集約化養(yǎng)豬廠副豬嗜血桿菌的病原分離、鑒定及控制方法探討

PAGE14集約化養(yǎng)豬廠副豬嗜血桿菌的病原分離、鑒定及控制方法探討摘要養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)一直是我國(guó)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展中的一個(gè)非常重要的組成部分并且持續(xù)非常長(zhǎng)久，所以集約化養(yǎng)豬是在現(xiàn)在實(shí)施可持續(xù)發(fā)展養(yǎng)殖業(yè)的康莊大道，但針對(duì)于集約化養(yǎng)豬當(dāng)中遇到了患有疾病的情況，比如副豬嗜血桿菌疾病成為影響豬廠快速發(fā)展的制約因素。本論文是現(xiàn)針對(duì)某集約化養(yǎng)豬廠中出現(xiàn)的較典型細(xì)菌性疾病——副豬嗜血桿菌病開(kāi)展分離病原的相關(guān)實(shí)驗(yàn)，并鑒定了病原所具有的基本形態(tài)與理化性質(zhì)等，通過(guò)培養(yǎng)和鑒定過(guò)程，并結(jié)合自己的認(rèn)識(shí)和經(jīng)驗(yàn)，參考了大量文獻(xiàn)，設(shè)想了對(duì)這一病毒在具體實(shí)踐生產(chǎn)當(dāng)中的控制方法。關(guān)鍵詞：養(yǎng)豬廠；副豬嗜血桿菌；分離；鑒定

目錄235041前言 459901.1研究背景 4249931.2研究現(xiàn)狀 443301.3研究目的和意義 526402副豬嗜血桿菌基本概況 5135172.1細(xì)菌形態(tài) 5112582.2臨床癥狀 6293033副豬嗜血桿菌病的病原分離 6110383.1培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件的選擇 6277143.2副豬嗜血桿菌的病料采集 7310353.3分離株的純化及初步篩選 8276643.4結(jié)果和討論 8259914分離株及標(biāo)準(zhǔn)株的形態(tài)培養(yǎng)特性及理化特性鑒定 9260324.1形態(tài)培養(yǎng)特性 9143934.2生化特性 9157434.3結(jié)果和討論 1054325集約化養(yǎng)豬廠副豬嗜血桿菌的病原控制方法 11319655.1加強(qiáng)飼養(yǎng)管理 11187355.2免疫接種 11111145.3藥物預(yù)防 1231828結(jié)束語(yǔ) 1231540參考文獻(xiàn) 141前言1.1研究背景副豬嗜血桿菌病在流行病學(xué)上呈現(xiàn)散發(fā)性流行，通常也可以稱為革拉澤氏病或者關(guān)節(jié)炎等，是由副豬嗜血桿菌引發(fā)的一類疾病。由于養(yǎng)豬業(yè)正以一個(gè)相對(duì)較快的速度迅速發(fā)展，豬只的數(shù)量也呈現(xiàn)不斷上升的趨勢(shì)，而且隨著目前規(guī)?；曫B(yǎng)技術(shù)應(yīng)用的推廣，豬只的飼養(yǎng)密度急速增加，根據(jù)流行病學(xué)研究，豬病的流行病也是日趨復(fù)雜化，包括多種流行病的并發(fā)、繼發(fā)還有混合感染等，各種復(fù)雜因素的疊加，使得該病極為流行，盡管各豬場(chǎng)對(duì)豬只免疫力做個(gè)各種提升方案，飼料中增加提高免疫力的營(yíng)養(yǎng)素，抵抗疾病提升免疫的疫苗免疫方案，也不能夠阻斷副豬嗜血桿菌病對(duì)整個(gè)養(yǎng)豬行業(yè)的危害，而且還有逐漸嚴(yán)重的趨勢(shì)。多年以來(lái)，豬副嗜血桿菌病的相關(guān)報(bào)道越來(lái)越多，該病發(fā)作通常導(dǎo)致多發(fā)性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎，不同程度的豬副嗜血桿菌病的病原也在各大大小小的豬場(chǎng)被檢出。尤其規(guī)模大點(diǎn)的、集約化的、具有相當(dāng)數(shù)量的豬場(chǎng)，如果僅僅由于藍(lán)耳病病毒、圓環(huán)病病毒感染而導(dǎo)致了免疫功能低下，更加容易出現(xiàn)豬副嗜血桿菌病。