益腎化濕微丸中防風(fēng)、陳皮、清半夏的薄層鑒別 中藥學(xué)專(zhuān)業(yè)

益腎化濕微丸中防風(fēng)、陳皮、清半夏的薄層鑒別目錄259921前言 1287142材料與儀器 2303122.1實(shí)驗(yàn)材料 2130392.2試劑和儀器 226943實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果分析 4111223.1防風(fēng)薄層鑒別研究 492233.2陳皮薄層鑒別研究 14289043.3清半夏薄層鑒別研究 21195404討論 305354.1防風(fēng) 3077214.2陳皮 3044954.3清半夏 3085714.4展望 3112431參考文獻(xiàn) 3212431綜述 3412431致謝 40前言益腎化濕處方一般應(yīng)用于慢性疾病腎小球腎炎，即腎功能:SCr＜2mg/dl時(shí)，臨床表現(xiàn)為脾虛濕盛證，即患者出現(xiàn)蛋白尿，水腫，畏寒，四肢冰冷，疲倦乏力等。該處方由人參、黃芪、獨(dú)活、防風(fēng)、白術(shù)、半夏、黃連和陳皮等16味藥材組成。慢性腎小球腎炎又可以簡(jiǎn)稱(chēng)為慢性腎炎，是指基本的臨床表現(xiàn)為蛋白尿、血尿、高血壓和水腫等，起因多樣，且病變進(jìn)展較為緩慢，可能存在腎功能的減退，存在腎功能惡化趨勢(shì)，甚至最終可能發(fā)展成為慢性腎衰竭的一系列腎小球疾病[1]。根據(jù)中醫(yī)學(xué)說(shuō)的陰陽(yáng)五行理論可知，腎主水，即腎的功能有藏精和調(diào)節(jié)人的水液等。眾多古代典籍對(duì)此皆有記載，《素問(wèn)·上古天真論》:“腎者主水，受五臟六腑之精而藏之?！?，《素問(wèn)·逆調(diào)論》:“腎者水臟，主津液?！?，在調(diào)節(jié)體內(nèi)水液平衡方面，腎有著極為重要的意義，在中醫(yī)理論中，主要靠腎氣的“開(kāi)”和“闔”來(lái)調(diào)節(jié)體內(nèi)水液的分布和排泄。防風(fēng)味辛、甘，性溫，歸膀胱、肺、脾、肝經(jīng)，祛風(fēng)解表，勝濕止痛，且有止痙的作用[2]；陳皮味辛、苦，性溫，歸脾、胃、肺經(jīng)，理氣健脾，調(diào)理中焦，燥濕化痰[2]；清半夏味辛，性溫，有毒性，歸脾、胃經(jīng)，降逆止嘔，燥濕化痰，消痞散結(jié)[2]。這三種藥材均有祛濕的作用，均對(duì)腎調(diào)節(jié)“水”有影響，同時(shí)查閱相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)三味藥材均對(duì)腎病治療有重要意義[3,4,5]。特別是防風(fēng)，早在1995年發(fā)布的關(guān)于中醫(yī)治療慢性腎小球腎炎的文章中出現(xiàn)[6]。因此，增加防風(fēng)、陳皮和清半夏三味藥材的薄層鑒別將更好控制新產(chǎn)品質(zhì)量和療效，對(duì)提高產(chǎn)品在市場(chǎng)中的競(jìng)爭(zhēng)力也具有極為重要的意義。在中成藥薄層鑒別方法中，防風(fēng)用于鑒別的成分一般是升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷[7,8,9]，陳皮主要鑒別成分為橙皮苷[10,11,12,13]，清半夏則主要使用半夏對(duì)照藥材進(jìn)行對(duì)比鑒別[14]。國(guó)外藥企在20世紀(jì)初就開(kāi)始了對(duì)緩釋、控釋和緩釋、控釋制劑的研究，至今已有40多年的歷史。眾所周知，緩釋控釋藥物制劑發(fā)展十分迅速，并有持續(xù)上升的趨勢(shì)。微丸劑又稱(chēng)小丸劑（pellet）,直徑約為1mm～2.5mm，小球狀口服藥物劑型，于藥廠(chǎng)大批量制備出來(lái)的微丸在500～1500μm范圍內(nèi)?？芍瞥赡z囊劑、片劑或其它劑型供給臨床使用[15]。目前國(guó)內(nèi)中藥微丸主要使用微晶纖維素作為賦形劑，結(jié)構(gòu)結(jié)實(shí)，能起到很好的緩控釋作用[16,17]。采用不同的處方及不同的制備方法，可以將藥物制成速釋、緩釋或者其它用途的微丸劑型。微丸劑較于顆粒劑藥物,使藥物的作用時(shí)間延長(zhǎng)了，藥物濃度一直保持在一個(gè)合適的治療窗口，提升藥效同時(shí)減低副作用，增大獲得重現(xiàn)性比較好的臨床效果的幾率，并且流動(dòng)性好，粉塵少，利于生產(chǎn)時(shí)控制質(zhì)量[18]。益腎化濕顆粒制成微丸劑能起到緩釋作用，利于提高療效，所以新劑型研發(fā)在當(dāng)前情勢(shì)下非常有必要性。且建立主斑點(diǎn)清晰無(wú)干擾的重現(xiàn)性、專(zhuān)屬性和耐用性都較好的適用于益腎化濕微丸中防風(fēng)、陳皮和清半夏的TLC鑒別的方法，為益腎化濕微丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。2材料與儀器2.1實(shí)驗(yàn)材料益腎化濕微丸中試樣品（批號(hào)20171001、20171002、20171003）防風(fēng)對(duì)照藥材（中檢所12094-201108、中檢院120947-201409）陳皮對(duì)照藥材（中檢院120969-201510）半夏對(duì)照藥材（中檢院121272-201605）升麻素苷對(duì)照品（中檢所111522-200406）5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品（中檢所111523-200405）橙皮苷對(duì)照品（中檢所110721-200613）纈氨酸對(duì)照品（中檢所140681-200401）亮氨酸對(duì)照品（中檢所140687-200401）精氨酸對(duì)照品（中檢所140685-200401）丙氨酸對(duì)照品（中檢所140680-200401）益腎化濕處方缺少防風(fēng)藥材制成的陰性樣品益腎化濕處方缺少陳皮藥材制成的陰性樣品益腎化濕處方缺少清半夏藥材制成的陰性樣品2.2試劑和儀器2.2.1試劑丙酮（廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）95%乙醇（廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）三氯甲烷（廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）二氯甲烷（廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）甲醇（天津市大茂化學(xué)試劑廠(chǎng)）乙酸乙酯（廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）甲苯（廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）甲酸（廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）冰醋酸（廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）石油醚（60～90℃）（廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）水飽和正丁醇（制法：正丁醇和蒸餾水1:1混合，充分振搖，靜置至分層，取上層）0.5%氫氧化鈉溶液（取5g氫氧化鈉，用蒸餾水溶解，定容成1000mL）10%硫酸乙醇溶液（取5.7mL硫酸加乙醇定容成100mL）1%三氯化鋁溶液（取三氯化鋁1g，加乙醇定容成100mL）茚三酮試液（取茚三酮2g，加乙醇定容成100mL）蒸餾水2.2.2設(shè)備電子分析天平（廣州廣電計(jì)量檢測(cè)股份有限公司）潔盟牌超聲波清洗機(jī)（深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司）TC-15套式恒溫器（海寧市新華醫(yī)療器械廠(chǎng)）恒溫水浴鍋W201D（上海申順生物科技有限公司）半自動(dòng)點(diǎn)樣儀CZ-042（力揚(yáng)企業(yè)有限公司）TH-Ⅱ型薄層加熱器（上?？