唇膏類化妝品的制備和質(zhì)量檢測

內(nèi)容一目的要求

內(nèi)容二

實驗原理

內(nèi)容三儀器準備

內(nèi)容四

配方及工藝

內(nèi)容五

成分解析

內(nèi)容六

檢測與結(jié)論內(nèi)容七

思考題1.掌握口紅的配方原理和配制工藝。2.掌握口紅配方中各組分的作用。3.了解口紅的類型和作用。目的要求實驗原理口紅是唇部彩妝產(chǎn)品，不僅能夠潤滑口唇粘膜、保持唇部光澤，而且能夠修正唇部輪廓和增加面部美感。嘴唇皮膚與其他部位不同，嘴唇皮膚的角質(zhì)層薄，容易對口紅中的各類原材料成分產(chǎn)生過敏現(xiàn)象，因此口紅生產(chǎn)所使用的原材料更要有所甄選，配方組成更要合理，產(chǎn)品檢驗更要完善。早在公元前3500年，人類便已開始使用一些帶色的礦物和植物色素涂抹在面頰和唇上，以達到美容的目的。隨著美容化妝品的發(fā)展，口紅的色調(diào)、配方和功能都有較大的變化。

儀器準備三輥機，燒杯，電爐（或水浴鍋），托盤天平（或電子秤）。原料名稱百分比%作用白地蠟B14.76固體劑，增塑劑合成蠟2.95乳化穩(wěn)定劑，柔潤劑微晶蠟1.97乳化穩(wěn)定劑棕櫚酸異辛酯33.11軟化劑，分散劑氫化聚異丁烯21.65成膜劑，粘度控制劑聚異丁烯7.06粘合劑二氧化硅7.0摩擦劑，吸附劑，膚感調(diào)節(jié)氧化鐵黃2.9著色劑紅色6號3.2著色劑口紅配方原料名稱百分比%作用氧化鐵紅2.9著色劑氧化鐵棕0.3著色劑透明質(zhì)酸0.2保濕劑人參提取物0.5抗衰老，抗氧化當歸提取物0.5抗氧化，抗衰老，美白霍霍巴油 0.2保濕劑，柔潤劑維生素E0.2保濕，抗氧化，美白祛斑防腐劑0.6殺菌抑菌A相B相C相C相D相

