電針刺激對(duì)延髓背柱核神經(jīng)元激活效應(yīng)的影響

電針刺激對(duì)延髓背柱核神經(jīng)元激活效應(yīng)的影響

“靈樞九針十二原”說，“五臟有疾病，必須有十二原?！??！边@說明臟腑有病可在體表一定部位出現(xiàn)病理反應(yīng)。阿是穴也是患病時(shí)出現(xiàn)在體表的一種病理性反應(yīng)點(diǎn)。我們以往的一些研究也證實(shí)有些背根神經(jīng)有分支分別分布于心臟和相當(dāng)于中醫(yī)心經(jīng)的體表區(qū)域。我們對(duì)內(nèi)臟病理狀態(tài)下穴位敏感程度的變化進(jìn)行研究,觀察電針刺激對(duì)延髓背柱核(DCN)神經(jīng)元激活效應(yīng)在正常和內(nèi)臟傷害性傳入情況下反應(yīng)的量-效變化,以探討穴位敏化的中樞機(jī)制。1穴位刺激與內(nèi)臟傷害性傳導(dǎo)的作用實(shí)驗(yàn)采用神經(jīng)示蹤法標(biāo)識(shí)大鼠前肢內(nèi)側(cè)面(心經(jīng)經(jīng)脈循行線)與心臟的神經(jīng)聯(lián)系,表明C8-T3脊神經(jīng)節(jié)的少量(6.8%)細(xì)胞的外周軸突有雙分支現(xiàn)象,其一支分布于心臟,另一支分布于上肢內(nèi)側(cè)。同樣,在貓左前肢“天泉”穴區(qū)處和左側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)及左心下神經(jīng)注入熒光標(biāo)記物,背根節(jié)中也可見到少量(8%)雙標(biāo)的細(xì)胞,主要分布于C6~T2節(jié)段之間,其中尤以C8和T1節(jié)段最多。然而這種軸突分支的現(xiàn)象畢竟為數(shù)不多,并不能完全解釋復(fù)雜的體表內(nèi)臟之間的相互作用?，F(xiàn)代研究也表明內(nèi)臟的信號(hào)能影響相對(duì)應(yīng)的軀體,Jou等向大鼠心包內(nèi)注射一種海藻類化合物可引起脊髓兩側(cè)肌肉的痙攣樣收縮,切斷左側(cè)交感鏈和雙側(cè)迷走神經(jīng)可分別減弱和加強(qiáng)這種肌電反應(yīng)。他們認(rèn)為,心絞痛牽涉痛的發(fā)生除軀體和內(nèi)臟的傳入在脊丘神經(jīng)元上匯聚外,刺激心交感所誘發(fā)的痙攣樣肌肉收縮引起的繼發(fā)性疼痛也是一個(gè)因素。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中刺激大鼠心交感神經(jīng)可引起心經(jīng)穴位的最大反射性肌電反應(yīng),與肺經(jīng)穴位相比有明顯差異。同樣,電刺激貓左心下神經(jīng)后,“曲澤”及“天泉”等心包經(jīng)穴區(qū)肌電活動(dòng)明顯增加;而肺經(jīng)上的穴位如“孔最”“尺澤”及“天府”穴區(qū)的肌電變化不明顯。電刺激心下神經(jīng)在心包經(jīng)穴位上誘發(fā)出肌電所需的刺激閾值低于肺經(jīng)穴位。電刺激心下神經(jīng)亦可明顯增加“天泉”穴區(qū)皮神經(jīng)的放電活動(dòng)。左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎造成急性心肌缺血后可降低刺激的閾值。依次切斷T1~C7的背根和腹根后,刺激閾值逐步提高。內(nèi)臟病理情況下出現(xiàn)的對(duì)臟器本身的傷害性刺激重要特征之一是其疼痛常反射到遠(yuǎn)隔損傷部位的某些體表區(qū)域,這種牽涉性疼痛常表現(xiàn)為尖銳、清晰和定位清楚,并常伴有痛覺過敏(觸發(fā)點(diǎn))或以對(duì)觸覺刺激的反應(yīng)性增高和痛閾降低為特征的繼發(fā)性痛覺過敏,而不同于真性內(nèi)臟痛所具有的深、鈍、模糊和定位不明確等特征。盡管觸發(fā)點(diǎn)大多位于牽涉痛的區(qū)域,但有些卻離開牽涉痛部位一些距離。針灸刺激這些敏感點(diǎn)可以產(chǎn)生很好的鎮(zhèn)痛效果。盡管牽涉痛的某些特征可用外周機(jī)制以及皮膚和內(nèi)臟的傳入在脊髓中的會(huì)聚和相互作用來解釋,但痛覺過敏的機(jī)制尚不明了。