普苌萍加邢薰荆?shù)碼成像系統(tǒng)Digistore1JFP-21（力揚(yáng)企業(yè)有限公司）硅膠G板（青島海洋化工廠(chǎng)有限公司）硅膠GF254板（青島海洋化工廠(chǎng)有限公司）2.2.3玻璃儀器及其他錐形瓶、圓底燒瓶、玻璃棒、分液漏斗、漏斗、流分瓶、燒杯，容量瓶、層析缸、一次性注射器、尼龍濾頭和濾紙。3實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果分析采用TLC法對(duì)成品中防風(fēng)（以防風(fēng)對(duì)照藥材、升麻素苷對(duì)照品、5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品作為對(duì)照）、陳皮（以陳皮對(duì)照藥材、橙皮苷對(duì)照品作為對(duì)照）、清半夏（以半夏對(duì)照藥材、精氨酸對(duì)照品、丙氨酸對(duì)照品、纈氨酸對(duì)照品、亮氨酸對(duì)照品作為對(duì)照）三味藥材分別進(jìn)行鑒別，根據(jù)《中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則》（《中國(guó)藥典》2015版四部通則0502項(xiàng)）對(duì)每味藥材的TLC法進(jìn)行研究，包括前處理、精密度（重現(xiàn)性）、專(zhuān)屬性和耐用性（不同的薄層板、點(diǎn)樣方式、展開(kāi)溫度及相對(duì)濕度等）。3.1防風(fēng)薄層鑒別研究3.1.1藥典方法采用《中國(guó)藥典》2015年版一部防風(fēng)的鑒別項(xiàng)（2）中樣品制備方法制備供試品、防風(fēng)對(duì)照藥材、升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷混合對(duì)照品、陰性溶液：取本品研碎的粉末5g，加入丙酮20mL，進(jìn)行20min超聲處理后，濾過(guò)，取其濾液，水浴蒸干，殘?jiān)尤胍掖?.5mL溶解，作為供試品溶液。取缺防風(fēng)的處方量藥材，照益腎化濕微丸制備工藝制備陰性微丸，同法制得陰性溶液。另取防風(fēng)對(duì)照藥材1g，同上制法，殘?jiān)?mL乙醇溶解，制成對(duì)照藥材溶液。再取等量升麻素苷對(duì)照品和5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品，加乙醇稀釋至哥1mg/mL，制成混合對(duì)照品溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述幾種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（4:1）為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出晾干，置于紫外光燈（254nm）下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖1，陰性樣品在與混合對(duì)照品對(duì)應(yīng)位置上有明顯有干擾斑點(diǎn)，故本法不是鑒別本品的最適方法。3.1.2樣品制備方法優(yōu)化取微丸研碎的粉末5g，加入蒸餾水30mL，振搖使大部分溶解，超聲30min，用水飽和正丁醇萃取4次，正丁醇和蒸餾水按1:1用量，合并正丁醇層，水浴蒸干，其殘?jiān)?mL丙酮充分溶解，用一次性注射器及尼龍濾頭濾過(guò)，作為供試品。取缺防風(fēng)的處方量藥材，照益腎化濕微丸制備工藝制備陰性微丸，與供試品溶液同法制得陰性溶液。取1g對(duì)照藥材防風(fēng)，同法制得對(duì)照藥材溶液。選取用藥典方法中制得混合對(duì)照品。照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述幾種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-水（6.5:2.5:1）為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出晾干，噴10%硫酸乙醇溶液顯色，105℃下加熱，置于紫外光燈（365nm）下檢視。結(jié)果見(jiàn)表1，圖2?？梢?jiàn)采用制法2所制備的樣品，供試品、對(duì)照品及對(duì)照藥材中主斑點(diǎn)均能達(dá)到良好分離效果，且陰性樣品無(wú)干擾，本研究選擇制法2作為樣品制備方法。T：25℃，RH：65%原點(diǎn)位置溶劑前沿原點(diǎn)位置溶劑前沿123456圖1中國(guó)藥典防風(fēng)TLC法鑒別益腎化濕微丸紫外光燈（254nm）檢視1-3.供試品；4.陰性樣品；5.防風(fēng)對(duì)照藥材；6.升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷混合對(duì)照T：25℃，RH：65%123456123456A1A2123456123456B1B2圖2益腎化濕微丸中防風(fēng)TLC鑒別樣品制備方法比較A1，A2：制法1；B1，B2：制法2A1，B1：UV254nm；A2，B2：10%硫酸乙醇溶液顯色，UV365nm1-3.供試品；4.防風(fēng)對(duì)照藥材；5.升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷混合對(duì)照品；6.陰性樣品表1益腎化濕微丸中防風(fēng)TLC鑒別樣品制備方法比較名稱(chēng)方法來(lái)源方法差異結(jié)果制法1制法2《中國(guó)藥典》2015年版一部防風(fēng)鑒別項(xiàng)（2）方法優(yōu)化：取微丸粉末5g，加入蒸餾水30mL，振搖使大部分溶解，超聲30min，用水飽和正丁醇萃取4次，正丁醇和蒸餾水按1:1用量，合并正丁醇層，水浴蒸干，殘?jiān)?mL丙酮充分溶解，用一次性注射器及尼龍濾頭濾過(guò)，作為供試品①加丙酮超聲提?。虎跉?jiān)靡掖既芙?。①加水超聲提?。虎谟盟柡驼〈驾腿。虎蹥堅(jiān)帽芙?；?0%硫酸乙醇溶液顯色。主斑點(diǎn)未能良好分離。主斑點(diǎn)達(dá)到良好分離，升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷能夠有效地表達(dá)。3.1.3展開(kāi)系統(tǒng)考察比較三個(gè)展開(kāi)系統(tǒng)（二氯甲烷-甲醇-水分別為7:3:0、6.5:2.5:1、5.5:3.5:1）的展開(kāi)效果，結(jié)果展開(kāi)系統(tǒng)為二氯甲烷-甲醇-水（6.5:2.5:1）的圖譜中與對(duì)照品相應(yīng)位置上的兩個(gè)點(diǎn)分離較好，且陰性樣品無(wú)干擾現(xiàn)象，展開(kāi)效果最佳，故選擇二氯甲烷-甲醇-水（6.5:2.5:1）作為展開(kāi)系統(tǒng)，結(jié)果見(jiàn)圖3。T：25℃，RH：65%123456123456123456A1B1C1123456123456123456A2B2C3圖3益腎化濕微丸中防風(fēng)TLC鑒別不同展開(kāi)系統(tǒng)比較A1，A2：二氯甲烷-甲醇-水（7:3:0）；B1，B2：二氯甲烷-甲醇-水（6.5:2.5:1）C1，C2：二氯甲烷-甲醇-水（5.5:3.5:1）A1，B1，C1：UV254nm；A2，B2，C2：10%硫酸乙醇溶液顯色，UV365nm1-3.