而且副豬嗜血桿菌病同時(shí)也是“豬高熱病”的元兇之一。當(dāng)然，國(guó)際上對(duì)于副豬嗜血桿菌病的認(rèn)定，也劃歸到危害現(xiàn)代整個(gè)養(yǎng)豬行業(yè)的重要傳染病之列。1.2研究現(xiàn)狀通常在健康的豬的上呼吸道等部位能夠分理處HPs，這表明該病菌在鼻腔、扁桃體以及氣管前段等部位均能夠繁殖生存。而豬只并沒(méi)有表現(xiàn)出任何與副豬嗜血桿菌病相關(guān)的臨床癥狀。理論上豬只上呼吸道的具有很強(qiáng)的防衛(wèi)機(jī)制，但有些菌株仍然能夠破壞這種強(qiáng)大的防衛(wèi)機(jī)制，尤其是在敏感豬群里，甚至?xí)?dǎo)致豬出現(xiàn)全身感染的情況。通常來(lái)說(shuō)，該病菌首先會(huì)在鼻竇以及氣管等部位大量繁殖生長(zhǎng)，從而導(dǎo)致黏膜損失，使機(jī)體更容易受到細(xì)菌的侵襲。從呼吸道等部位分離出的HPs菌株，也會(huì)引起上呼吸道的黏膜表面纖毛運(yùn)動(dòng)能力顯著下降，從而引起纖毛上皮損傷，繼而引發(fā)鼻腔膿性鼻炎。鼻腔炎癥病灶處由于纖毛大量丟失，鼻腔黏膜和支氣管黏膜可能會(huì)出現(xiàn)急性腫脹等情況，使黏膜受到更加嚴(yán)重的損傷，從今提高了細(xì)菌浸入的可能性。仔豬在5到6周年齡大小時(shí)，對(duì)于HPs的母源抵抗力會(huì)顯著降低，同時(shí)保育舍內(nèi)的仔豬也是在同一時(shí)期發(fā)生肺部病變，因此不具有母源抵抗力的仔豬抵抗力相對(duì)較差，容易干擾各種疾病，如果與攜帶致病菌的豬接觸便會(huì)出現(xiàn)病癥。許多學(xué)者，以CarlosPijoan為代表的則提出：幼豬身體內(nèi)部的HPs的定居模式將會(huì)直接對(duì)HPs的流行病學(xué)產(chǎn)生影響，而定居模式則一般是由管理方法決定的。副豬嗜血桿菌HPs內(nèi)部共有兩類不同抗原，分別是：莢膜多糖抗磨、菌體結(jié)構(gòu)抗原；前者是由多糖、磷壁酸等組成構(gòu)成的，多糖的結(jié)構(gòu)是莢膜抗原表現(xiàn)出特異性的主要原因；菌體結(jié)構(gòu)抗原又包括兩種，一種是外膜蛋白(outermembraneprotein,OMP)主要成分是一種脂多糖(LPS)。研究發(fā)現(xiàn)LPS有可能是毒力因子最主要的一個(gè)因素，血清當(dāng)中含有的LPS與血栓產(chǎn)生與血管凝集物的擴(kuò)散存在聯(lián)系。LPS產(chǎn)生的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生一些酶類，如超氧化物歧化酶，這種酶可以抵抗巨噬細(xì)胞的吞噬能力。研究人員RuizA等經(jīng)過(guò)深入研究發(fā)現(xiàn)：外膜蛋白OMP會(huì)對(duì)HPs的毒性產(chǎn)生一定的影響，對(duì)健康仔豬進(jìn)行分離獲取的HPs的OMP和對(duì)發(fā)病豬進(jìn)行分離獲取的HPs的OMP存在差異，然而從多發(fā)性漿膜炎以及關(guān)節(jié)炎癥狀的患病豬等進(jìn)行分離獲取的HPs的OMP幾乎是完全一致的。OMP的蛋白質(zhì)主要分為八種不同的類型，八種類型的蛋白質(zhì)大小分別是：92kDa,80kDa,53kDa,60kDa,46kDa,37kDa和15kDa。副豬嗜血桿菌HPs強(qiáng)毒株更多的表現(xiàn)出外膜蛋白的基本特征，莢膜抗原決定簇會(huì)在一定程度上影響保護(hù)力。Miniat等經(jīng)過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：菌株的血清的類型將會(huì)對(duì)抗原性產(chǎn)生影響，而獨(dú)立與免疫保護(hù)之間為正相關(guān)關(guān)系。研究結(jié)果表明：免疫動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生的抗體對(duì)OMP的免疫原性相對(duì)更強(qiáng)，但是并沒(méi)有表現(xiàn)出對(duì)LPS與CPS的免疫原性，另外還發(fā)現(xiàn)OMP也可以表現(xiàn)出較強(qiáng)的免疫原性，接下來(lái)的主要研究問(wèn)題是：OMP是否為主要的免疫原。