工藝(1)將A相加熱使之溶化，并持續(xù)保溫，防止重新凝固；(2)將融化完全的A相，部分倒入已準備就緒的三輥機中，剩余的繼續(xù)保溫，維持液體狀態(tài)；(3)讓C相加入到（2）三輥機中，研磨三回合即可均勻；(4)將研磨完畢的混合料體用刮鏟盡可能的全部鏟出，鏟到剩余的A相中，在用玻璃棒攪拌均勻；(5)稱取B相，加入已混勻、攪勻的溶液當中，繼續(xù)攪拌均勻；(6)最后稱取D1-D6，依次加入溶液當中，攪拌均勻即可；(7)將已清理完畢的口紅模具取出，將已混勻的料體趁熱、快速倒入模具當中，可倒?jié)M、溢出部分料體；(8)待冷卻，用模具自備的刮刀處理掉多余的口紅膏，最后用口紅包材進行包裝；(9)清理機器、收拾臺面。成分解析：白地蠟B:無臭、無味，為白色無定形非晶性固體蠟。它是從石油分餾后剩余的殘渣，用溶劑萃取及化學(xué)處理的方法得到的一種高沸點的長鏈烴類，其成份是C31-70的支鏈飽和烴為主，少量的環(huán)狀、支鏈烴，熔點為60-85℃，能與各種礦物蠟、植物蠟及熱脂肪油互溶。此種蠟粒狀較大，且具有延展性，在低溫下不脆弱，再與液體油混合時具有防止油份分離析出的特性。熔點在77-80℃微晶蠟多少具有延性，與軟地蠟相似，熔點在88-90℃的微晶蠟是硬的，外觀上像蒙旦蠟合成蠟:合成蠟由合成烴的低分子量聚乙烯及其衍生物，非希爾一特羅甫希蠟及其衍生物組成。在化妝品中作柔潤劑和乳化穩(wěn)定劑使用雖然叫“蠟”，但實際上不是蠟。它是由單種或多種聚合物(由單體合成分子量較高的化合物)的反應(yīng)為主要原材料制成。聚酯蠟大多以硅氧樹脂為原材料。德國在二次世界大戰(zhàn)期間研制了硅氧樹脂，當時缺少原油，科研人員奉命開發(fā)一種人工合成材料來替代潤滑油。后來被證實德國科學(xué)家發(fā)明的硅氧樹脂可替代石蠟作為拋光材料，并且效果驚人，它可以很好地將漆表層密封起來，遠遠超過石蠟的潤滑效果，大大提高蠟的溶點，手感、光澤和持續(xù)時間也令人滿意。硅氧樹脂最大的特點是其光滑的表面。拿條毛巾貼著剛打完合成蠟的表層輕輕拋出去，毛巾的“滑翔”距離遠遠超過石蠟的效果。微晶蠟:白色無定形非晶狀固體蠟，以C31-70的支鏈飽和烴為主，含少量的環(huán)狀、直鏈烴，無臭無味。不溶于乙醇，略溶于熱乙醇，可溶于苯、氯仿、乙醚等；可與各種礦物蠟、植物蠟及熱脂肪油互溶。主要以石油分餾后的殘渣為原料，采用精制法制得。用于膏狀產(chǎn)品的上光劑，防銹劑、復(fù)寫紙、蠟燭、包裝浸漬及水果涂層；還用于化妝品、彩筆、鞋油、各種上光蠟等。棕櫚酸異辛酯:棕櫚酸異辛酯，主要用于化妝品類，其滲透性佳、具抑汗作用、與皮膚親和力強，為干性透氣油，廣泛應(yīng)用于護膚品及化妝品中，是優(yōu)良的皮膚柔潤劑，其性能穩(wěn)定，不易氧化或產(chǎn)生異味，可使肌膚柔和嫩滑而無油膩感，滲透性好，常用于各類護膚霜。在化妝品中作為延展劑、壓粉式化妝品的聯(lián)合劑及彩妝中色素的良好溶劑。常用于粉底霜防曬品、眼影、口紅、睫毛膏等配方中。還可作為軟化劑、分散劑，在潤發(fā)乳、沐浴露等配方中應(yīng)用。聚異丁烯:聚異丁烯（Polyisobutylene，PIB）是由異丁烯經(jīng)正離子聚合制得的聚合物，其分子量可從數(shù)百至數(shù)百萬。它是一種典型的飽和線型聚合物。分子鏈主體不含雙鍵，無長支鏈存在，其結(jié)構(gòu)單元為-（CH2-C(CH3)2)-，其中無不對稱碳原子，并且結(jié)構(gòu)單元以首一尾有規(guī)序列連接。氫化聚異丁烯:氫化聚異丁烯是一種合成的角鯊?fù)?。角鯊?fù)槭菑纳詈ｕ忯~肝臟中提取的角鯊烯經(jīng)氫化制得一種烴類油脂，故又名深海鯊魚肝油。添加在化妝品里對皮膚沒有傷害?？茖W(xué)研究發(fā)現(xiàn)，角鯊?fù)槭巧儆械幕瘜W(xué)穩(wěn)定性高，使用感極佳的動物油脂，對皮膚有較好的親和性，具有較低的極性和中等的鋪展性。無色至微黃色液體?