供試品；4.防風(fēng)對(duì)照藥材；5.升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷混合對(duì)照品；6.陰性樣品3.1.4點(diǎn)樣量考察考察點(diǎn)樣量為1～5mL對(duì)展開(kāi)效果的影響。點(diǎn)樣量2μL時(shí)，主斑點(diǎn)分離效果較好，無(wú)拖尾現(xiàn)象發(fā)生，且用量較少，故本研究選擇點(diǎn)樣量為2μL，結(jié)果看圖4。T：25℃，RH：70%123412341234123412341μL2μL3μL4μL5μLA123412341234123412341μL2μL3μL4μL5μLB圖4益腎化濕微丸中防風(fēng)TLC鑒別不同點(diǎn)樣量比較A：10%硫酸乙醇溶液顯色，UV254nm；B：10%硫酸乙醇溶液顯色，UV365nm1.供試品；2.防風(fēng)對(duì)照藥材；3.升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷混合對(duì)照品；4.陰性樣品3.1.5點(diǎn)樣方式考察考察點(diǎn)狀和帶狀兩種點(diǎn)樣方式對(duì)展開(kāi)效果的影響，結(jié)果兩種點(diǎn)樣方式均能良好分離，且主斑點(diǎn)清晰無(wú)干擾，故兩種點(diǎn)樣方法均適用，結(jié)果見(jiàn)圖5。T：25℃，RH：70%1234123412341234帶狀點(diǎn)狀帶狀點(diǎn)狀A(yù)B圖5益腎化濕微丸中防風(fēng)TLC鑒別不同點(diǎn)樣方式對(duì)比A：UV254nm；B：10%硫酸乙醇溶液顯色，UV365nm1.供試品；2.防風(fēng)對(duì)照藥材；3.升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷混合對(duì)照品；4.陰性樣品3.1.6預(yù)飽和考察考察預(yù)飽和及未預(yù)飽和對(duì)展開(kāi)效果的影響，結(jié)果兩種操作均能良好分離，但未飽和狀態(tài)下易出現(xiàn)邊緣效應(yīng)，影響圖譜美觀(guān)，甚至可能影響樣品分析結(jié)果，建議展開(kāi)前進(jìn)行預(yù)飽和處理，結(jié)果見(jiàn)圖6。3.1.7溫度考察考察溫度為10、25、30、40℃對(duì)展開(kāi)效果的影響，結(jié)果10℃時(shí)Rf值小于藥典規(guī)定的最小值0.2，其他溫度下分離效果均不錯(cuò)，故展開(kāi)溫度對(duì)本法鑒別益腎化濕微丸中防風(fēng)有影響，建議展開(kāi)溫度為20-40℃，結(jié)果見(jiàn)圖7。3.1.8相對(duì)濕度考察考察相對(duì)濕度為35%、60%、70%、80%、95%對(duì)展開(kāi)效果的影響，在不同濕度下分離效果均不錯(cuò)，主斑點(diǎn)清晰，且Rf值均在藥典規(guī)定范圍內(nèi)，故濕度對(duì)對(duì)本法鑒別益腎化濕微丸中防風(fēng)無(wú)影響。結(jié)果見(jiàn)圖8。T：25℃，RH：70%123456123456A1A2123456123456B1B2圖6益腎化濕微丸中防風(fēng)TLC鑒別預(yù)飽和考察A1，A2：未預(yù)飽和；B1，B2：預(yù)飽和15minA1，B1：UV254nm；A2，B2：10%硫酸乙醇溶液顯色，UV365nm1-3.供試品；4.防風(fēng)對(duì)照藥材；5.升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷混合對(duì)照品；6.陰性樣品T：10℃，RH：70%T：25℃，RH：70%T：30℃，RH：70%T：40℃，RH：70%123456123456123456123456A1B1C1D1123456123456123456123456A2B2C2D2圖7益腎化濕微丸中防風(fēng)TLC鑒別不同溫度對(duì)展開(kāi)效果的影響A1，A2：10℃；B1，B2：25℃；C1，C2：30℃；D1，D2：40℃A1，B1,C1，D1：UV254nm；A2，B2，C2，D2：10%硫酸乙醇溶液顯色，UV365nm1-3.供試品；4.防風(fēng)對(duì)照藥材；5.升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷混合對(duì)照品；6.陰性樣品T：25℃，RH：35%T：25℃，RH：60%T：25℃，RH：70%T：25℃，RH：80%T：25℃，RH：95%123456123456123456123456123456A1B1C1D1E1123456123456123456123456123456A2B2C2D2E2圖8益腎化濕微丸中防風(fēng)TLC鑒別不同相對(duì)濕度比較A1，A2：35%；B1，B2：60%；C1，C2：70%；D1，D2：80%；E1，E2：95%A1，B1,C1，D1，E1：UV254nm；A2，B2，C2，D2，E2：10%硫酸乙醇溶液顯色，UV365nm1-3.供試品；4.防風(fēng)對(duì)照藥材；5.升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷混合對(duì)照品；6.陰性樣品3.1.9防風(fēng)薄層鑒別條件制備方法：取微丸粉末5g，加入蒸餾水30mL，振搖使大部分溶解，超聲30min，用水飽和正丁醇萃取4次，正丁醇和蒸餾水按1:1用量，合并正丁醇層，蒸干，殘?jiān)?mL丙酮充分溶解，用一次性注射器及尼龍濾頭濾過(guò)，作為供試品。取缺防風(fēng)的處方量藥材，照益腎化濕微丸制備工藝制備陰性微丸，與供試品溶液同法制得陰性溶液。取1g對(duì)照藥材防風(fēng)，同法制得對(duì)照藥材溶液。取藥典方法制得的升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷混合對(duì)照品。點(diǎn)樣量：2mL。點(diǎn)樣方式：不控制。預(yù)飽和：建議預(yù)飽和。溫濕度：建議20-40℃，相對(duì)濕度不控制。展開(kāi)系統(tǒng)：二氯甲烷-甲醇-水（6.5:2.5:1）下層溶液。顯色劑：10%硫酸乙醇溶液。檢視方法：在105℃下加熱2min，紫外光燈（365nm）下檢視。標(biāo)準(zhǔn)：在供試品的色譜中，與對(duì)照藥材、對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，分別有相同顏色的斑點(diǎn)顯現(xiàn)，且陰性樣品無(wú)干擾現(xiàn)象。3.1.10中試樣品鑒別采用以上防風(fēng)薄層鑒別方法對(duì)三批中試樣品（批號(hào)：20171001、20171002、20171003）進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示，三批樣品分離度均不錯(cuò)，主斑點(diǎn)清晰，陰性無(wú)明顯干擾，故本法適用于鑒別益腎化濕微丸中的防風(fēng)。結(jié)果見(jiàn)圖9。T：26℃，RH：80%123456789101112圖9益腎化濕微丸中防風(fēng)TLC鑒別三批樣品檢驗(yàn)結(jié)果10%硫酸乙醇溶液顯色后，紫外光燈（365nm）檢視1-3.20171001；4-6.20171002；7-9.20171003；10.防風(fēng)對(duì)照藥材；11.升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷混合對(duì)照品；12.