因?yàn)榧骨鹗鴤鹘y(tǒng)上被視為傷害性傳入的主要通路,以往的許多疼痛研究中觀察到該通路的傷害性傳入可以被另外一個(gè)傷害性刺激的傳入所抑制。然而,最近的研究發(fā)現(xiàn),背柱-內(nèi)側(cè)丘系在內(nèi)臟傷害性信息傳遞過程中也發(fā)揮一定的作用,因而可以認(rèn)為輕觸的傳入刺激與內(nèi)臟傷害性傳入可以被條件性觸覺刺激發(fā)生以抑制為主的調(diào)控反應(yīng)。延髓背柱核(DCN)神經(jīng)元傳統(tǒng)上被認(rèn)為是軀體傳入的高級(jí)中樞。近些年來的研究工作表明它在傳遞內(nèi)臟傷害性傳入信息到丘腦和皮層等高級(jí)中樞中起重要作用,這就為軀體與內(nèi)臟傳入信號(hào)會(huì)聚發(fā)生在DCN水平提供了結(jié)構(gòu)上的基礎(chǔ)。盡管有極少的解剖和生理學(xué)報(bào)道DCN接受內(nèi)臟的傳入,DCN傳統(tǒng)上被認(rèn)為是延髓的主要感覺中樞。但近些年來,越來越多的文獻(xiàn)報(bào)道支持這樣一種假說:DCN在內(nèi)臟傷害性傳入到高級(jí)神經(jīng)中樞如丘腦和皮層過程中起到特有的作用。在本項(xiàng)研究中,我們將系統(tǒng)觀察內(nèi)臟刺激對(duì)延髓DCN神經(jīng)元傷害性信息傳遞過程的影響,探討內(nèi)臟傷害性傳入對(duì)體表穴區(qū)感覺過敏現(xiàn)象的發(fā)生與發(fā)展過程,研究體表穴位與內(nèi)臟相關(guān)聯(lián)系的生物學(xué)基礎(chǔ),探討穴位敏化的生物學(xué)機(jī)制。2方法2.1體重、清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)選用健康成年Sprague-Dawley雄性大鼠23只,體重250~300g,清潔級(jí)。由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前禁食12h,不禁水,實(shí)驗(yàn)過程中對(duì)動(dòng)物的處置遵循2006年科技部頒布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》。2.2向外推移植物質(zhì)地膜下小鼠骨膜過血取定kopf-400大鼠用烏拉坦(urethane,1.0~1.2g/kg)腹腔注射麻醉。外科手術(shù)在麻醉情況下進(jìn)行。將動(dòng)物仰臥在手術(shù)臺(tái)上,于頸正中線切開皮膚,分離氣管。在暴露的氣管中下端順氣管軟骨環(huán)作一橫切口,插入氣管導(dǎo)管,后用絲線結(jié)扎固定,以保持呼吸道通暢。然后分離頸總動(dòng)脈和分離頸靜脈,靜脈插管用于輸液,動(dòng)脈插管用于監(jiān)控實(shí)驗(yàn)過程中的血壓變化。為了使大鼠延髓能充分暴露,將大鼠雙耳用耳棒固定于KOPF-900型立體定位儀上,于顱正中切開皮膚、皮下組織,去除骨膜;將鼠頭向下屈曲60度~70度,用操縱桿垂直頂住顱骨,使大鼠頭部處于屈曲狀態(tài),然而用牙托水泥將顱骨與操縱桿粘合在一起,保持鼠頭位置穩(wěn)定。沿項(xiàng)部中央切開皮膚,分離并剪除皮下筋膜和肌肉,然后用棉球鈍性向下推除深部結(jié)締組織,充分暴露枕骨大孔。用一次性8號(hào)注射針頭的尖端斜面沿枕骨大孔將硬脊膜作環(huán)性切割,暴露出菱形窩,在顯微鏡下用游絲鑷撕開軟腦膜。手術(shù)完成后用剪開的皮瓣縫合成皮槽,暫用38℃左右的石臘油覆蓋,以避免延髓干燥。在正式實(shí)驗(yàn)時(shí)插入記錄微電極后皮槽中灌注2%的瓊脂,以保護(hù)延髓、避免干燥和減少因呼吸產(chǎn)生的延髓振動(dòng)。2.3細(xì)胞放電試驗(yàn)DCN(薄束核)神經(jīng)元記錄的座標(biāo)為:延髓菱形窩底端(obex)開始,沿菱形窩邊緣向上約0~3.0mm范圍內(nèi),旁開約1.5~2.0mm,延髓表面下100~500μm(見圖1)。