宮頸局部微環(huán)境中il-12、il-4、ifn-濃度變化與宮頸高危型人乳頭瘤病毒感染的關(guān)系

宮頸局部微環(huán)境中il-12、il-4、ifn-濃度變化與宮頸高危型人乳頭瘤病毒感染的關(guān)系

癌癥是女性最常見的生殖腫瘤，其發(fā)病率低于乳腺癌。這是世界上第二次女性死亡。自從Zur等［2］在1976年提出HPV可能是宮頸癌發(fā)生的關(guān)鍵因素,HPV與宮頸癌的關(guān)系就成為了腫瘤研究熱點(diǎn)。目前,研究認(rèn)為HPV持續(xù)性感染是宮頸癌發(fā)生最主要的因素［3］,不同的HPV型感染率也不盡相同,其中HPV16感染率最高,HPV18次之,而在中國(guó)特別是廣西地區(qū)HPV58型檢出率明顯增高［4，5］。HR-HPV持續(xù)性感染,造成宮頸微環(huán)境中的免疫炎癥因子,如:IL-12、IL-4、IFN-γ等發(fā)生改變,即輔助性T細(xì)胞(helperTcell,Th)1型細(xì)胞因子向Th2型改變,特別是在宮頸癌患者Thl型反應(yīng)模式處于弱勢(shì)狀態(tài),Th2型反應(yīng)模式處于優(yōu)勢(shì)狀態(tài),Thl/Th2平衡失調(diào),Thl/Th2平衡向Th2方向漂移［6］。可見這些免疫因子在腫瘤免疫應(yīng)答中起到了調(diào)節(jié)作用,并且免疫因子的濃度改變,有助于HR-HPV逃避細(xì)胞免疫,發(fā)生免疫逃避機(jī)制［7］。本研究將采用ELISA對(duì)宮頸灌洗液IL-12、IL-4、IFN-γ進(jìn)行檢測(cè),以探討它們的濃度改變對(duì)宮頸病變發(fā)生發(fā)展的影響以及在不同HPV型中變化程度的改變。1患者年齡及測(cè)定1.1研究對(duì)象收集2012年7月至2013年6月在廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院婦瘤科住院并進(jìn)行了HPVDNA分型檢測(cè)的患者宮頸灌洗液共180例。根據(jù)患者組織病理結(jié)果將宮頸灌洗液分組為:1HPV(-)的非宮頸病變組25例,2HPV(-)的宮頸炎組24例,3HPV16/18/58(+)的實(shí)驗(yàn)組131例。其中試驗(yàn)組包括31例宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(CIN)及100例宮頸癌患者,研究對(duì)象的年齡為23~77歲,平均(47.57±0.65)歲。1.2試劑、儀器1ELISA試劑盒(humanIL-12、IL-4、IFN-γELISAkit)購(gòu)于深圳欣博盛;2酶標(biāo)檢測(cè)儀(型號(hào):MULTISKANMK3,購(gòu)于美國(guó)Thermo公司);3低溫高速離心機(jī)(購(gòu)于美國(guó)Thermo公司)。1.3方法1.3.1標(biāo)本采集1宮頸灌洗液:對(duì)入選患者暴露宮頸口,用5mL滅菌生理鹽水沖洗宮頸口及宮頸表面,于后穹隆吸出灌洗液4mL,混勻后分裝入1.5mL無菌EP管中,3000r/min,4℃離心5min。取上清分裝后-80℃保存?zhèn)溆?標(biāo)本采集均經(jīng)研究對(duì)象同意。1.3.2免疫炎癥因子的檢測(cè)采用ELISA雙抗夾心法檢測(cè)上清中的IL-12、IL-4、IFN-γ因子,按照說明書步驟進(jìn)行操作,在酶標(biāo)儀上讀取各個(gè)孔相對(duì)應(yīng)的OD450值。結(jié)果判讀為:每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去空白孔的OD值;以不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品所對(duì)應(yīng)的OD450值做縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度做橫坐標(biāo),用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,求出相應(yīng)的位置樣本中的細(xì)胞因子的含量。2cin及妊娠合并用藥后各免疫因子的變化2.13組患者宮頸灌洗液中免疫炎癥因子水平的測(cè)定結(jié)果顯示:3組中IL-12、IL-4、IFN-γ濃度均有差異(P﹤0.05),其中在CIN及癌變組中IL-12、IFN-γ的濃度明顯低于非宮頸病變組及宮頸炎組的含量(P﹤0.05),且非宮頸病變組的濃度低于宮頸炎組的濃度(P﹤0.05);IL-4在CIN及宮頸癌組中的濃度明顯高于非宮頸病變組及宮頸炎組,但非宮頸病變組與宮頸炎組中的濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹥0.05)。詳見表1。2.2CIN及癌變組中HPV16/18/58(+)不同型別的患者宮頸灌洗液中細(xì)胞因子水平的測(cè)定各個(gè)免疫因子在試驗(yàn)組中HPV16(+)組、HPV18(+)組、HPV58(+)組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05),其中IL-4在HPV16(+)組中的濃度明顯高于HPV18(+)組、HPV58(+)組(P﹤0.05);IL-12、IFN-γ在HPV16(+)組中的濃度明顯低于HPV18(+)組、HPV58(+)組(P﹤0.05);而各指標(biāo)在HPV18(+)組、HPV58(+)組中濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表2。