陰性樣品3.2陳皮薄層鑒別研究3.2.1藥典方法采用《中國(guó)藥典》2015年版一部陳皮的鑒別項(xiàng)（2）中樣品制備方法制備供試品、陳皮對(duì)照藥材、橙皮苷對(duì)照品、陰性溶液：取本品粉末3g，加10mL無(wú)水甲醇，加熱回流20min，濾過(guò)，取5mL濾液濃縮為1mL，作為供試品溶液；取缺陳皮的處方量藥材，照益腎化濕微丸制備工藝制備陰性微丸，與供試品溶液同法制得到陰性溶液；取0.5g對(duì)照藥材陳皮，同法制得陳皮對(duì)照藥材溶液；取適量橙皮苷對(duì)照品，加入甲醇溶解，制成飽和溶液作為橙皮苷對(duì)照品。照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述幾種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100:17:13）為展開(kāi)劑，展開(kāi)2cm，取出晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20:10:1:1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)9cm，取出晾干，噴1%三氯化鋁溶液顯色，紫外光燈（365nm）下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖10，橙皮苷分離度差，Rf值過(guò)小，不符合藥典規(guī)定范圍，且陰性有干擾，故該方法不適用于本品。T：25℃，RH：73%原點(diǎn)位置溶劑前沿原點(diǎn)位置溶劑前沿123456圖10中國(guó)藥典陳皮TLC法鑒別益腎化濕微丸三氯化鋁溶液顯色后紫外光燈（365nm）檢視1-3.供試品4.陳皮對(duì)照藥材5.橙皮苷對(duì)照品6.陰性樣品3.2.2樣品制備方法優(yōu)化根據(jù)成分特點(diǎn)，優(yōu)化陳皮樣品的制備方法，取本品微丸粉末5g，加入30mL乙醇，浸漬過(guò)夜，濾過(guò)，取其濾液作為供試品溶液；取缺陳皮的處方量藥材，照益腎化濕微丸制備工藝制備陰性微丸，與供試品溶液同法制得陰性溶液；取0.5g對(duì)照藥材陳皮，同法制得對(duì)照藥材溶液；取藥典法所用橙皮苷對(duì)照品作為本優(yōu)化法的對(duì)照品。照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述幾種溶液各8μL，分別點(diǎn)于同一塊0.5%氫氧化鈉制備過(guò)的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-氨水-水（4:1:0.03:0.03）為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出，晾干，1%三氯化鋁溶液顯色，置于紫外光燈（365nm）下檢視。可見(jiàn)采用制法2所制備的樣品，供試品、對(duì)照品及對(duì)照藥材中主斑點(diǎn)均能達(dá)到良好分離效果，Rf值符合藥典規(guī)定范圍，主斑點(diǎn)清晰，陰性樣品無(wú)干擾現(xiàn)象，且操作簡(jiǎn)單，故本研究選擇制法2作為樣品制備方法。結(jié)果見(jiàn)表2，圖11。表2益腎化濕微丸中陳皮TLC鑒別樣品制備方法比較名稱(chēng)方法來(lái)源方法差異結(jié)果制法1制法2《中國(guó)藥典》2015年版一部陳皮鑒別項(xiàng)（2）方法優(yōu)化：取本品微丸粉末5g，加入30mL乙醇，浸漬過(guò)夜，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液。①加無(wú)水甲醇10ml，加熱回流20分鐘；②濃縮。①浸漬；②不濃縮。主斑點(diǎn)未能達(dá)到良好分離。主斑點(diǎn)達(dá)到良好分離，橙皮苷能有效表達(dá)。T：25℃，RH：70%123456123456AB圖11益腎化濕微丸中陳皮TLC鑒別樣品制備方法比較A:制法1；B：制法2A,B：1%三氯化鋁溶液顯色，UV365nm1-3.供試品；4.陳皮對(duì)照藥材；5.橙皮苷對(duì)照品；6.陰性樣品3.2.3展開(kāi)系統(tǒng)考察比較三個(gè)展開(kāi)系統(tǒng)（三氯甲烷-甲醇-氨水-水分別為2:1:0:0、2:1:0.03:0.03、4:1:0.03:0.03）的展開(kāi)效果，結(jié)果展開(kāi)系統(tǒng)為三氯甲烷-甲醇-氨水-水（2:1:0.03:0.03）的圖譜中與對(duì)照品相應(yīng)的點(diǎn)分離較好，且陰性樣品無(wú)干擾現(xiàn)象，展開(kāi)效果最佳，最美觀(guān)，故選擇三氯甲烷-甲醇-氨水-水（2:1:0.03:0.03）作為展開(kāi)系統(tǒng)，結(jié)果見(jiàn)圖12。T：25℃，RH：70%123456123456123456ABC圖12益腎化濕微丸中陳皮TLC鑒別不同展開(kāi)系統(tǒng)比較A：三氯甲烷-甲醇-氨水-水（2:1:0:0）；B：三氯甲烷-甲醇-氨水-水（2:1:0.03:0.03）C：三氯甲烷-甲醇-氨水-水（4:1:0.03:0.03）A，B，C：1%三氯化鋁溶液顯色，UV365nm1-3.供試品；4.陳皮對(duì)照藥材；5.橙皮苷對(duì)照品；6.陰性樣品3.2.4點(diǎn)樣量考察考察點(diǎn)樣量為7、8、9、10、11μL對(duì)展開(kāi)效果的影響。點(diǎn)樣量7～9mL時(shí)，主斑點(diǎn)清晰且分離效果較好，Rf值在規(guī)定范圍內(nèi)，故本研究選擇點(diǎn)樣量為8μL，結(jié)果看圖13。T：25℃，RH：70%123412341234123412347mL8mL9mL10mL11mL圖13益腎化濕微丸中陳皮TLC鑒別不同點(diǎn)樣量比較1%三氯化鋁溶液顯色，UV365nm1.供試品；2.陳皮對(duì)照藥材；3.橙皮苷對(duì)照品；4.陰性樣品3.2.5點(diǎn)樣方式考察考察點(diǎn)狀和帶狀點(diǎn)樣方式對(duì)展開(kāi)效果的影響，結(jié)果分離效果均不錯(cuò)，故益腎化濕微丸中陳皮的薄層鑒別兩種點(diǎn)樣方式均適用，結(jié)果見(jiàn)圖14。T：25℃，RH：70%12341234帶狀點(diǎn)狀圖14益腎化濕微丸中陳皮TLC鑒別不同點(diǎn)樣方式對(duì)比1%三氯化鋁溶液顯色，UV365nm1.供試品；2.陳皮對(duì)照藥材；3.橙皮苷對(duì)照品；4.陰性樣品3.2.6預(yù)飽和考察考察預(yù)飽和及未預(yù)飽和對(duì)展開(kāi)效果的影響，結(jié)果未飽和狀態(tài)下易出現(xiàn)邊緣效應(yīng)，且Rf值有明顯差異，故展開(kāi)前必須進(jìn)行必須預(yù)飽和，預(yù)飽和時(shí)間建議大于等于15min，結(jié)果見(jiàn)圖15。T：25℃，RH：70%123456123456AB圖15益腎化濕微丸中陳皮TLC鑒別預(yù)飽和考察A，B：1%三氯化鋁溶液顯色，UV365nm1-3.供試品；4.陳皮對(duì)照藥材；5.橙皮苷對(duì)照品；6.陰性樣品3.2.7溫度考察考察溫度為10、25、30、40℃對(duì)展開(kāi)效果的影響，結(jié)果10℃時(shí)Rf值小于藥典規(guī)定的最小值0.2，其他溫度下均能達(dá)到良好的分離效果，故展開(kāi)溫度對(duì)本法鑒別益腎化濕微丸中陳皮有明顯影響，建議展開(kāi)溫度為20-40℃，結(jié)果見(jiàn)圖16。3.2.8相對(duì)濕度考察考察相對(duì)濕度為35%、50%、60%、70%、85%對(duì)展開(kāi)效果的影響，在不同濕度下均能較好分離，Rf值均在藥典規(guī)定范圍內(nèi)，故展開(kāi)濕度對(duì)本法鑒別無(wú)影響，見(jiàn)圖17。