薄層色譜法在藥物分析中的應(yīng)用

薄層色譜在藥物分析中的應(yīng)用摘要：隨著高效液相色譜法的興起與發(fā)展，薄層色譜法曾一度被忽略，直至高效薄層材料和預(yù)制板的出現(xiàn)，特別是20世紀80年代后期薄層色譜掃描儀的出現(xiàn)，形成現(xiàn)代儀器化薄層色譜法，才得到了更多的關(guān)注。TLC法被許多國家藥典用于藥物中雜質(zhì)的檢查、藥物分析等方面，且是目前藥典中收載最多的鑒別與有關(guān)物質(zhì)檢查方法之一，具有設(shè)備簡單、操作簡便、分離速度快，靈敏度和分辨率較高等優(yōu)點。關(guān)鍵詞：薄層色譜，藥物分析薄層色譜法(Thelayerchromatography，TLC)是將固定相均勻的涂布在具有光潔表面的玻璃、塑料或金屬板上形成薄層，在此薄層上進行色譜分離的方法，它屬于平板色譜，是一種常用的色譜分離方法。但隨著高效液相色譜法的興起與發(fā)展，薄層色譜法曾一度被忽略，直至高效薄層材料和預(yù)制板的出現(xiàn)，特別是20世紀80年代后期薄層色譜掃描儀的出現(xiàn)，形成現(xiàn)代儀器化薄層色譜法，才得到了更多的關(guān)注。TLC法被許多國家藥典用于藥物中雜質(zhì)的檢查、藥物分析等方面，且是目前藥典中收載最多的鑒別與有關(guān)物質(zhì)檢查方法之一，具有設(shè)備簡單、操作簡便、分離速度快，靈敏度和分辨率較高等優(yōu)點。其中，薄層色譜法用于藥物中雜質(zhì)檢查常用的方法有：雜質(zhì)對照品法（適用于已知雜質(zhì)并能制備得到雜質(zhì)對照品的方法）、供試品溶液自身稀釋對照法（適用于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不能不能確定，或無雜質(zhì)對照品的情況）、雜質(zhì)對照品法和供試品溶液自身稀釋對照法并用、對照藥物法（前兩種方法不適用時可用此方法）。而薄層色譜在藥物分析中我們則常用薄層色譜掃描法，其主要用于以下幾個方面：中藥材與中成藥的鑒別與成分分析薄層色譜掃描法在中藥材與中成藥上的應(yīng)用，主要是藥材品種的鑒別、含量的測定、成分研究、采收期與炮制方法等對成分與含量的影響，以及成藥中藥味的鑒別與含量的測定等。此方法可以直接在薄層板上進行中藥成分的定量分析，其掃描圖譜也可作為中藥材的質(zhì)量評價、鑒別依據(jù)。例如：用薄層掃描法可以鑒別黃連品種并對對其所含生物堿進行定量的測定；用薄層掃描法測定土荊皮中乙酸的含量，以幫助鑒別其真?zhèn)蔚?。以上事例都是對中藥材進行的測定。而中成藥則相對復(fù)雜，不單單只包含一味藥材制劑，多數(shù)為復(fù)方制劑。因此在薄層掃描法中，依據(jù)色譜峰的歸屬對中成藥中各位藥材的鑒別，一般是通過陰、陽雙對照法進行的。合成藥物及其制劑分析原料藥的純度檢查，以及在放置過程中產(chǎn)生的降解物等的分析，均可通過薄層掃描法來完成。應(yīng)用薄層掃描法，可以很容易的對合成藥物復(fù)方制劑或單方制劑進行原料分析和含量測定。撲炎痛中微量雜質(zhì)的測定可以用CS-930型薄層掃描儀，在硅膠GF254薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯-氯仿-冰乙酸（12:5:3:2.5）為展開劑，利用雙波長（λs=244nm，λr=280nm）鋸齒掃描隨行外標法，測定撲炎痛中去乙酰物含量藥物代謝研究通過分析手段了解藥物在體內(nèi)數(shù)量與質(zhì)量的變化，從而獲得藥物動力學(xué)各種參數(shù)以及藥物在體內(nèi)的轉(zhuǎn)變、代謝方式、途徑等信息，均屬體內(nèi)藥物分析范疇。