單細(xì)胞活動(dòng)的細(xì)胞外記錄采用充灌2%Pontamineskyblue的0.1M醋酸鈉的玻璃微電極(尖端約5μm,阻抗約10~15MΩ),在微電極操縱器控制下根據(jù)DCN的座標(biāo)將記錄微電極插入核團(tuán),尋找所需的神經(jīng)元。細(xì)胞放電經(jīng)微電極引入Spikes-2(Oxford)或Power-Lab電生理儀系統(tǒng),進(jìn)行細(xì)胞放電的放大和信號(hào)處理。所記錄到的神經(jīng)元都檢查其外周感受野對(duì)機(jī)械刺激(包括觸刺激、vonFrey毛反應(yīng)敏感度、齒鑷夾皮刺激)、手針刺激,觀察它們的感受野分布范圍、感受野大小,量化反應(yīng)的性質(zhì)及反應(yīng)的強(qiáng)度。隨后也試驗(yàn)這些神經(jīng)元對(duì)直結(jié)腸擴(kuò)張(ColorectalDistension,CRD)刺激的反應(yīng)。只有對(duì)皮膚和CRD刺激都發(fā)生反應(yīng)的神經(jīng)元才列入研究對(duì)象以確定這兩種分別來自體表和內(nèi)臟傳入能否發(fā)生相互作用。2.4不同大小血清中mmlphp的crd方法內(nèi)臟傷害性刺激采用直結(jié)腸擴(kuò)張法,將一長(zhǎng)約4~6cm的氣囊經(jīng)肛門插入直結(jié)腸,插入的深度約為5~6cm,為避免造成腸壁損傷與肛門刺激,置入時(shí)在氣囊上涂抹潤(rùn)滑油。內(nèi)臟傷害性傳入由插入直腸內(nèi)的氣囊充氣超過20~30s造成CRD,試驗(yàn)的直結(jié)腸壓力一般控制在20~80mmHg之間,≥40mmHg為傷害性;超過100mmHg易造成直結(jié)腸破裂。氣囊用乳膠指套或安全套制作而成,捆綁在一外徑約為4mm的膠管上。如采用乳膠指套則需在實(shí)驗(yàn)前充氣并留置過夜以克服氣囊壁的張力。手動(dòng)氣囊通過T型管與壓力換能器相連接。CRD由通過血壓計(jì)輸出20~80mmHg、持續(xù)20s或更長(zhǎng)時(shí)間的壓力充盈氣囊來實(shí)現(xiàn)。為避免出現(xiàn)過度刺激以及結(jié)直腸可能的敏感化,重復(fù)CRD刺激應(yīng)為間隔10min以上。選擇引起Aδ纖維反射閾值強(qiáng)度1.5倍的電針刺激“足三里-上巨虛”穴區(qū)[具體方法參考我們以前的工作,平均引起Aδ纖維反射閾值強(qiáng)度為(1.76±0.62)mA],然后給予20、40、60、80mmHg的CRD,觀察從非傷害性(20mmHg)、傷害性(40mmHg)、到強(qiáng)傷害性(60-80mmHg)內(nèi)臟刺激時(shí)穴位刺激引發(fā)該神經(jīng)元敏化反應(yīng)的量效關(guān)系。采用的標(biāo)準(zhǔn)條件性刺激的程序的設(shè)定是先記錄的神經(jīng)元背景活動(dòng),然后給予30s的CRD刺激,停止CRD后立即給予30s感受野的手針刺激,觀察CRD前后針刺引發(fā)該神經(jīng)元激活反應(yīng)的變化。2.5玻璃微電極的制備用Power-Lab計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)、Chart5.0分析軟件和SPSS13.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理分析,計(jì)算神經(jīng)元每秒的放電個(gè)數(shù)和激活/抑制率,將干預(yù)前后的均值和差值做描述性統(tǒng)計(jì)(Descriptives)。組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。單細(xì)胞記錄程序結(jié)束后,用刺激器連通隔離器經(jīng)微電極放大器向玻璃微電極通以20μA的負(fù)向直流電20~30min,將玻璃微電極內(nèi)的滂胺天藍(lán)導(dǎo)入DCN以標(biāo)記電極記錄位置。隨后將動(dòng)物處死,用4%的多聚甲醛做心臟灌流后取腦干,4%多聚甲醛固定,兩天后取組織做冰凍切片和HE染色觀察,參考大鼠腦圖譜(Paxinos及Watson,2007),確定記錄點(diǎn)的位置。