T：10℃，RH：70%T：25℃，RH：70%123456123456ABT：30℃，RH：70%T：40℃，RH：70%123456123456CD圖16益腎化濕微丸中陳皮TLC鑒別不同溫度對(duì)展開(kāi)效果的影響A：10℃；B：25℃；C：30℃；D：40℃A，B，C，D：1%三氯化鋁溶液顯色，UV365nm1-3.供試品；4.陳皮對(duì)照藥材；5.橙皮苷對(duì)照品；6.陰性樣品T：25℃，RH：35%T：25℃，RH：50%T：25℃，RH：60%123456123456123456ABCT：25℃，RH：75%T：25℃，RH：85%123456123456DE圖17益腎化濕微丸中陳皮TLC鑒別不同相對(duì)濕度比較A：35%；B：50%；C：60%；D：75%；E：85%A，B，C，D，E：1%三氯化鋁溶液顯色，UV365nm1-3.供試品；4.陳皮對(duì)照藥材；5.橙皮苷對(duì)照品；6.陰性樣品3.2.9陳皮薄層鑒別條件制備方法：取本品微丸粉末5g，加入30mL的乙醇，浸漬過(guò)夜，濾過(guò)，取其濾液作為供試品溶液；取缺陳皮的處方量藥材，照益腎化濕微丸制備工藝制備陰性微丸，與供試品溶液同法制得陰性溶液；取陳皮對(duì)照藥材0.5g，同法制得對(duì)照藥材溶液；取適量橙皮苷對(duì)照品，加入甲醇溶解制成飽和溶液，作為對(duì)照品。點(diǎn)樣量：8μL。點(diǎn)樣方式：不控制。預(yù)飽和：需要預(yù)飽和。溫濕度：建議20-40℃，相對(duì)濕度不控制。展開(kāi)系統(tǒng)：三氯甲烷-甲醇-氨水-水（2:1:0.03:0.03）。顯色劑：噴1%三氯化鋁溶液顯色。檢視方法：置于紫外光燈（365nm）下檢視。標(biāo)準(zhǔn)：在供試品的色譜中，與對(duì)照藥材、對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，分別有相同顏色的斑點(diǎn)顯現(xiàn)，且陰性樣品無(wú)干擾現(xiàn)象。3.2.10中試樣品鑒別采用以上陳皮薄層鑒別方法對(duì)三批中試樣品（批號(hào)：20171001、20171002、20171003）進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示，三批樣品分離度均較好，且陰性無(wú)干擾，故本優(yōu)化法適用于鑒別益腎化濕微丸中的陳皮。結(jié)果見(jiàn)圖18。T：26℃，RH：80%123456789101112圖18益腎化濕微丸中陳皮TLC鑒別三批樣品檢驗(yàn)結(jié)果1%三氯化鋁溶液顯色后，紫外光燈（365nm）檢視1-3.20171001；4-6.20171002；7-9.20171003；10.防風(fēng)對(duì)照藥材；11.橙皮苷對(duì)照品；12.陰性樣品3.3清半夏薄層鑒別研究3.3.1藥典方法1采用《中國(guó)藥典》2015年版一部半夏的鑒別項(xiàng)（2）中樣品制備方法制備供試品、陰性溶液、混合對(duì)照品：取本品粉末1.8g，加入10mL甲醇，加熱回流30min，濾過(guò)，取其濾液揮至2mL，作為供試品溶液；取缺半夏的處方量藥材，照益腎化濕微丸制備工藝制備陰性微丸，與供試品溶液同法制備得到陰性溶液；取半夏對(duì)照藥材0.7g，同法制得半夏對(duì)照藥材溶液；另取精氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸對(duì)照品，加70%甲醇制成1mg/mL的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述供試品、對(duì)照藥材和陰性溶液各5μL，混合對(duì)照品1μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（8:3:1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出晾干，用茚三酮試液顯色，在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，置于日光下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖19，圖譜上供試品中與對(duì)照品相同位置的斑點(diǎn)能很好地分離，且陰性無(wú)干擾。T：25℃，RH：75%原點(diǎn)位置溶劑前沿原點(diǎn)位置溶劑前沿123456圖19中國(guó)藥典半夏TLC法1鑒別益腎化濕微丸茚三酮試液顯色后日光下檢視1-3.供試品；4.半夏對(duì)照藥材；5.精氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸對(duì)照品；6.陰性樣品3.3.2藥典方法2采用《中國(guó)藥典》2015年版一部半夏的鑒別項(xiàng)（3）中樣品制備方法制備供試品、陰性溶液、對(duì)照藥材：取本品微丸粉末1.8g，加10mL乙醇，加熱回流提取1h，濾過(guò)，取濾液濃縮，濃至0.5mL，作為供試品溶液；取缺半夏的處方量藥材，照益腎化濕微丸制備工藝制備陰性微丸，與供試品溶液同法制得陰性樣品溶液；另取半夏對(duì)照藥材0.7g，同法制得半夏對(duì)照藥材溶液；選用鑒別項(xiàng)（2）中混合對(duì)照品作對(duì)照品。照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述幾種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-丙酮-甲酸（30:6:4:0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出晾干，10%硫酸乙醇溶液顯色，105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，置于日光下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖20，主斑點(diǎn)不清晰且分離效果不佳，陰性有干擾，故本方法不適用于益腎化濕微丸中清半夏的TLC鑒別。T：25℃，RH：75%原點(diǎn)位置溶劑前沿原點(diǎn)位置溶劑前沿123456圖20中國(guó)藥典半夏TLC法2鑒別益腎化濕微丸茚三酮試液顯色后日光下檢視1-3.供試品；4.半夏對(duì)照藥材；5.精氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸對(duì)照品；6.陰性樣品3.3.3樣品制備方法優(yōu)化根據(jù)本品性質(zhì)，對(duì)藥典方法進(jìn)行調(diào)整優(yōu)化：取本品粉末1.8g，加甲醇50mL，加熱回流30min，濾過(guò)，濾液揮至10mL，作為供試品溶液；取缺半夏的處方量藥材，照益腎化濕微丸制備工藝制備陰性微丸，與供試品溶液同法制得陰性溶液；取半夏對(duì)照藥材0.7g，同法制得對(duì)照藥材溶液；再取上述精氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸混合對(duì)照品，加70%甲醇稀釋5倍，制成0.2mg/mL的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述樣品溶液各5mL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（8:3:1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出晾干，噴茚三酮試液顯色，在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，置于日光下檢視。