它對于臨床合理用藥、藥品質(zhì)量評價以及藥代動力學(xué)研究具有重要意義。在大量復(fù)雜組分中進行微量或超微量藥物幾代謝物的分析工作，對于分析方法的靈敏度和選擇性都具有較高的要求，而薄層掃描法在多數(shù)情況下都可以滿足其分離及靈敏度的要求，且方法簡便易行，干擾小，準確度高，適用于臨床和法醫(yī)快速分析。例如，多索茶堿藥物代謝研究，用薄層掃描法，測定給大鼠口服多索茶堿后，不同時間各組織和體液中多索茶堿的含量。郭輝等按一定要求制備生物樣品：血漿以及心、肝、脾、肺、腎、胃、腸、肌肉、腦等均漿。經(jīng)處理后，將其點樣在硅膠GF254高效薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇（1:0.5）展開，用CS-930型薄層掃描儀在波長277nm掃描斑點，再用隨行標準法計算樣品中含原形藥物的絕對量，得出每克濕組織或每毫升血漿、尿中的微克數(shù)。結(jié)果表明，多索茶堿在大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)為一室模型，并能在體內(nèi)迅速轉(zhuǎn)化為其他代謝產(chǎn)物?？咕胤治鲂旅顾氐暮康臏y定可以利用薄層掃描法來完成。用硅膠60F254高效薄層板，以甲醇-25%氨水-丙酮-氯仿（35:20:20:5）為展開劑，一維上行展開，展開后以熒光胺進行衍生化，生成具有穩(wěn)定熒光的物質(zhì)，再將其浸入二氯甲烷-三乙胺-液體石蠟中，處理后，在所得的薄層板上便可同時測定新霉素B、C以及新霉素A。得到的熒光物在λ=365nm光照下，可在暗背景上看到淺蘭色熒光帶，然后用CAM-AGⅡ型薄層掃描儀進行熒光測定。對新霉素B和C及新霉素A的檢測限為20ng/斑點。在定量分析時，需要使用對照品，而新霉素C尚未有商品化的對照品，但發(fā)現(xiàn)新的新霉素C與B工作曲線是相同的。因此對新霉素C的工作曲線可以通過使用純度更高的新霉素B來完成。此外，用薄層掃描法還可以檢測存在于任何肉產(chǎn)品中的紅霉素與泰樂霉素，該法可靠、靈敏，可作為這些物質(zhì)的常規(guī)檢測方法。中藥的TLC指紋圖譜鑒別色譜指紋圖譜除液相色譜外，還有最常用于中藥鑒別的TLC。TLC指紋圖譜是以原來中國藥典的薄層色譜鑒別為依據(jù)，通過薄層色譜掃描儀建立的。TLC分析成本低，同一TLC板上可以同時分析至少10個樣品，高效TLC色譜斑可以容納更多的樣品，色譜的彩色圖像特征性強，極易在同一TLC板上平行觀察、辨認和比較。此外由于常用的是正相色譜，展開劑由各種有機溶劑以不同配比配置，選擇范圍廣，組成十分靈活，顯色后色譜圖像的質(zhì)量信息更加豐富。例如白芍總苷，它的HPLC指紋圖譜共檢出8個色譜特征峰，而TLC色譜指紋圖譜在香草醛-硫酸試劑顯色的條件下，可見原點部位在內(nèi)的大約15個有色條斑。所以說，TLC指紋圖譜庫是一種很好的有利于推進我國中藥現(xiàn)代化進程的方法。參考文獻：《藥物分析》第六版主編：劉文英人民衛(wèi)生出版社《藥物分析》主編：朱景申中國醫(yī)藥科技出版社《現(xiàn)代藥物分析》編著：王道武張龍化學(xué)工業(yè)出版社《色譜在藥物分析中的應(yīng)用》編著：田頌九胡昌勤馬雙成等化學(xué)工業(yè)出版社《現(xiàn)代色譜法及其在藥物分析中的應(yīng)用》主編：孫毓慶副主編：王延宗科學(xué)出版社《藥物分析實驗方法學(xué)》主編：傅強人民衛(wèi)生出版社《藥物分析檢測技術(shù)》主編：揭晶