Charland等人經(jīng)過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)豬血清內(nèi)確實(shí)存在兩種轉(zhuǎn)鐵蛋白受體，通過(guò)進(jìn)一步的試驗(yàn)對(duì)這兩種轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的多肽結(jié)構(gòu)進(jìn)行了深入的分析。TbpA與TbpB等都可以完成轉(zhuǎn)鐵蛋白特異的抓捕工作，并完成鐵轉(zhuǎn)運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞漿的過(guò)程，從而為細(xì)菌生長(zhǎng)供給了所需要的物質(zhì)。Tbp在HPs浸入宿主動(dòng)物并導(dǎo)致其最終發(fā)病中有著十分重要的影響。Lichtensteiger等經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)：細(xì)菌生長(zhǎng)階段，尤其是對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的末期，某種神經(jīng)氨酸酶能夠提供游離的鈣給細(xì)菌，使得細(xì)菌在生長(zhǎng)期末仍能保持強(qiáng)的活力。所以這種酶也與細(xì)菌在宿主細(xì)胞的生長(zhǎng)活性有一定的關(guān)聯(lián)。LichtensteigerCA等分離出了該物質(zhì)，并發(fā)現(xiàn)該酶表現(xiàn)出一定的潛在毒性，而且是在HPs的分泌液中提取的。這一研究結(jié)果將進(jìn)一步推動(dòng)HPs致病因子的研究方向。1.3研究目的和意義隨著養(yǎng)豬行業(yè)的持續(xù)發(fā)展，副豬嗜血桿菌病這種傳染病是非常典型的細(xì)菌性疾病，而且已經(jīng)是全球范圍內(nèi)影響?zhàn)B豬業(yè)并持續(xù)時(shí)間很久的疾病。由于豬容易受到各種應(yīng)激反應(yīng)加之呼吸道綜合征的急發(fā)，使得該疾病大量發(fā)生于各個(gè)豬場(chǎng)，同時(shí)還有加重的趨勢(shì)。我國(guó)養(yǎng)豬水平正以一個(gè)相對(duì)較快的速度迅速發(fā)展，然而較多豬場(chǎng)都出現(xiàn)了多發(fā)性漿膜炎以及關(guān)節(jié)炎等疾病，特別是河北、山東、河南等地區(qū)的豬場(chǎng)當(dāng)中已經(jīng)在豬體內(nèi)分離獲取了HPs，這一菌種使各地養(yǎng)殖場(chǎng)都遭受了十分嚴(yán)重的損失。因此研究和討論討副豬嗜血桿菌病的病原情況，找出解決控制該病菌的方法，對(duì)實(shí)際生產(chǎn)養(yǎng)殖具有非常重要的意義和價(jià)值。2副豬嗜血桿菌基本概況2.1細(xì)菌形態(tài)副豬嗜血桿菌HPs從分類上看屬于非運(yùn)動(dòng)性革蘭氏陰性菌，該菌種能夠表現(xiàn)出不同形態(tài)的菌體，主要有：雙球狀、球桿狀等，基本是由病灶當(dāng)中分離得到的，同時(shí)也可以生成短鏈；在陳舊的培養(yǎng)物中能夠表現(xiàn)出長(zhǎng)桿、絲狀等不同形態(tài)。大多數(shù)病菌不存在芽孢，而主要是莢膜。Morozumi和Nicolet在相關(guān)報(bào)道中指出：分離出的健康豬的上呼吸道中的HPs，也顯示大多數(shù)HPs有莢膜存在，而從其它部位分離出的菌株以無(wú)莢膜的為主。但是，一個(gè)有趣的實(shí)驗(yàn)顯示，通過(guò)活體內(nèi)傳代的方法也可篩選出有莢膜的HPs，而在培養(yǎng)基上經(jīng)數(shù)次培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)有莢膜的細(xì)菌的數(shù)量逐漸減少。2.2臨床癥狀隱性感染豬在豬場(chǎng)中不容易被發(fā)現(xiàn)，由于隱性感染的豬不具有相對(duì)明顯的特征，所以其具有更大的感染威脅，豬場(chǎng)通常表現(xiàn)出的是慢性感染的特征。