2.6平均動(dòng)脈血壓的維持整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中,動(dòng)物體溫通過一反饋型加熱儀控制和維持在36~38℃之間。在監(jiān)控動(dòng)脈血壓的實(shí)驗(yàn)中,平均動(dòng)脈壓都可維持在正常范圍;但在條件化刺激過程中血壓有一過性小幅度的、以升壓為主的變化反應(yīng)。3結(jié)果3.1神經(jīng)元對(duì)肢體刺激、內(nèi)臟傷害性感染的感受野實(shí)驗(yàn)用23只SD雄性大鼠,記錄的神經(jīng)元均位于DCN的楔束核(接受來自下胸節(jié)以下的傳入)。因只有部分DCN神經(jīng)元接受廣泛的軀體和內(nèi)臟傳入,在記錄的124個(gè)對(duì)軀體感受野觸覺刺激發(fā)生反應(yīng)的DCN神經(jīng)元中,僅27個(gè)能對(duì)CRD發(fā)生反應(yīng),其中21個(gè)被興奮,6個(gè)被抑制。本項(xiàng)研究所記錄的DCN神經(jīng)元對(duì)軀體刺激與內(nèi)臟傷害性刺激的感受野基本位于下肢(圖2),與我們以往的報(bào)告相同。少數(shù)神經(jīng)元感受野非常大,而另一些則非常小,僅呈點(diǎn)分布。部分DCN神經(jīng)元有一定的自發(fā)性背景活動(dòng),但多為散在性或小簇狀放電,自發(fā)放電的頻率并不很高(3.42±0.86)峰電位/s;也有一些神經(jīng)元缺乏背景放電,需給予不斷地外周刺激才能尋找到神經(jīng)元。神經(jīng)元對(duì)刺激反應(yīng)的閾值差別較大。與軀體刺激相比,僅有約9%的DCN神經(jīng)元對(duì)內(nèi)臟傷害性傳入(CRD)發(fā)生反應(yīng);而且,神經(jīng)元對(duì)CRD的反應(yīng)明顯弱于對(duì)觸覺刺激產(chǎn)生的反應(yīng)。3.2量效關(guān)系與神經(jīng)元自適應(yīng)的關(guān)系在9個(gè)DCN神經(jīng)元系統(tǒng)觀察了分級(jí)的CRD刺激引起的反應(yīng),在20~80mmHg范圍內(nèi),隨著內(nèi)臟擴(kuò)張壓力的升高,神經(jīng)元反應(yīng)的強(qiáng)度也隨之增加,呈現(xiàn)出一定線性的量-效關(guān)系(參見圖3)。但這種量效關(guān)系遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于我們?cè)诩顾栌^察到的結(jié)果,這種結(jié)果表明DCN神經(jīng)元對(duì)內(nèi)臟感覺的分辨功能有限。在CRD刺激達(dá)到60~80mmHg時(shí),DCN神經(jīng)元細(xì)胞的放電數(shù)基本呈現(xiàn)平臺(tái)趨勢(shì)。3.3損傷強(qiáng)度crd對(duì)穴位敏化的影響為了研究?jī)?nèi)臟傷害性傳入對(duì)穴位敏化的影響,我們采用的標(biāo)準(zhǔn)條件性刺激的程序的設(shè)定是首先觀察外周興奮性感受野位于穴位電針刺激引發(fā)的DCN神經(jīng)元激活反應(yīng),單純給予大鼠20~80mmHg的強(qiáng)度CRD刺激對(duì)該神經(jīng)元引發(fā)的激活反應(yīng),然后觀察CRD刺激30s,之后停止CRD刺激,緊跟著給予30s的1.5倍Aδ纖維閾值的穴位電針檢驗(yàn)刺激引發(fā)的激活反應(yīng)強(qiáng)度的變化,以此在DCN水平研究?jī)?nèi)臟傷害性刺激誘發(fā)的穴位敏化反應(yīng)和相關(guān)機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)電針部位選擇外周感受野位于同側(cè)“足三里-上巨虛”穴區(qū)的DCN神經(jīng)元,亦即該神經(jīng)元分別對(duì)CRD和針刺足三里-上巨虛穴區(qū)都發(fā)生激活反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)觀察到持續(xù)30s的20~80mmHg的CRD刺激對(duì)延髓DCN神經(jīng)元有隨著CRD量的增加逐漸出現(xiàn)明顯的激活作用。