結(jié)果見(jiàn)表3，圖21。表2益腎化濕微丸中清半夏TLC鑒別對(duì)照品制備方法比較名稱(chēng)方法來(lái)源方法差異結(jié)果制法1制法2《中國(guó)藥典》2015年版一部半夏鑒別項(xiàng)（2）方法優(yōu)化：取本品粉末1.8g，加甲醇50mL，加熱回流30min，濾過(guò)，濾液揮至10mL，作為供試品溶液；取丙氨酸、纈氨酸、精氨酸、亮氨酸對(duì)照品，加70%甲醇制成0.2mg/mL的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。①加10mL甲醇回流，制得2mL供試品；②制成每1mL各含1mg的混合對(duì)照品，點(diǎn)樣量為1μL。①加50mL甲醇回流，制得10mL供試品；②制成每1mL各含0.2mg的混合溶液，點(diǎn)樣量為5μL。主斑點(diǎn)達(dá)到良好分離，精氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸能有效表達(dá)。主斑點(diǎn)達(dá)到良好分離，精氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸能有效表達(dá)。T:25℃，RH：80%123456123456AB圖21益腎化濕微丸中清半夏TLC鑒別樣品制備方法比較A:制法1，B:制法2茚三酮試液顯色后日光下檢視1-3.供試品；4.半夏對(duì)照藥材；5.精氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸對(duì)照品；6.陰性樣品可見(jiàn)，采用制法1和制法2均能達(dá)到良好的分離效果，制法2的對(duì)照品點(diǎn)樣量與供試品一致，便于本研究，故選用制法2作為對(duì)照品制備方法。3.3.4展開(kāi)系統(tǒng)考察比較三個(gè)展開(kāi)系統(tǒng)（正丁醇-冰醋酸-水分別為8:3:0,8:3:1,10:3:1）的展開(kāi)效果，結(jié)果展開(kāi)系統(tǒng)為正丁醇-冰醋酸-水（8:3:1）的圖譜最為美觀(guān)，分離度較好，且陰性樣品無(wú)干擾現(xiàn)象，展開(kāi)效果最佳，故選擇正丁醇-冰醋酸-水（8:3:1）作為展開(kāi)系統(tǒng)，結(jié)果見(jiàn)圖22。T:25℃，RH：80%123456123456123456ABC圖22益腎化濕微丸中清半夏TLC鑒別不同展開(kāi)系統(tǒng)比較A:正丁醇-冰醋酸-水（8:3:0）B:正丁醇-冰醋酸-水（8:3:1）C:正丁醇-冰醋酸-水（10:3:1）茚三酮試液顯色后日光下檢視1-3.供試品；4.半夏對(duì)照藥材；5.精氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸對(duì)照品；6.陰性樣品3.3.5點(diǎn)樣量考察考察點(diǎn)樣量為2、3、4、5、6μL對(duì)展開(kāi)效果的影響。點(diǎn)樣量4-6μL時(shí)，主斑點(diǎn)清晰，且分離效果較好，故本研究選擇點(diǎn)樣量為5μL，結(jié)果看圖23。3.3.6點(diǎn)樣方式考察考察點(diǎn)狀和帶狀點(diǎn)樣方式對(duì)展開(kāi)效果的影響，結(jié)果兩種點(diǎn)樣方式下分離效果均理想，故點(diǎn)樣方式對(duì)本法鑒別益腎化濕微丸中清半夏無(wú)影響，結(jié)果見(jiàn)圖24。T:25℃，RH：80%123412341234123412342μL3μL4μL5μL6μL圖23益腎化濕微丸中清半夏TLC鑒別不同點(diǎn)樣量比較茚三酮試液顯色后日光下檢視1.供試品；2.半夏對(duì)照藥材；3.精氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸對(duì)照品；4.陰性樣品T:25℃，RH：80%12341234帶狀點(diǎn)狀圖24益腎化濕微丸中清半夏TLC鑒別不同點(diǎn)樣方式對(duì)比茚三酮試液顯色后日光下檢視1.供試品；2.半夏對(duì)照藥材；3.精氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸對(duì)照品；4.陰性樣品3.3.7預(yù)飽和考察考察預(yù)飽和及未預(yù)飽和對(duì)展開(kāi)效果的影響，結(jié)果二者分離效果無(wú)明顯差異，并且均不錯(cuò)，故預(yù)飽和處理對(duì)本法鑒別無(wú)影響，結(jié)果見(jiàn)圖25。T:25℃，RH：80%123456123456AB圖25益腎化濕微丸中清半夏TLC鑒別預(yù)飽和考察A:預(yù)飽和15min，B:未飽和茚三酮試液顯色后日光下檢視1-3.供試品；4.半夏對(duì)照藥材；5.精氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸對(duì)照品；6.陰性樣品3.3.8溫度考察考察溫度為10、25、30、40℃對(duì)展開(kāi)效果的影響，結(jié)果各點(diǎn)均能較好地分離，無(wú)拖尾現(xiàn)象，主斑點(diǎn)清晰，且陰性無(wú)干擾，故展開(kāi)效果不受溫度影響，結(jié)果見(jiàn)圖26。3.3.9相對(duì)濕度考察考察相對(duì)濕度為35%、50%、60%、70%、80%對(duì)展開(kāi)效果的影響，在不同濕度下，各點(diǎn)分離效果均不錯(cuò)，無(wú)拖尾現(xiàn)象，主斑點(diǎn)清晰，且陰性無(wú)干擾，故展開(kāi)效果不受相對(duì)濕度影響，結(jié)果見(jiàn)圖27。T：10℃，RH：80%T：25℃，RH：80%123456123456ABT：30℃，RH：80%T：40℃，RH：80%123456123456CD圖26益腎化濕微丸中清半夏TLC鑒別不同溫度對(duì)展開(kāi)效果的影響A：10℃；B：25℃；C：30℃；D：40℃茚三酮試液顯色后日光下檢視1-3.供試品；4.半夏對(duì)照藥材；5.精氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸對(duì)照品；6.陰性樣品T：25℃，RH：35%T：25℃，RH：50%T：25℃，RH：60%123456123456123456ABCT：25℃，RH：70%T：25℃，RH：80%123456123456DE圖27益腎化濕微丸中陳皮TLC鑒別不同相對(duì)濕度比較A:35%，B:50%，C:60%，D:70%，E:80%茚三酮試液顯色后日光下檢視1-3.供試品；4.半夏對(duì)照藥材；5.精氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸對(duì)照品；6.陰性樣品3.3.10清半夏薄層鑒別條件制備方法：采用《中國(guó)藥典》2015年版一部半夏的鑒別項(xiàng)（2）中樣品制備方法制備供試品、陰性溶液、混合對(duì)照品：取本品微丸粉末1.8g,加甲醇10mL，加熱回流提取30min，濾過(guò)，濾液揮至0.5mL，作為供試品溶液；取缺清半夏的處方量藥材，照益腎化濕微丸制備工藝制備陰性微丸，與供試品溶液同法制得陰性溶液；取半夏對(duì)照藥材0.7g，同法制得對(duì)照藥材溶液；另取精氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸對(duì)照品，加70%甲醇制成各含0.2mg/mL的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。點(diǎn)樣量：5μL。點(diǎn)樣方式：不控制。預(yù)飽和：不控制。溫濕度：溫度不控制，相對(duì)濕度不控制。