根據(jù)特殊情況將此病分為兩種臨床癥狀：急性型癥狀：豬只呈現(xiàn)同圈或不同圈的多只豬突然一起發(fā)病，尤其以膘情健康的豬先發(fā)，體溫一般在40.5-420C，精神萎靡，食欲下降甚至廢絕，呼吸則一般為腹式呼吸，關(guān)節(jié)部位等會(huì)出現(xiàn)腫脹的情況，肢體也相對(duì)不夠協(xié)調(diào)，皮膚呈現(xiàn)出發(fā)紅等情況，耳邊緣會(huì)有略微紫色的特征，眼結(jié)膜發(fā)紺，咳嗦一般是在2到3聲，不喜歡經(jīng)常站立，也可能出現(xiàn)急性死亡的情況，經(jīng)常是因?yàn)槟摱狙Y而最終死亡，臨死前一般是以側(cè)臥等姿態(tài)。部分豬是在1到4天內(nèi)死亡，部分豬會(huì)表現(xiàn)出亞急性或者慢性感染特征。如果豬處于孕育狀態(tài)，則會(huì)出現(xiàn)流產(chǎn)的情況，公豬則一般是會(huì)出現(xiàn)跛行的特征。處于感染狀態(tài)的母豬需要通過(guò)注射抗菌素的方法進(jìn)行治療，分娩時(shí)也可能引發(fā)重度疾病。慢性型癥狀：一般為耐過(guò)豬，后期經(jīng)常發(fā)展為慢性，多見(jiàn)保育豬。癥狀可見(jiàn)被毛異常凌亂、出現(xiàn)反復(fù)發(fā)燒咳嗽，使用藥物的時(shí)候就稍微緩和，一旦停藥就會(huì)復(fù)發(fā)，生長(zhǎng)速度也逐漸變慢、耳朵周邊出現(xiàn)發(fā)紫現(xiàn)象，部分豬的四肢或者腹部下端的皮膚表現(xiàn)出紅紫色，眼瞼或者耳翼會(huì)出現(xiàn)浮腫，經(jīng)常保持犬坐的姿態(tài)，關(guān)節(jié)部位經(jīng)常疼痛，四肢不協(xié)調(diào)，肌肉僵硬顫抖，可能會(huì)出現(xiàn)突然死亡的情況。慢性型癥狀的豬生長(zhǎng)不僅緩慢，而且消瘦。免疫力差，特別容易受其他病原微生物等外界病原侵入甚至外界物理應(yīng)激的干擾，比較典型的有多殺性巴氏桿菌等，同時(shí)還可能出現(xiàn)繼發(fā)性疾病等并發(fā)癥。若豬群當(dāng)中出現(xiàn)了類似：支原體肺炎、豬流感以及豬圓環(huán)病毒等其他呼吸道疾病病原體，將會(huì)擴(kuò)大HPs的威脅，特別是保育舍內(nèi)的仔豬將會(huì)在斷奶后表現(xiàn)出多系統(tǒng)衰竭綜合征。部分被感染的豬也可能不會(huì)表現(xiàn)出：咳嗽、發(fā)熱等特征。如果豬群處于高度健康狀態(tài)，HPs的發(fā)病速度將會(huì)大大加快，豬只接觸病原后的幾天內(nèi)就可以有癥狀，非常迅速。在普通的豬群中，對(duì)于哺乳母豬的影響也頗為嚴(yán)重，長(zhǎng)期的慢性跛行會(huì)引起母豬的哺乳行為發(fā)生改變，甚至極端弱化。所以副豬嗜血桿菌病的基本特征有：咳嗽、呼吸苦難以及被毛粗亂等。3副豬嗜血桿菌病的病原分離3.1培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件的選擇(1)配置巧克力瓊脂平板培養(yǎng)基本次試驗(yàn)進(jìn)行以下配方：酵母浸出粉為1.0g胰蛋白胨為0.6g可溶性淀粉為0.25g枸椽酸鈉為0.15g普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂為4.5g添加蒸餾水到體積為100毫升，等到溶解過(guò)程結(jié)束后，將溶液pH調(diào)至7.2～7.4，然后高壓滅菌所配置混合物，120℃，保持15min。在水浴鍋內(nèi)完成冷卻過(guò)程，待溫度降低到80℃，將10毫升的無(wú)菌脫纖綿羊血加入其中，在80℃的水浴鍋當(dāng)中進(jìn)行漩搖，該過(guò)程共需要進(jìn)行10到15分鐘。待溫度下降到50℃時(shí)，在其中添加無(wú)菌輔酶I，使其濃度到15μg/ml，然后添加萬(wàn)古霉素至溶液濃度為50μg/ml。再進(jìn)行4mm左右的平皿的傾倒操作，冷卻完成后在4℃的環(huán)境下儲(chǔ)存。(2)培養(yǎng)的條件保持37℃恒溫培養(yǎng)24h至48h。3.2副豬嗜血桿菌的病料采集(1)臨床病例的挑選在上海市大型養(yǎng)殖場(chǎng)里獲得疑似副豬嗜血桿菌病侵襲的發(fā)病仔豬，再結(jié)合副豬嗜血桿菌病的病變以及流行病學(xué)特征，取其豬場(chǎng)發(fā)病的一百頭仔豬。