；瘜W(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性好。不氧化、變色、變味。具有良好的潤膚性、延展性和滲透性。對皮膚無刺激性和致敏性。具有獨特的化學(xué)穩(wěn)定性和互溶性。是優(yōu)良潤膚劑，用于化妝品中，增加化妝品的涂敷性，使皮膚柔潤而無油膩感?？捎糜诟嗨?、粉底霜、口紅、防曬油、發(fā)油、睫毛膏、眼影膏等配方中。二氧化硅:是一種無機物，化學(xué)式為SiO2，硅原子和氧原子長程有序排列形成晶態(tài)二氧化硅，短程有序或長程無序排列形成非晶態(tài)二氧化硅。二氧化硅晶體中，硅原子位于正四面體的中心，四個氧原子位于正四面體的四個頂角上，許多個這樣的四面體又通過頂角的氧原子相連，每個氧原子為兩個四面體共有，即每個氧原子與兩個硅原子相結(jié)合。二氧化硅的最簡式是SiO2，但SiO2不代表一個簡單分子(僅表示二氧化硅晶體中硅和氧的原子個數(shù)之比)。純凈的天然二氧化硅晶體，是一種堅硬、脆性、不溶的無色透明的固體，常用于制造光學(xué)儀器等。氧化鐵黃:主要成分是氧化鐵，化學(xué)式Fe2O3·H2O，是氧化鐵的一水合物。氧化鐵最大的應(yīng)用是作為顏料來使用。按顏色分為氧化鐵紅、氧化鐵黃、氧化鐵黑，氧化鐵棕由氧化鐵紅、氧化鐵黑（和氧化鐵黃）混合而成紅色6號:紅色六號（臺灣命名）稱麗春紅4R，食用赤色102號（日本名），還稱食品紅7號性狀：紅至暗紅色顆粒或粉末，無臭，耐光，耐熱性強（105℃）。對檸檬酸、酒石酸穩(wěn)定，乃還原性差，遇堿變?yōu)楹稚?，吸濕性強。易溶于水，呈紅色。難溶于乙醇。溶于甘油，不溶于油脂。氧化鐵紅:有天然的和人造的兩種。天然的稱西紅。是基本上純粹的氧化鐵。紅色粉末。由于生產(chǎn)方法和操作條件的不同，它們的晶體結(jié)構(gòu)和物理性狀都有很大的差別，色澤變動于橙光到藍光至紫光之間。遮蓋力和著色力都很大。密度5-5.25。有優(yōu)越的耐光、耐高溫性能，并耐大氣影響、耐污濁氣體、耐一切堿類。在濃酸中只有在加熱情況下才逐漸被溶解。氧化鐵粽:棕色粉末。不溶于水、醇、醚,溶于熱強酸。著色力和遮蓋力很高。耐光性、耐堿性好。無水滲性和油滲性。色相隨工藝的不同,有黃棕、紅棕、黑棕等。透明質(zhì)酸:透明質(zhì)酸是一種酸性粘多糖，1934年美國哥倫比亞大學(xué)眼科教授Meyer等首先從牛眼玻璃體中分離出該物質(zhì)。透明質(zhì)酸以其獨特的分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)在機體內(nèi)顯示出多種重要的生理功能，如潤滑關(guān)節(jié)，調(diào)節(jié)血管壁的通透性，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)，水電解質(zhì)擴散及運轉(zhuǎn)，促進創(chuàng)傷愈合等。人參提取物:人參具有很好的藥理活性，人參活性成分主要有人參皂苷、人參多糖、揮發(fā)油、氨基酸和多肽等。研究發(fā)現(xiàn)，人參提取物有促進角質(zhì)降解和延緩老化作用，并有一定的抗粗糙和龜裂的作用。人生精油加速皮膚中葡糖胺聚糖的生成，對皮膚再生有激活作用。當歸提取物:1、有抗膽堿，抗氧化和清除自由基的作用，可抑制子宮收縮。對子宮的作用具有“雙向性”，其水溶性非揮發(fā)物質(zhì)能興奮子宮肌，使收縮加強，其揮發(fā)性成分則能抑制子宮，減少其節(jié)律性收縮，使子宮松弛。2、具有治療抗維生素E缺乏癥的作用。還能降低心肌的興奮性對心房纖維震顫有治療作用，對心臟的收縮幅度及頻率均呈抑制。能降低血壓，使血脂輕度下降，對主動脈的病變具有預(yù)防作用。對治療動脈粥樣硬化有一定的功效?；艋舭陀?又名霍霍巴，是一種墨西哥原生的植物，雖然全球都有栽種，但是還是以美墨交界處和以色列的沙漠地形最適合它的生長，品質(zhì)也最優(yōu)良。