶液,晾干后置365nm紫外燈下檢視,蘆丁與槲皮素能與其他組分完全分離,槲皮素的Rf值雖然較低,但亦能與原點完全分離,可進行定量分析(見圖1)。1.3.2掃描條件雙波長反射鋸齒形掃描,λS=370nm,λR=550nm,散射參數SX=3,以峰面積隨行外標二點法定量。2結果2.1水攪拌和水溶液制備微乳液的制備方法:十二烷基硫酸鈉-正丁醇-正己烷按重量比0.27∶0.63∶0.10取樣,并加一定比例的水攪拌溶解混勻,放置24h。在微乳液的制備中,水量的多少決定了微乳液的結構為O/W或W/O,對分離結果的影響很大。實驗結果表明,當含水為75%(O/W)型時,槐米中黃酮類成分的分離效果最佳,而如在展開劑中加少量甲酸,能改善拖尾,實現更佳的分離結果,最后選擇含水75%微乳液-甲酸(100∶5)的混合溶液為展開劑。2.2點樣量xg線性回歸精密吸取蘆丁對照品溶液0.1,0.3,0.6,0.9,1.2,1.5μL,依次點于同一聚酰胺薄膜片上,按選定的條件展開,掃描測定,以掃描峰面積值Y對點樣量X(μg)線性回歸,得回歸方程:Y=143.2+1598.6X,r=0.999,蘆丁點樣量在0.2~3.0μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。精密吸取槲皮素對照品溶液0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0μL,依次點于同一聚酰胺薄膜片上,按選定的條件展開,掃描測定,以掃描峰面積值Y對點樣量X(μg)線性回歸,得回歸方程:Y=123.7+1253.2X,r=0.998,槲皮素點樣量在0.1~1.0μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。2.3對照品穩(wěn)定性在同一聚酰胺薄膜上分別點蘆丁對照品溶液與槲皮素對照品溶液各0.5μL,展開后每隔30min掃描一次,持續(xù)3h,兩者的峰面積基本不變,穩(wěn)定性良好。2.4蘆丁、槲皮素含量的測定在同一聚酰胺薄膜片上分別點蘆丁對照品溶液、槲皮素對照品溶液各6點,點樣量均為0.5μL,依法展開,測定,得蘆丁、槲皮素含量的RSD分別為1.1%和1.3%。2.5含量測定精密稱取干燥至恒重的槐米粉末約200mg,置50mL容量瓶中,加入甲醇至刻度,浸泡1h,再超聲提取30min,放至室溫并補充超聲過程中損失的甲醇到刻度,過濾,取續(xù)濾液為供試品溶液。吸取供試品溶液2μL點樣,隨行點蘆丁對照品溶液0.6,1.5μL,槲皮素對照品溶液0.1,0.4μL,依法展開,掃描,以外標兩點法定量。測定同一槐米粉末6份。測得蘆丁平均含量22.96%,RSD為1.6%;槲皮素平均含量1.58%,RSD為1.8%。2.6加樣回收率試驗取槐米粉末6份,每份約100mg,分別精密稱定,加入蘆丁約25mg,槲皮素對照溶液(1.002mg/mL)1.5mL(相當于槲皮素1.50mg),按上法進行操作,得回收率供試液,依法測得蘆丁平均回收率98.8%,RSD為1.7%;槲皮素平均回收率97.1%,RSD為2.0%。2.7重量測定依法對3份槐米樣品進行測定,結果見表2。3蘆丁和槲皮素含量測定本法分離選擇性好,分離效率高,能很好地分離槐米
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