表面臨床特征表現(xiàn)為體溫上升，被毛雜亂，呼吸困難，皮膚出現(xiàn)紅紫，消瘦，關(guān)節(jié)出現(xiàn)腫大。將其剖解之后，發(fā)現(xiàn)在死豬及病豬均存在著不同程度的胸腹腔積液現(xiàn)象，其肺臟有粘連或者是出血，在關(guān)節(jié)部位有腫脹現(xiàn)象，而在表面上則存在一些纖維素性質(zhì)的滲出物體，在其全身范圍內(nèi)均有淋巴結(jié)的水腫，在關(guān)節(jié)腔中存在著大量的粘液。在該養(yǎng)豬場(chǎng)中，出現(xiàn)該類感染的豬主要是處于保育期的仔豬或者是處在斷奶期附近的豬，而在種豬以及育肥豬中則不多見(jiàn)，此外，還有少量的母豬存在流產(chǎn)現(xiàn)象。在當(dāng)前的工作中，所選的實(shí)驗(yàn)對(duì)象為2頭存在較為明顯的疑似癥狀而且尚未進(jìn)行抗生素注射的病死仔豬。在其上進(jìn)行分離副豬嗜血桿菌試驗(yàn)。(2)病料的采集解剖過(guò)程是在無(wú)菌的環(huán)境下開(kāi)展，將其腹腔及胸腔暴露出來(lái)，第一步是吸出積液，通過(guò)棉簽來(lái)進(jìn)行腹膜和胸膜上的有關(guān)粘附物的拭取，進(jìn)而將一些內(nèi)臟（例如脾臟、淋巴結(jié)、肺臟以及扁桃體等）取出來(lái)。由于在體外的條件下副豬嗜血桿菌有相對(duì)較斷的存活時(shí)間，所以當(dāng)已經(jīng)采集了病料之后，需盡快地進(jìn)行分離以開(kāi)展培養(yǎng)。需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行內(nèi)臟器官的實(shí)驗(yàn)室操作，需先灼燒手術(shù)刀再進(jìn)行使用，其剖面要被適當(dāng)?shù)貭C烙，得到深層的組織以開(kāi)展相關(guān)的涂板培養(yǎng)工作。3.3分離株的純化及初步篩選菌落的挑選：首先進(jìn)行病料的分離以及培養(yǎng)，然后進(jìn)行涂板，再于37攝氏度的條件下進(jìn)行24小時(shí)到36小時(shí)的培養(yǎng)，通過(guò)無(wú)菌環(huán)來(lái)進(jìn)行菌落的合理選?。吨闋?、透明或者是灰白色）。菌落的培養(yǎng)：在巧克力瓊脂平板上進(jìn)行48小時(shí)的菌落培養(yǎng)，進(jìn)而進(jìn)行細(xì)菌的涂片，再開(kāi)展革蘭氏染色鏡檢工作。若結(jié)果表明為多形性小桿菌或者是陰性小桿狀，則有必要再開(kāi)展1次巧克力瓊脂亞克隆的相關(guān)菌落培養(yǎng)工作，此外還需進(jìn)行普通以及鮮血瓊脂平板的接種。如果巧克力瓊脂平板已經(jīng)有較好的生長(zhǎng)形態(tài)，而后面兩類菌落卻未生成，就需保存菌株以供后續(xù)的鑒定所用。該菌株將被確定為JZ株（初選分離株）。3.4結(jié)果和討論1.結(jié)果通過(guò)化驗(yàn)分析，掌握該養(yǎng)殖場(chǎng)中的疑似副豬嗜血桿菌病的主要情況，并將病死仔豬（共計(jì)二頭）選出出來(lái)以分離病菌，從而將JZ株分離株病原初選出來(lái)。2.討論①由于嗜血桿菌的一個(gè)重要特征是其較為嬌嫩，所以比標(biāo)本里的其它菌落需要更高的生長(zhǎng)條件。美國(guó)學(xué)者通過(guò)回歸分析的方法分析發(fā)現(xiàn)，與報(bào)道的結(jié)果相比，實(shí)際的發(fā)病率顯著更高（高于報(bào)道值的10倍以上），主要原因是無(wú)法對(duì)采集標(biāo)本里有無(wú)該類病菌進(jìn)行科學(xué)的確認(rèn)。②接種培養(yǎng)過(guò)程是在選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行（之前已經(jīng)添加了抗生素），通過(guò)特殊的稀釋手段來(lái)提升分離該類桿菌的成功率。如果培養(yǎng)采用了蠟罐或者是5%的二氧化碳，則該類桿菌所具有的生長(zhǎng)速率并不會(huì)相應(yīng)地提高，但是如果采用的是胰蛋白胨血液瓊脂基質(zhì)或者是已經(jīng)脫纖維蛋白的血，則會(huì)有較好的效果。