這種有一人多高的灌木植物所結(jié)的種子中的油，具有良好的滲透性，還具有耐高溫的特質(zhì)。維生素e:維生素E（VitaminE），是一類脂溶性維生素，包括了四種生育酚和四種生育三烯酚，是一種抗氧化劑。維生素E是有8種形式的脂溶性維生素，為一重要的抗氧化劑。維生素E包括生育酚和三烯生育酚兩類共8種化合物，即α、β、γ、δ生育酚和α、β、γ、δ三烯生育酚，α-生育酚是自然界中分布最廣泛含量最豐富活性最高的維生素E形式。檢測與結(jié)論：1.耐熱耐寒檢測：操作步驟：（1）樣品預(yù)處理。準備好2-3支口紅，貼上標簽，一般標簽內(nèi)容包括但不限于：樣品名稱、樣品負責(zé)人、樣品檢測項目和樣品檢測開始日期；（2）將處理完畢的樣品置于恒溫箱、冰箱處，耐熱耐寒恒定溫度分別為45（±1）℃和-5~-10℃，保持24h，恢復(fù)至室溫后無明顯變化，能正常使用即可；2.感官指標檢測:操作步驟:（1）樣品預(yù)處理。準備好2-3支口紅，貼上標簽，一般標簽內(nèi)容包括但不限于：樣品名稱、樣品負責(zé)人、樣品檢測項目和樣品檢測開始日期；（2）將樣品在室溫和非陽光直射下目測觀察；（3）外觀表面平滑無氣孔、符合規(guī)定色澤、用嗅覺鑒別，符合規(guī)定香型即可；3.重金屬檢測:操作步驟:微波消解儀測定：（1）用分析天平準確城區(qū)0.200g（±0.001g）樣品與消解罐中，同時做試劑空白。若樣品為未知樣品則只稱取0.100g進行消解。含有乙醇等揮發(fā)性物質(zhì)的樣品，應(yīng)置于100℃水浴中揮發(fā)30min（注意不得蒸干）在已稱好的樣品中加入7ml硝酸和1ml過氧化氫。（2）樣品預(yù)處理。將（1）中裝有配置好樣品的消解罐置于智能控溫加熱器上以80℃恒溫30min，以便確保消解完全、消解的安全性和檢測結(jié)果的準確性；（3）微波消解。預(yù)處理完成后，冷卻至室溫，按KJ系列消解罐操作規(guī)范裝置消解罐，進入消解程序；（4）消解程序設(shè)定。根據(jù)不同的檢測儀器設(shè)定不同的使用參數(shù)；（5）消解完成后，按微波消解儀器的操作方法取出消解罐；（6）趕酸。將取出的消解罐打開灌蓋，置于智能控溫加熱器上，130℃恒溫至消解液少于1ml且未蒸干時，取出冷卻；（7）定容。將消解液倒入比色皿中，用蒸餾水沖洗三次，定容到100ml，過濾后得到待測液。（8）維護保養(yǎng)。每次工作結(jié)束后，都必須清潔溫度傳感器，及時清理爐腔內(nèi)壁的污垢、水汽、酸氣等，保持清潔干凈；（9）其他注意事項。每使用30次后對導(dǎo)氣管進行一次清潔。嚴謹遵循儀器的使用說明進行操作使用；電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀使用：（1）冷開機(從儀器關(guān)閉狀態(tài)開機（2）使用前打開電源預(yù)熱4h，將儀器前部系統(tǒng)電源開關(guān)打開(綠色指示燈應(yīng)亮)。（3）開計算機、顯示器和打印機，進入操作系統(tǒng)。（4）開氣氣源閥，檢查并調(diào)節(jié)減壓閥于50kPa左右，氣源純度要求99.996％（5）開循環(huán)水，檢查壓力指示在50-310kPa之間，溫度設(shè)定在20℃±1℃（6）將儀器后部高壓電源開關(guān)打開(向上)（7）打開實驗室排風(fēng)系統(tǒng)。（8）安裝樣品導(dǎo)入系統(tǒng)（9）樣品毛細管由端動泵外通道上卡口卡住再經(jīng)下卡口，再進入霧化器，廢液管由霧化室下出口接至動泵中間通道的上卡口卡住，再經(jīng)下卡口流入廢液接收桶，壓上動泵壓塊調(diào)節(jié)動泵壓力調(diào)節(jié)桿，使進樣流速均勻，廢液管路中有一段一段的氣泡隨廢液流動。計算機軟件操作：（1）在操作系統(tǒng)下，運行Icpexepertll，進入儀器頁面，點火，進行矩管準直掃描、進行波長校正及觀察儀器當前狀態(tài)等（2）單擊“工作表格”后，進入工作表格裝載程序，進入工作表格界面，新建或打開工作表格，裝載工作表格包括兩種操作操作方式:新建用該對話框創(chuàng)建新工作表格。