3不同典型的pv感染的機(jī)制以及相應(yīng)的免疫因子宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤,好發(fā)于子宮頸鱗狀上皮或腺上皮的一種腫瘤［8］。而宮頸癌的病因一直為國(guó)內(nèi)外專家所研究的熱點(diǎn),目前認(rèn)為HPV的持續(xù)感染是引起宮頸癌及CIN的主要原因［9，10］。人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬,是球形DNA病毒,能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。HPV持續(xù)性的感染宮頸組織后,存在免疫逃避的現(xiàn)象即逃避適應(yīng)性免疫應(yīng)答的清除病毒的作用,從而出現(xiàn)Th1向Th2漂移現(xiàn)象［11］,有利于病毒的感染并幸存下來。有研究顯示,隨著宮頸病變程度的增加,這種漂移越明顯［12］。本研究表明,由于試驗(yàn)組中均為HPV16/18/58(+)的CIN及宮頸癌患者的宮頸灌洗液,HPV造成Th1/Th2比例失調(diào),在HPV(-)的非宮頸病變組、宮頸炎組中,IL-12、IFN-γ的濃度明顯高于試驗(yàn)組(P﹤0.05),IL-4的濃度明顯低于試驗(yàn)組(P﹤0.05)。其原因可能是HPV的持續(xù)感染,影響了宮頸局部的免疫調(diào)節(jié)功能,造成免疫功能下降,以IL-12、IFN-γ為代表的Th1型細(xì)胞免疫應(yīng)答向IL-4為代表的Th2型細(xì)胞應(yīng)答漂移,IL-4可以促進(jìn)癌變組織產(chǎn)生IL-10,后者可以降低提成細(xì)胞的表達(dá),維持II型淋巴細(xì)胞在腫瘤組織中的浸潤(rùn),幫助腫瘤細(xì)胞的免疫逃避［14］。CIN及宮頸癌組織中可能通過上述機(jī)制,進(jìn)一步促進(jìn)了腫瘤的進(jìn)展。Lee等［15］研究發(fā)現(xiàn)HPV感染的不同程度病變的宮頸組織,隨著宮頸病變程度的增加,Th1型細(xì)胞因子也隨之出現(xiàn)明顯的下降。在HPV(-)的非病變宮頸組中IL-12、IFN-γ濃度較HPV(-)宮頸炎組中明顯增高(P﹤0.05),IL-4的表達(dá)沒有明顯差異(P>0.05),可能由HPV未感染,宮頸炎組中以Th1細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答為主,IL-12、IFN-γ濃度升高,激活巨噬細(xì)胞殺滅病原體,起到抗腫瘤作用。3.2不同HPV型的宮頸微環(huán)境中免疫因子的變化全球范圍內(nèi),不同型別的HPV的感染率不同。已經(jīng)證實(shí),HPV16是最常見的致病亞型,約半數(shù)以上的宮頸癌是由其引起［16］。在中國(guó)主要以HPV16型為主,居第1位,HPV18居第2位,HPV58和HPV52分別居第3和第4位［17］。本研究顯示:HPV16(+)組中IL-4濃度明顯高于HPV18(+)組、HPV58(+)組(P﹤0.05),而IL-12、IFN-γ明顯低于HPV18(+)組、HPV58(+)組(P﹤0.05)。這3種細(xì)胞因子的濃度變化在HPV18(+)組、HPV58(+)組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。由于HPV16感染的宮頸灌洗液中IL-4濃度明顯升高,IL-12、IFN-γ濃度明顯降低,導(dǎo)致Th1/Th2細(xì)胞比例失衡更加明顯,機(jī)體抗腫瘤免疫能力下降,促進(jìn)宮頸癌變的發(fā)生與發(fā)展［18］,這也許是造成HPV16感染率較其他HPV型感染率高原因之一。以往的試驗(yàn),大部分檢測(cè)的是患者外周血中的免疫因子濃度的變化,本次研究直接檢測(cè)宮頸局部微環(huán)境中的免疫因子的變化,更能直觀了解宮頸局部免疫環(huán)境的改變。并且由于HPV感染與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān),所以對(duì)患者進(jìn)行常規(guī)HPV分型檢測(cè)及宮頸灌洗液中Th1/Th2檢測(cè)是十分必要的。有報(bào)道顯示運(yùn)用重組IL-12腺病毒作為HPV16疫苗的佐劑,可將腫瘤體積縮小,增加疫苗抗腫瘤的時(shí)間［19］。所以我們通過宮頸微環(huán)境中免疫因子濃度差別,對(duì)療效的判斷,預(yù)后的估計(jì),以及在HPV疫苗中使用Th1型細(xì)胞因子為佐劑的研究,值得在今后的試驗(yàn)研究中進(jìn)一步深入了解。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)采用Excel與SPSS16.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,計(jì)量資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(ue003±s)表示,應(yīng)用方差分析、SNK-q檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,P﹤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.1宮頸不同病變微環(huán)境中免疫因子的變化HPV持續(xù)感染導(dǎo)致Th1向Th2漂移會(huì)造成相應(yīng)的細(xì)胞免疫因子濃度發(fā)生改變。IL-12、IFN-γ