③在出現(xiàn)疾病時(shí)，養(yǎng)殖人員通常會(huì)選擇各類消炎藥來(lái)進(jìn)行治療，然而卻未取得良好的效果，究其原因，是由于該類桿菌已經(jīng)具有了一定的耐藥性，此外各類病原發(fā)生了混合性的感染，而且也存在著不同程度的毒素作用。使用抗生素也將顯著地影響該類嗜血桿菌分離的過(guò)程，由此不能確認(rèn)是否在標(biāo)本里存在著該類細(xì)菌。④對(duì)于豬關(guān)節(jié)炎以及多發(fā)性漿膜炎來(lái)說(shuō)，副豬嗜血桿菌是其原發(fā)性的病原，在健康畜群與SPF動(dòng)物或者是和其他各類病原發(fā)生了混合性的感染時(shí)，才會(huì)引發(fā)死亡率及發(fā)病率較高的全身性的相關(guān)疾病，這對(duì)于生豬養(yǎng)殖的各階段都會(huì)產(chǎn)生影響。當(dāng)該類桿菌結(jié)合了支原體之后，在患PRRS的豬中，其肺臟有高達(dá)51.2%的檢出率（具體見(jiàn)Kobayashi；1996）；對(duì)于偽狂犬病病毒以及4型該類桿菌而言，同樣存在著較為顯著的協(xié)同關(guān)系（具體見(jiàn)Narita，1994）。對(duì)于該類該類桿菌病的實(shí)驗(yàn)病例來(lái)說(shuō)，同樣存在著混合性的感染情況，這包括豬肺炎支原體、HPV、PRRSV以及豬圓環(huán)病毒等。它將會(huì)對(duì)在有關(guān)的疾病中副豬嗜血桿菌所起的作用產(chǎn)生一定程度的影響。⑤除了要解剖已受損傷及臨床癥狀嚴(yán)重的豬之外，也需于采用抗生素前開(kāi)展剖解。以滲透出來(lái)的心臟血液、關(guān)節(jié)液以及漿膜面物質(zhì)來(lái)分離及培養(yǎng)細(xì)菌，如果損傷現(xiàn)象較為輕微，同樣需實(shí)施上述處理。4分離株及標(biāo)準(zhǔn)株的形態(tài)培養(yǎng)特性及理化特性鑒定4.1形態(tài)培養(yǎng)特性(1)細(xì)菌的形態(tài)為多形性的革蘭氏陰性菌，為絲狀、細(xì)長(zhǎng)且獨(dú)立小球狀的桿菌。(2)培養(yǎng)特性在37攝氏度環(huán)境下，于已經(jīng)進(jìn)行了改良的巧克力瓊脂平板上，開(kāi)展24小時(shí)到48小時(shí)的副嗜血桿菌培養(yǎng)，可肉眼來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，發(fā)現(xiàn)其表面形態(tài)為隆起狀，具有露珠狀，有較為整齊的邊緣，半透明狀，呈灰色。4.2生化特性(1)V因子需要試驗(yàn)在細(xì)菌的呼吸過(guò)程中，V因子起到了非常重要的遞氫作用，它為輔酶Ⅰ，也就是NADP+以及NAD+的一類脫氫輔酶。將副豬嗜血桿菌的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)株菌落以及被檢分離株挑取出來(lái)，在兔鮮血瓊脂平板上近些年接種，其培養(yǎng)過(guò)程是在2%胨瓊脂平板上進(jìn)行，然后通過(guò)金黃色葡萄球菌來(lái)開(kāi)展垂直劃線樣或者是點(diǎn)種，在37攝氏度的溫度條件下進(jìn)行48小時(shí)的培養(yǎng)，再觀察其附近菌落的具體生長(zhǎng)形態(tài)，和該菌落越接近，則產(chǎn)生的菌落（呈半透明狀）將有越大的尺寸，反之則越小，有時(shí)候?qū)o(wú)法觀察到菌落生長(zhǎng)的現(xiàn)象，也就是所謂的“衛(wèi)星現(xiàn)象”。(2)X因子需要試驗(yàn)該因子含有鐵卟啉，為存在于血紅蛋白之中的一類衍生物及血紅素，如果置入121攝氏度的溫度條件下保持30分鐘，也將不受到損壞，對(duì)于過(guò)氧化物酶、細(xì)胞色素氧化酶、觸酶以及細(xì)菌合成細(xì)胞色素等而言，它作為輔基。將副豬嗜血桿菌標(biāo)準(zhǔn)株菌落以及被檢分離株都挑選出來(lái)，并且在2%胨瓊脂平板上進(jìn)行接種。若發(fā)現(xiàn)僅是含有X+V因子的相關(guān)紙片附近區(qū)域存在著菌落生長(zhǎng)的現(xiàn)象，那么就意味著這一菌株對(duì)X以及V等兩類因子均有依賴性。