打開用該對話框可打開原有工作表格。建立新工作表格文件名按“新建”，創(chuàng)建并存儲工作表格，進入新建工作表對話框。工作表格軟件整個窗口包括三個頁面方法頁面、順序面、分析頁面（3）打開方法編器編輯方法(A擇分析元素圖B從元素周期表中單擊要分析的元素C分析元素線選擇完畢后，按確定。)選擇分析譜線的條件，輸入標準溶液濃度:A.進入方法編器的標樣頁面:B在標樣數(shù)處輸入標準溶液個數(shù):C.在標準濃度欄的單位處選擇濃度單位:D.在標準濃度欄的標樣處輸入每個標樣的濃度值。存儲該方法后返回方法編輯器頁面，檢查所選正確。如有誤到除或重斷編。（4）設(shè)置順序參數(shù)進樣方式設(shè)置，在工作表窗口，進入順序頁面，若未配置自動進樣器，確認進樣方式(樣品源)為手動。（5）輸入樣品信息:選擇順序器圖標，進入序編器頁面的樣品和校正標樣頁面。在“多少個樣品”項中輸入樣品數(shù):在“如何在溶液清單中插入校正標樣”項中選擇“開始時進行曲線校正”和“曲線校正包括一個空自”:擇“定”，將出現(xiàn)確認對話框。（6）設(shè)置序參數(shù):從順序面選擇“順序參數(shù)”圖標，彈出順序參數(shù)工作根。按照實際情況做適當選擇，包括:選擇標準曲線校正失敗時，所要采取的動作等選擇確定出對話，當提示認選擇時，選擇是。儀器優(yōu)化和檢查：（1）檢查矩管安裝正確，關(guān)矩室門，確認緊桿完全到位。(矩室門已關(guān)好)（2）檢查進樣管路安裝是否正確檢查或連接取樣毛細管和廢液管檢查或安裝好動象管檢查進樣毛細管是否已插入清洗液中:檢查廢液管是已放入廢液容器中。點燃等離子體：（1）單擊點燃等離子圖標按F4健點燃等離子體，1CP觀測位置優(yōu)化進入斷矩管準直頂面，(該方法采用257.610nh進行掃描)進5ppmWn溶液按炬掃描(TorchScan)按細進行向掃描，在方向欄里選擇為垂直，再按矩掃描行垂直掃描，以確定最佳位置。（2）進入或切換到分析頁面，選擇分析標簽，用鼠標單擊樣品標簽單元，將要分析的溶液標簽選成黃色，按“開始分析”且根據(jù)軟件提示，逐個進樣按確定進行分析，直至分析結(jié)束。冷關(guān)機：（1）用溶劑進樣清洗霧化室數(shù)分鐘，單擊等離子體熄滅(或從分析菜單中進擇關(guān)等離子體)等離子體熄滅后，蠕動泵將自動停止轉(zhuǎn)動，關(guān)閉循環(huán)水，關(guān)閉氣源，關(guān)閉附件，退出Icpexepertii軟件，關(guān)閉計算機、排風(fēng)等。為延長動泵管的使用壽命，每次工作結(jié)束應(yīng)將泵管從動泵上松開，并將動壓臂松開。結(jié)論:根據(jù)2015版化妝品安全技術(shù)性規(guī)范規(guī)定，化妝品應(yīng)符合:鉛≤10mg/kg；汞≤1mg/kg；砷≤2mg/kg；鎘≤5mg/kg。4.折斷力檢測：接通電源，打開開關(guān)。1、將口紅固定在口紅折斷儀的定位卡槽中，然后調(diào)整機器切面高度至與口紅肉身的中間位置相平行。2、按“單位”鍵調(diào)整測試單位為“N”。3、按“清零”鍵清除數(shù)據(jù)，再按“啟動”鍵，進入待測狀態(tài)。4、旋轉(zhuǎn)“調(diào)速”鍵，調(diào)整測試速度。5、按“啟動”按鈕開始測試，測試結(jié)束記錄屏顯的折斷力數(shù)據(jù)。標準的口紅折斷力范圍為2-3N。5.微生物檢測：（1）固體樣品，稱取10g，加到滅菌的生理鹽水稀釋瓶中，振蕩混勻，使具分設(shè)混懸啟，放30-32℃水浴中，15min后取出，充分振蕩混合，再放到30-32℃水浴中靜置15min，取上清液作為1:10的稀釋液。