在CRD刺激后給予單純電針刺激,DCN神經(jīng)元對(duì)電針的激活反應(yīng)明顯增強(qiáng)(參見表1和圖4),表明在給予大鼠持續(xù)的傷害性CRD刺激造成內(nèi)臟傷害性損傷后,腧穴的效應(yīng)發(fā)生了敏化,這種穴位的敏化反應(yīng)與內(nèi)臟傷害性強(qiáng)度成正比。(分別為20、40、60和80mmHg)。注:每一組圖片的上部分為神經(jīng)元的放電圖,下部分為直方圖;左側(cè)為CRD前電針反應(yīng),右側(cè)為CRD后針刺引發(fā)同一個(gè)神經(jīng)元的敏化反應(yīng)。在14個(gè)DCN神經(jīng)元觀察了20mmHgCRD時(shí)1.5倍Aδ纖維激活強(qiáng)度電針刺激引起的激活反應(yīng),如圖4所示:在20mmHg強(qiáng)度的CRD前,電針刺激對(duì)DCN神經(jīng)元有明顯的激活作用,和背景活動(dòng)相比,電針引起的神經(jīng)元的激活百分比增加了(119.74±14.57)%,結(jié)果顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001);而給予CRD刺激后,電針對(duì)DCN神經(jīng)元產(chǎn)生的激活反應(yīng)有所升高,為CRD前電針激活效應(yīng)的(119.45±12.84)%,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在13個(gè)DCN神經(jīng)元觀察了40mmHg微傷害強(qiáng)度CRD時(shí)同等強(qiáng)度電針刺激引起的激活反應(yīng),電針引起的神經(jīng)元的激活反應(yīng)在CRD后增加了(21.52±4.89)%,統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而在60和80mmHg傷害強(qiáng)度的CRD后,電針激活DCN神經(jīng)元的程度分別增加了(29.51±5.78)%和(32.07±6.32)%,都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在20~80mmHg強(qiáng)度的CRD之間,同強(qiáng)度電針對(duì)DCN神經(jīng)元激活反應(yīng)的易化作用隨著內(nèi)臟擴(kuò)張的傷害性強(qiáng)度的增加而增加,呈現(xiàn)一定的量效線性關(guān)系(見圖5)。這些結(jié)果表明:傷害性內(nèi)臟擴(kuò)張刺激可以敏化延髓的DCN神經(jīng)元,使其對(duì)穴位的電針傳入產(chǎn)生更強(qiáng)烈的反應(yīng),DCN神經(jīng)元在內(nèi)臟傷害性損傷后功能易化導(dǎo)致了穴位敏化的動(dòng)態(tài)變化;而且,隨著內(nèi)臟傷害性刺激的強(qiáng)度加大,對(duì)穴位的敏化作用進(jìn)一步加強(qiáng),呈現(xiàn)出一定的量效敏化關(guān)系。這些結(jié)果表明延髓DCN參與了腧穴敏化的動(dòng)態(tài)變化過程。4穴位針刺對(duì)dcn神經(jīng)元c背柱核(DCN)神經(jīng)元傳統(tǒng)上被認(rèn)為是軀體傳入的高級(jí)中樞。由脊髓背柱的上行粗大纖維組成內(nèi)側(cè)的薄束和外側(cè)的楔束,薄束由來自T6以下節(jié)段的纖維組成,楔束由來自T6以上節(jié)段的纖維組成。薄束和楔束上行到達(dá)延髓背側(cè)面分別終止于薄束核和楔束核。二者合稱后索核,又稱延髓背柱核(DorsalColumnNuclei,DCN)。一般認(rèn)為,DCN主要接受來自脊神經(jīng)節(jié)的一級(jí)傳入纖維,但也接受來自脊髓背角的二級(jí)傳入纖維。從DCN發(fā)出的有髓纖維繞經(jīng)中央管在其腹側(cè)交叉,交叉后的纖維折向上行,組成內(nèi)側(cè)丘系,其纖維上達(dá)丘腦和大腦皮層。