若僅是在含有X+V以及V因子的相關(guān)紙片附近區(qū)域存在著菌落生成的現(xiàn)象，那么就意味著這個(gè)菌株進(jìn)對(duì)V因子存在著依賴性。(3)生化實(shí)驗(yàn)主要包括過(guò)氧化氫酶、甘露糖發(fā)酵、蜜三糖發(fā)酵、樹(shù)膠醛糖發(fā)酵、乳糖發(fā)酵、葡萄糖發(fā)酵以及脲酶等，具體所用的反應(yīng)試劑以及培養(yǎng)基如下所示。TM/SNplatesugar配方BiosatePeptone（BBL）10mgNacl10mg酚紅0.04mg高級(jí)瓊脂15mg蒸餾水900ml首先將其進(jìn)行適當(dāng)?shù)幕旌?，然后進(jìn)行加熱以促進(jìn)溶解，保持到室溫之后，再對(duì)PH值進(jìn)行調(diào)節(jié)，使之達(dá)到7.5，再進(jìn)行相應(yīng)的分裝，置入密封狀態(tài)的瓶中，在121攝氏度的溫度條件下進(jìn)行15的保留。對(duì)于微量或是大量的實(shí)驗(yàn)工作而言，該法均有良好的適用性。具體見(jiàn)下述內(nèi)容（注：在每90毫升里添加下述物品）：20%的葡萄糖10ml小牛的血清1ml1%NADH0.25mlO-A混合物5ml4.3結(jié)果和討論(1)細(xì)菌形態(tài)JZ株與標(biāo)準(zhǔn)株NR4以及SW124都為多形性小桿菌或者革蘭氏陰性小桿狀，相似度較高，與副豬嗜血桿菌的基本形態(tài)一致。(2)分離株生化特性鑒別結(jié)果如下（見(jiàn)表2-1）表2-1分離株生化特性鑒別的結(jié)果測(cè)定項(xiàng)目/分離株JZ溶血現(xiàn)象-衛(wèi)星現(xiàn)象+需X因子-尿酶實(shí)驗(yàn)-葡萄糖-樹(shù)膠醛糖-乳糖-甘露糖-過(guò)氧化氫酶+需氧+CO2增菌培養(yǎng)-菌株污染-(3)討論①酵母菌和產(chǎn)色素的細(xì)菌(比如金黃色葡萄球菌)在發(fā)育的過(guò)程中可以生成V因子，并在固定場(chǎng)合不斷擴(kuò)散，可以實(shí)現(xiàn)V因子附著性細(xì)菌的生長(zhǎng)需求，因此會(huì)造成衛(wèi)星的情況。衛(wèi)星是判斷V因子是否具有一定的依賴性的重要依據(jù)。②X因子對(duì)于培育副豬嗜血桿菌的作用不大，但是嗜血桿菌屬對(duì)于X因子的生長(zhǎng)作用很大。如果僅含X+V、V因子的紙片附近長(zhǎng)有菌落，那么就說(shuō)明該菌株對(duì)V因子的依賴性較強(qiáng)，而對(duì)X因子的依賴性較差。此次實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)V因子依賴性的條件下，X因子依賴陽(yáng)性的能夠鑒別得出并不是副豬嗜血桿菌。③因?yàn)榕囵B(yǎng)副豬嗜血桿菌的條件要求極高，挑選特殊的基質(zhì)進(jìn)行培育或進(jìn)一步對(duì)生化反應(yīng)管進(jìn)行完善在生化實(shí)驗(yàn)過(guò)程中至關(guān)重要。加入一些有效成份有利于提高副豬嗜血桿菌的成功機(jī)率(血清、NAD等)，但是一定要保證該成份不能對(duì)生化試劑的酸堿值等特性產(chǎn)生作用。5集約化養(yǎng)豬廠副豬嗜血桿菌的病原控制方法真正在養(yǎng)豬生產(chǎn)實(shí)踐中，傳染病不能夠被消滅，但是能夠有效控制副豬嗜血桿菌病對(duì)于豬場(chǎng)來(lái)說(shuō)也是非常重要的。下面詳細(xì)從幾個(gè)方面介紹控制副豬嗜血桿菌病的方案集約化養(yǎng)豬場(chǎng)的實(shí)施。比如提高飼養(yǎng)水平和質(zhì)量、建立健全免疫制度以及預(yù)防疫病等。5.1加強(qiáng)飼養(yǎng)管理改良飼養(yǎng)環(huán)境，提升飼養(yǎng)水平。第一，不允許將不同生產(chǎn)階段的豬放在一起養(yǎng)殖，并且減少豬群經(jīng)常流動(dòng)；其次營(yíng)養(yǎng)上要確保飼料良好，配方科學(xué)，營(yíng)養(yǎng)充足，不宜過(guò)剩和缺乏；再次，豬舍環(huán)境需要重視，既要做好豬舍通風(fēng)也要做好保溫措施；最后，值得注意的是引進(jìn)和混群飼養(yǎng)需要重視的事項(xiàng)，隔離之后才能引進(jìn)種豬，使用敏感藥物、接種預(yù)防免疫接種才能進(jìn)行混養(yǎng)。