細菌總數(shù)的測定：（1）將配好的卵磷脂、吐溫80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基熔化后，放在滅菌鍋內(nèi)滅菌后，取出，放在45~50℃的恒溫水箱內(nèi)待用，需用時，取出，將培養(yǎng)基倒入平皿內(nèi)，每皿約15L，另在一個不加樣品的滅菌空平皿內(nèi)注入培養(yǎng)基，作空白對照。隨即轉(zhuǎn)動平皿，使樣品與培養(yǎng)基充分混合均勻，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h后從培養(yǎng)箱內(nèi)取出觀察。菌落計數(shù)方法及報告：（1）先用肉眼觀察，點數(shù)菌落數(shù)，然后再用放大5-10倍的放大鏡檢查，以防遺漏。記下各平皿的菌落數(shù)后。求出同一稀釋度各平皿生長的平均菌落數(shù)若平皿中有連成片狀的菌落或花點樣菌落蔓延生長時，該平皿不宜計數(shù)。若片狀菌落不到平皿中的一半，其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，則可將此半個平皿菌落計數(shù)后乘2，以代表全皿菌落數(shù)。（2）首先選取平均菌落數(shù)在30-300之間的平皿，作為菌落總數(shù)測定的范國當只有一個釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時，即以該平皿菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)，若有兩個稀釋度，其平均菌落數(shù)均在30-300個之間，則應(yīng)求出兩者菌落總數(shù)之比值來決定若其比值小于或等于2應(yīng)報告其平均數(shù)若大于2則報告其中較小的菌落數(shù)。（3）若所有稀釋度的平均南落數(shù)均大于300個，則應(yīng)按稀釋度最高的平均南落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均少于30個，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。（4）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30-300個之間，其中一個稀釋度大于300個，而相部的另一稀釋度小于30個時，則以接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之若所有的稀釋度均無菌生長，報告數(shù)為每克或每毫升小于10個。（5）菌落計數(shù)的報告，菌落數(shù)在10以內(nèi)時，按實有數(shù)值報告之，大于100時，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，應(yīng)以四舍五入法計算。為了縮短數(shù)字后面零的個數(shù)，可用10的指數(shù)來表示。在報告菌落數(shù)為“不可計”時，應(yīng)注明樣品的稀釋度。霉菌和酵母菌數(shù)的測定：（1）做10倍遞增稀釋液，每稀釋一次，換用一支1mL滅菌吸管，根據(jù)對樣品污染情況的估計，選擇3個合適的稀釋度，分別在做10倍稀釋的同時，吸取1mL稀釋液于滅菌平皿中，每個稀釋度做2個平皿，然后將至45℃左右的孟加拉紅培養(yǎng)基注入平皿中特，待瓊脂凝固后，倒置于25-28℃溫箱中，3天后開始觀察，共培養(yǎng)觀察5天（2）計算方法:通常選擇菌落數(shù)在10-150之間的平皿進行計數(shù)，同稀釋度的2個平皿的菌落平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即為每克(或毫升)檢樣中所含霉菌和酵母菌數(shù)，報告:每克(或毫升)樣品所含霉菌和酵母以個/g(個/mL)表示。