展開(kāi)系統(tǒng)：正丁醇-冰醋酸-水（8:3:1）。顯色劑：茚三酮試液。檢視方法：置于日光下檢視。標(biāo)準(zhǔn)：在供試品的色譜中，與對(duì)照藥材、對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，分別有相同顏色的斑點(diǎn)顯現(xiàn)，且陰性樣品無(wú)干擾現(xiàn)象。3.3.11中試樣品鑒別采用以上清半夏薄層鑒別方法對(duì)三批中試樣品（批號(hào)：20171001、20171002、20171003）進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示，三批樣品的分離情況均不錯(cuò)，且陰性無(wú)干擾，故本優(yōu)化法適用于鑒別益腎化濕微丸中的清半夏。結(jié)果見(jiàn)圖28。T：26℃，RH：80%123456789101112圖28益腎化濕微丸中清半夏TLC鑒別三批樣品檢驗(yàn)結(jié)果茚三酮試液顯色后日光下檢視1-3.20171001；4-6.20171002；7-9.20171003；10.半夏對(duì)照藥材；11.精氨酸、纈氨酸、亮氨酸、丙氨酸混合對(duì)照品；12.陰性樣品4討論4.1防風(fēng)益腎化濕微丸中的防風(fēng)薄層鑒別，根據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版的TLC法鑒別陰性有明顯干擾，經(jīng)過(guò)多次調(diào)整展開(kāi)劑均未符合要求，則確定該方法不適用。優(yōu)化樣品制備方法后，使用藥典中三氯甲烷-甲醇（4:1）的展開(kāi)系統(tǒng)展開(kāi)，樣品分離效果不理想且陰性有干擾，再通過(guò)加水調(diào)整展開(kāi)劑，仍是不能得到穩(wěn)定并且分離效果較好的結(jié)果。經(jīng)過(guò)多次摸索，改用二氯甲烷-甲醇-水（6.5:2.5:1），得到了穩(wěn)定、分離效果較好、主斑點(diǎn)清晰且陰性無(wú)干擾的結(jié)果。經(jīng)過(guò)防風(fēng)薄層鑒別的方法學(xué)考察可知，溫度過(guò)低和未預(yù)飽和都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想，故建議實(shí)驗(yàn)在20-40℃環(huán)境下進(jìn)行，并需要進(jìn)行預(yù)飽和操作。4.2陳皮益腎化濕微丸中的陳皮薄層鑒別，根據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版的TLC法鑒別樣品分離效果不好，該方法不適用。參考文獻(xiàn)中方法提取制備樣品，并多次調(diào)整展開(kāi)劑，選用0.5%氫氧化鈉制備的硅膠G薄層板，以三氯甲烷-甲醇-氨水-水（4:1:0.03:0.03）為展開(kāi)劑展開(kāi)，能得到不錯(cuò)的分離效果。優(yōu)化方法中陳皮樣品的制備方法，選用0.5%氫氧化鈉制備的硅膠G薄層板，以三氯甲烷-甲醇-氨水-水（4:1:0.03:0.03）為展開(kāi)劑展開(kāi)，也能得到不錯(cuò)的分離效果。對(duì)比文獻(xiàn)方法及優(yōu)化方法中陳皮樣品的制備方法，優(yōu)化方法中陳皮樣品制備方法的操作明顯更簡(jiǎn)單，故選用優(yōu)化方法中陳皮樣品制備方法作為本研究樣品制備方法。再對(duì)比普通硅膠G板、硅膠GF254板和0.5%氫氧化鈉制備的硅膠G板，0.5%氫氧化鈉制備的硅膠G板效果最好，故選用0.5%氫氧化鈉制備的硅膠G板。4.3清半夏益腎化濕微丸中的清半夏薄層鑒別，根據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版的TLC法鑒別項(xiàng)（3）制備樣品并試驗(yàn)，有陰性有干擾，故不適用。而《中國(guó)藥典》2015年版的TLC法鑒別項(xiàng)（2）方法分離效果好且無(wú)干擾，故把該方法進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整，得到優(yōu)化法。顯色后置于105-150℃下加熱至斑點(diǎn)清晰，加熱時(shí)間需控制好，得到較清晰的斑點(diǎn)后建議趁熱拍照記錄結(jié)果，因?yàn)槔鋮s后某些斑點(diǎn)會(huì)變淡。方法優(yōu)化使對(duì)照品點(diǎn)樣量與供試品一致，便于本研究點(diǎn)樣量考察，故選用稀釋后的對(duì)照品。4.4展望在本次方法學(xué)考察中，由于物資限制，以上三種藥材的方法學(xué)考察均未進(jìn)行不同薄層板廠(chǎng)家的薄層板比較，希望接下來(lái)能對(duì)其進(jìn)行研究，使研究結(jié)果更加完善。對(duì)益腎化濕微丸中防風(fēng)、陳皮、清半夏的薄層鑒別方法仍需進(jìn)一步研究，使其鑒別方法更加簡(jiǎn)單，若能一種樣品制備方法，鑒別幾種藥材，就能節(jié)省藥品質(zhì)量檢測(cè)時(shí)間，利于日后益腎化濕微丸上市大批量生產(chǎn)時(shí)的藥品質(zhì)量檢驗(yàn)。參考文獻(xiàn)姚迪,李有田,黃晶,等.中藥治療慢性腎小球炎的療效及對(duì)α_1-mGβ_2-mG的影響[J].遼寧中醫(yī)雜志,2009,36(6):947-948.國(guó)家藥典委員會(huì),中華人民共和國(guó)藥典2015版一部[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015,6:120-191.高詠莉.生藥防風(fēng)的化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2004,35(2):216-218.歐立娟,劉啟德.陳皮藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥,2006,17(10):787-789.王志強(qiáng),李炳超.半夏藥理作用研究進(jìn)展[J].山西醫(yī)藥雜志月刊,2009(1):65-67.王薇,丁東平,劉祖雄,等.二陳顆粒的制備與質(zhì)量控制[J].中國(guó)藥房,2006,17(23):1782-1784.朱留成.慢性腎小球炎中醫(yī)治療[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,1995(2):148.孫景,楊繼彪,張小龍,等.止咳化痰丸中黃芩和防風(fēng)的薄層鑒別[J].新疆中醫(yī)藥雜志,2014,32(5):67-68.黃蘭芷,王曙賓.連防感冒顆粒中防風(fēng)薄層鑒別方法改進(jìn)[J].中南藥學(xué)雜志,2007,5(2):149-150.姜艷艷,劉斌,石任兵,等.防風(fēng)化學(xué)成分的分離與結(jié)構(gòu)鑒定[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2007,42(5):505-510.[10]楊璐維,陳蕾.平胃散加減方中黃芩、連翹、陳皮的薄層鑒別[J].臨床醫(yī)學(xué)工程,2012,19(5):821-822.[11]王薇,丁東平,劉祖雄,等.二陳顆粒的制備與質(zhì)量控制[J].中國(guó)藥房,2006,17(23):1782-1784.[12]寇昆明,張超.藿香正氣片中白芷、陳皮、茯苓的薄層色譜鑒別[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2001,15(2):28.[13]李湘平,袁檖樑,李汶.薄層色譜法定性鑒別胃可舒片中的陳皮甘草、木香[J].中國(guó)醫(yī)藥指南,2014(10):51-53.[14]熊玥,吳皓,劉福燕.