DCN神經(jīng)元對(duì)來自皮膚、關(guān)節(jié)以及肌肉感受器的沖動(dòng)發(fā)生反應(yīng)。早在上個(gè)世紀(jì)50年代,Aidar等在貓的薄束核記錄到刺激內(nèi)臟大神經(jīng)誘發(fā)的反應(yīng)。Rigamonti和Hancock同樣在貓的薄束核記錄到刺激內(nèi)臟神經(jīng)引起的場(chǎng)電位反應(yīng)和單個(gè)神經(jīng)元的激活。解剖學(xué)的研究表明,薄束核接受來自內(nèi)臟大神經(jīng)的初級(jí)傳入和接受來自腰髓的非初級(jí)傳入。皮膚震動(dòng)的條件刺激不但可使DCN神經(jīng)元放電增加,在停止皮膚震動(dòng)的條件刺激的即刻給予CRD作為檢驗(yàn)刺激,CRD的反應(yīng)則反而有所抑制,雖然抑制率僅為13%左右。反過來,先給CRD作為條件刺激(也可引起DCN神經(jīng)元放電增加),在停止CRD的即刻給予皮膚震動(dòng)的檢驗(yàn)刺激卻可以易化神經(jīng)元的反應(yīng),這種結(jié)果表明內(nèi)臟痛時(shí)出現(xiàn)的體表相應(yīng)神經(jīng)節(jié)段的反應(yīng)過敏及牽涉痛有關(guān),也與中醫(yī)針灸的阿是穴出現(xiàn)相關(guān)。在觀察的20個(gè)DCN神經(jīng)元中,非感受野區(qū)穴位針刺刺對(duì)DCN神經(jīng)元CRD反應(yīng)的抑制率為23%。這些結(jié)果表明,在DCN水平,針刺對(duì)CRD引起這類神經(jīng)元的興奮反應(yīng)有一定程度的抑制作用,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理的結(jié)果表明具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？梢哉J(rèn)為,DCN在感受內(nèi)臟傷害性反應(yīng)的過程中,受到來自體表針刺的較弱而有效的抑制作用。Willis研究組開始的實(shí)驗(yàn)是確定是否存在經(jīng)背柱的內(nèi)臟傷害感受的通路,他們采用記錄丘腦腹后外側(cè)核(VPL)單細(xì)胞活動(dòng)的電生理學(xué)方法,直-結(jié)腸擴(kuò)張(CRD)以及結(jié)腸炎癥化可激活VPL神經(jīng)元;這些神經(jīng)元同時(shí)也對(duì)皮膚的機(jī)械刺激發(fā)生反應(yīng)。隨后切斷背柱發(fā)現(xiàn)可降低VPL神經(jīng)元60%~80%對(duì)CRD的反應(yīng),而切斷脊-丘束的前外側(cè)柱僅減少VPL神經(jīng)元20%對(duì)CRD的反應(yīng)。背柱切斷還明顯減少皮膚弱刺激引起的VPL神經(jīng)元激活反應(yīng),但對(duì)傷害性機(jī)械刺激反應(yīng)影響較小;而切斷脊-丘束的前外側(cè)柱幾乎完全阻斷了皮膚傷害性機(jī)械刺激引起的VPL神經(jīng)元激活反應(yīng),但對(duì)非傷害性皮膚刺激反應(yīng)影響較小。切斷背柱也減小結(jié)腸炎癥刺激而引起的VPL神經(jīng)元的敏化反應(yīng),而切斷脊-丘束的前外側(cè)柱則影響較小;用電解法或用海人酸損毀薄束核也減少CRD激活的VPL神經(jīng)元激活反應(yīng)。這些工作表明在向VPL傳導(dǎo)直-結(jié)腸傷害性信息方面,背柱通路比脊-丘束通路更為重要。Berkley和Hubscher報(bào)告約有50%的DCN神經(jīng)元既對(duì)輕柔的皮膚刺激也對(duì)子宮和陰道的擴(kuò)張刺激發(fā)生激活反應(yīng)。Al-Chaer等在DCN單細(xì)胞記錄的實(shí)撿中發(fā)現(xiàn)能被丘腦腹后外側(cè)核和內(nèi)側(cè)丘系逆向刺激激活的神經(jīng)元也對(duì)皮膚和直-結(jié)腸的機(jī)械和化學(xué)刺激發(fā)生反應(yīng)。他們認(rèn)為,DCN中來自皮膚的傳入主要是初級(jí)感覺傳入,而來自