（3）可參考GB4789，28食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗一染色法、培養(yǎng)基和試制國家食品藥品監(jiān)督管理總局《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)中霉菌和酵母菌數(shù)金黃色葡萄球菌的測定：（1）增菌培養(yǎng)完成后檢查經(jīng)過預(yù)處理的樣品中是否有菌落生長，若有菌落生長的話，將菌懸液劃線在BP(或VJ)平板上，將劃線后的平放入37.0℃培養(yǎng)24~48小時（2）分離純化:金黃色葡萄球菌的落在BP培養(yǎng)基上生長為圓形，光滑，凸起，濕潤，直徑為2-3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周為一混濁帶，在其外層有一透明帶。挑取單個落分純在瓊脂平板上，置37℃培養(yǎng)24H。（3）染色鏡檢:挑取分純落，涂片，進行革蘭氏染色，鏡檢，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性菌排列成葡萄狀，無芽胞，無夾膜，致病性電萄球菌，菌體較小，直徑為0.5-1um。（4）甘露醇發(fā)酵試驗:取述分純落接種到甘露醇發(fā)培養(yǎng)基中，置37℃培養(yǎng)24h，金黃色葡萄球菌應(yīng)能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸。（5）血漿凝固酶試驗:取清潔載玻片，一端滴加一滴滅菌生理鹽水，另一端滴加一滴血漿，用接種環(huán)挑取待檢落，分別在生理鹽水及血漿中充分研磨混合。血漿與菌若混懸液在5min內(nèi)出現(xiàn)團塊或顆粒狀凝塊時，而鹽水滴仍呈均勻混濁無凝固現(xiàn)象者為陽性，如兩者均無凝固現(xiàn)象則為陰性。凡玻片試驗呈陰性反應(yīng)或鹽水滴與血漿滴均有固現(xiàn)象，再進行試管凝固試驗（6）檢驗結(jié)果報告:BP板上若無可疑菌落生長，則報告無金黃色萄球菌。凡在上述選擇平板上有可疑菌落生長，經(jīng)染色鏡檢，證明為革蘭氏陽性葡萄球菌，并能發(fā)酵甘露產(chǎn)酸。血漿凝固酶試驗陽性者，可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球。（7）可參考【GB7918.5-87化妝品生物標準檢驗方法金黃色葡萄球菌的測定。大腸桿菌的測定：（1）取10m11:10稀釋樣品，加到雙倍濃度的乳糖膽鹽培養(yǎng)基中，置37℃培養(yǎng)24-48h，如不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，則報告為大腸桿菌陰性（2）如不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，劃線接種到伊紅美藍瓊脂平板上，置37℃培養(yǎng)18-24h同時取該培養(yǎng)液1-2滴接種到蛋白胨水中，置4℃培養(yǎng)24h。經(jīng)培養(yǎng)后，在上述平板上觀察有無典型桿菌生長。大腸桿菌在伊紅美藍瓊脂(EMB)培養(yǎng)基上的典型菌落呈深紫黑色，圓形邊緣整齊，表面光滑濕潤，常具有金屬光澤;也有的呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤或成粉紫色，中心較深的桿菌，亦常為大桿桿菌，應(yīng)注意挑選。挑取上述可疑菌落涂片作革蘭氏染色鏡檢：（1）在蛋白胨水培養(yǎng)液中，沿管加入基質(zhì)試劑約0.5ml，輕搖試管，觀察靛基質(zhì)反應(yīng)。陽性者液面呈政現(xiàn)紅色;陰性反應(yīng)液面呈試劑本色（2）檢驗結(jié)果報告:EMB板上若無可菌落生長，則報告無大菌落:平板上有典型菌落，并經(jīng)證實為革蘭氏陰性桿菌，靛基質(zhì)試驗性，則可報告被檢樣品中檢出大腸菌落（3）可參考【