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核仁組成區(qū)及其多態(tài)現(xiàn)象的觀察實(shí)驗(yàn)原理核仁組成區(qū)(Nucleolar
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,NORs)18S、28SrRNA基因位點(diǎn)。正在(已經(jīng))轉(zhuǎn)錄的rRNA基因部位伴有豐富的酸性蛋白(調(diào)節(jié)rDNA表達(dá)),富含SH基團(tuán)和二硫鍵,能將AgNO3中的Ag+還原成金屬Ag顆粒(黑色),故銀染法可將具有轉(zhuǎn)錄活性的核仁組成區(qū)特異染成黑色。同一物種的不同個(gè)體、同一個(gè)體的不同細(xì)胞間,常可見到Ag-NORs的多態(tài)現(xiàn)象。數(shù)目多態(tài)。細(xì)胞中銀染陽(yáng)性的NOR數(shù)目不同程度少于應(yīng)有的NORs。常以中期核銀染核仁數(shù)最多的數(shù)值判定應(yīng)有的Ag-NORs數(shù)目。結(jié)構(gòu)多態(tài):大小多態(tài)、位置多態(tài)。實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)銀染法顯示核仁組織區(qū)的原理和方法;觀察小鼠間期核和染色體上核仁組織區(qū)特征及多態(tài)性。實(shí)驗(yàn)儀器、材料、試劑顯微鏡、水浴鍋、培養(yǎng)箱、載玻片、蓋玻片、鑷子;新鮮制備的小鼠染色體標(biāo)本;50%AgNO3溶液,雙蒸水、明膠顯影液(優(yōu)質(zhì)明膠粉2克溶于99毫升雙蒸水中,加入1毫升甲酸)實(shí)驗(yàn)方法(快速銀染法)1、選用鋪展良好的中期染色體標(biāo)本,在烘箱中70°C老化2小時(shí);2、在玻片上滴加50%AgNO3
6滴,明膠顯影液3滴,用吸管輕輕吹動(dòng)使兩種溶液混勻,小心加上蓋玻片,勿產(chǎn)生氣泡;3、將玻片至于58°C水浴鍋中,至玻片變?yōu)辄S褐色,立即用蒸餾水沖去蓋玻片,再稍加沖洗,晾干鏡檢。注意1、處理適度的標(biāo)本,染色體上的Ag-NORs呈黑色,其余部分呈金黃色;間期核仁深染,對(duì)比度鮮明;2、使用AgNO3要
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