清半夏飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中成藥雜志,2010,32(5):883-886.[15]鐘玲,許小紅,楊勝玉,等.中藥微丸的藥學(xué)研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2008,19(2):369-372.[16]BaertL,RemonJP.Influenceofamountofgranulationliquidonthedrugreleaseratefrompelletsmadebyextrusionspheronisation[J].InternationalJournalofPharmaceutics,1993,95(1-3):135-141.[17]SchmidtC,KleinebuddeP.InfluenceoftheGranulationSteponPelletsPreparedbyExtrusion/Spheronization[J].Chemical&PharmaceuticalBulletin,2008,47(3):405-412.[18]鄭林,陸振舉,張亦斌,等.制備緩釋微丸質(zhì)量研究[J].中國(guó)抗生素雜志,2012,37(4):320-324.綜述防風(fēng)、陳皮、清半夏的研究概況1前言防風(fēng)為傘形科植物防風(fēng)Saposhnikovia

divaricata

(Trucz.)Schischk的干燥根，辛、甘、溫，歸膀胱、肝、脾經(jīng)。功能解表祛風(fēng),勝濕,止痙[1]。主要含揮發(fā)油,已鑒定出15種成分[2]；此外，還含有色原酮類(lèi)，如升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、亥茅酚、香豆素類(lèi)、多糖類(lèi)等成分[3]。陳皮是蕓香科植物橘CitrusretieulataBlanco及其栽培變種的干燥成熟果皮[1]，具理氣健脾、燥濕化痰的功能，用于脘腹脹滿(mǎn)、食少吐瀉、咳嗽痰多。陳皮的有效成分為揮發(fā)油和黃酮類(lèi)，研究報(bào)道，黃酮類(lèi)以橙皮苷含量最高[4,5]。清半夏為天南星科植物半夏Pinelliaternate(Thunb.)Breit十燥塊莖經(jīng)白礬[KAl(SO4)2·12H20]溶液浸泡后所得的炮制品，其記載始載于宋朝《圣濟(jì)總錄》。清半夏臨床上長(zhǎng)于化痰，以燥濕化痰為主，用于濕痰咳嗽，痰熱內(nèi)結(jié)，風(fēng)痰吐逆，痰涎凝聚，咯吐不出。半夏含有多糖、有機(jī)酸、生物堿等多種化學(xué)成分，而生物堿是半夏的主要藥理活性成分。半夏經(jīng)過(guò)炮制制成清半夏，使其生物堿含量降低，毒性減弱?，F(xiàn)在就防風(fēng)、陳皮、清半夏的主要化學(xué)成分、藥理作用及其薄層鑒別研究現(xiàn)狀進(jìn)行歸納和總結(jié)。2主要化學(xué)成分的研究現(xiàn)今研究發(fā)現(xiàn)，防風(fēng)的主要化學(xué)成分有揮發(fā)性成分：2-甲基-3-丁烯-2-醇、戊醛、α-蒎烯、人參醇、β-姜黃烯、β-沒(méi)藥烯、十一碳烯、花側(cè)柏烯、萘、β-桉葉醇、棕櫚酸等；色原酮成分：升麻素、升麻素苷、亥茅酚、亥茅酚苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷等；香豆素類(lèi)成分：補(bǔ)骨脂素、香柑內(nèi)酯等；還含有多糖成分、有機(jī)酸成分等[2,3,6,7]。陳皮的主要化學(xué)成分有揮發(fā)性成分：D-檸檬烯、β-松油烯、β-月桂烯、間-傘花烯和β-蒎烯等；還有黃酮類(lèi)成分、微量元素和其他[5,8,9]。清半夏的主要化學(xué)成分有生物堿類(lèi)成分、刺激性成分、揮發(fā)油類(lèi)成分、有機(jī)酸類(lèi)成分、氨基酸類(lèi)成分、蛋白質(zhì)類(lèi)成分、無(wú)機(jī)元素類(lèi)成分及其他[10,17]。3藥理作用的研究研究表明[6,7]，防風(fēng)具有解熱作用，防風(fēng)95％乙醇提取物大鼠腹腔注射給藥，能顯著降低傷寒、副傷寒甲乙三聯(lián)菌鑿致熱大鼠體溫，防風(fēng)水煎液對(duì)酵母、蛋白凍及傷寒、副傷寒甲菌苗精制破傷風(fēng)類(lèi)毒素混合制劑致熱大鼠有解熱作用；具有鎮(zhèn)痛作用，在醋酸扭體法、熱板法、鼠尾溫浴法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)中，防風(fēng)提取物對(duì)于熱刺激、化學(xué)刺激引起疼痛的小鼠均有鎮(zhèn)痛作用，采用熱板法測(cè)定痛閾值，防風(fēng)提取物能明顯提高小鼠的痛閾值；具有鎮(zhèn)靜作用，防風(fēng)水煎液具有協(xié)同戊巴比妥鈉的催眠作用，同時(shí)可以減少小鼠自主活動(dòng)次數(shù)；具有抗炎作用，在巴豆油涂耳致炎實(shí)驗(yàn)中，防風(fēng)水煎液能明顯抑制小鼠耳廓腫脹，對(duì)醋酸引起的炎癥也有明顯的抑制作用；還具有抗腫瘤作用，增強(qiáng)非特異性免疫功能的作用，抗過(guò)敏作用，抗菌、抗病毒作用，抗凝血作用，止血作用，抗驚厥作用等。相關(guān)文獻(xiàn)表明[8,9]，陳皮對(duì)心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)有影響，具有殺蟲(chóng)及抑制微生物活性的作用，抗衰老及抗氧化的作用。對(duì)心血管具有升壓作用，對(duì)兔離體主動(dòng)脈平滑肌有收縮作用，有抗血小板聚集作用。對(duì)消化酶有影響，陳皮水提液對(duì)離體唾液淀粉酶活性有明顯的促進(jìn)作用。對(duì)胃腸平滑肌有影響，李偉等用陳皮水煎劑灌胃后,結(jié)果發(fā)現(xiàn)陳皮可促進(jìn)小鼠胃排空,對(duì)胃復(fù)安所致的胃排空加強(qiáng)作用及阿托品所致胃排空抑制作用無(wú)明顯影響；陳皮對(duì)阿托品所致的腸推進(jìn)有拮抗作用，但對(duì)去甲腎上腺素和異丙腎上腺素所致的腸推進(jìn)無(wú)明顯作用。陳皮還具有抗胃潰瘍、利膽、祛痰、平喘、抗炎等作用。陳皮的化學(xué)成分復(fù)雜,藥理作用廣泛。由于產(chǎn)地不同陳皮揮發(fā)油中除含有共性成分外,還含有不同的特征成分,或許這些差異就是產(chǎn)地不同,功效異同之所在。且這些差異可能對(duì)揮發(fā)油的質(zhì)量產(chǎn)生一定的影響,并對(duì)品種的鑒定有一定的區(qū)分作用。清半夏的藥理作用與半夏相似，故從半夏的藥理作用的研究[8,9]可知，清半夏具有抗腫瘤作用，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外對(duì)半夏的研究已表明半夏具有確切的抗腫瘤作用；具有祛痰鎮(zhèn)咳作用，張科衛(wèi)等以氨水致咳模型、酚紅祛痰、家鴿嘔吐實(shí)驗(yàn)檢測(cè)半夏的總游離有機(jī)酸的作用，結(jié)果證實(shí)半夏中舍有的總游離有機(jī)酸具有止咳祛痰的作用；具有鎮(zhèn)吐作用，半夏能激活迷走神經(jīng)傳出活動(dòng)而具有鎮(zhèn)吐作用，王蕾等[13]使用一定量的半夏總生物堿對(duì)水貂嘔吐模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示半夏總生物堿對(duì)順鉑(7.5mg·kg-1,ip)模型和阿樸嗎啡(l.6mg·kg-1,sc)模型水貂的嘔吐有抑制效果，硫酸銅(40mg·kg-1,ig)模型和運(yùn)動(dòng)嘔吐模型(100r·min-1,1h)的水貂無(wú)效，研究者認(rèn)為半夏總生物堿有止嘔的作用，止嘔的機(jī)制與中樞抑制有關(guān)；還對(duì)腸胃具有影響，有抗早孕的作用。半夏能抑制中樞神