嚴(yán)格執(zhí)行豬場(chǎng)衛(wèi)生條例，建立健全應(yīng)急制度。一旦豬群發(fā)生應(yīng)激時(shí)，可預(yù)先用預(yù)防量的阿莫西林等一些抗生素與飼料混合，這樣有利于起到的預(yù)防作用。5.2免疫接種按時(shí)接種疫苗有利于有效預(yù)防疾病。自家的疫苗和商品疫苗都能夠很好地防控豬群感染副豬嗜血桿菌。多價(jià)疫苗是防控副豬嗜血桿菌病的不二之選。依據(jù)Takahashi等臨床和實(shí)驗(yàn)室研究，副豬嗜血桿菌血清2型和5型制備的單價(jià)疫苗預(yù)防力度總體不如二價(jià)疫苗，二價(jià)疫苗對(duì)臨時(shí)發(fā)作的副豬嗜血桿菌病具有較強(qiáng)的預(yù)防作用，二次免疫后的70多天都是安全期，這更加有力地說(shuō)明了不同的血清型交叉會(huì)減弱保護(hù)強(qiáng)度，相比之下，多價(jià)苗作用更加顯著。所以，研制多價(jià)苗將是副豬嗜血桿菌疫苗未來(lái)一段時(shí)間的關(guān)鍵任務(wù)。新型改進(jìn)疫苗也有一定的預(yù)防交叉感染的能力。AmbleEvans等報(bào)道中根據(jù)丹麥、SPF的一系列實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)研制出改進(jìn)型抗Glasser氏病疫苗:Porcilis(r)Glasser。其已在2004年第四季度開(kāi)始推廣使用，推廣范圍是歐洲境內(nèi)，直到2005年初，該疫苗的佐劑是DiluvacFort、血清5型菌株，而且其能夠提供抗血清1,5,12,13和15型的交叉保護(hù)力。滅活苗的使用是我國(guó)比較常用的方法之一。鄭明球等建議用副豬嗜血桿菌滅活苗在首次生產(chǎn)的母豬產(chǎn)崽前第四十天和二十天分別進(jìn)行一次，非首次生產(chǎn)的母豬在產(chǎn)前一個(gè)月左右免疫一次，母豬體內(nèi)的抗體可以較好的保護(hù)不超過(guò)二十八天哺乳仔豬。仔豬在落地后七至十日、三周齡時(shí)分別進(jìn)行免疫一次，或者斷奶時(shí)進(jìn)行一次免疫。自家滅活苗在我國(guó)養(yǎng)豬場(chǎng)的應(yīng)用成果也不少。洪志良等報(bào)道環(huán)境條件較為優(yōu)質(zhì)的養(yǎng)豬場(chǎng)，自家的疫苗是由本場(chǎng)未經(jīng)抗生素治療癥狀顯著的發(fā)病豬組織分離病菌制成，由于自家的苗從自身的病豬采出，針對(duì)性較好，血清型一致度較高，有利于保護(hù)，是當(dāng)下一種較為有效的預(yù)防方法，可以達(dá)到極好的防制效果。由生產(chǎn)實(shí)踐可知，免疫失敗的情況也會(huì)小概率出現(xiàn)，這可能與病程中出現(xiàn)的菌株血清型不一致，所以導(dǎo)致交叉減弱保護(hù)強(qiáng)度。副豬嗜血桿菌的化學(xué)特性以及特點(diǎn)過(guò)于突出，交叉保護(hù)力較小。因此，在本質(zhì)上對(duì)流行性最高的血清型進(jìn)行分析了解有利于切實(shí)控制病情。除此之外，其他疫病的免疫接種也工作非常關(guān)鍵。副豬嗜血桿菌病與其他疾病的繼發(fā)或混合感染，也會(huì)將豬群的疾病癥狀加重，機(jī)體的免疫力會(huì)更差。豬場(chǎng)要依據(jù)科學(xué)的免疫流程要重視預(yù)防豬喘氣病等一系列豬群容易感染的疫病，使豬群長(zhǎng)時(shí)間具有良好的免疫力，能夠切實(shí)預(yù)防豬場(chǎng)的豬副豬嗜血桿菌病發(fā)生繼發(fā)或混合感染的情況出現(xiàn)。5.3藥物預(yù)防培養(yǎng)并藥敏副豬嗜血桿菌的試驗(yàn)表明，其對(duì)于阿米卡星、頭孢類等諸多藥物的反應(yīng)較激烈。種豬在隔離過(guò)程中、配種前二十天分別要進(jìn)行預(yù)防。每噸飼糧與200克、300克的阿莫西林和克氟苯尼考摻雜飼喂兩周。將要生產(chǎn)的母豬每噸飼糧摻入1000克利高霉素，200克阿莫西林，分娩前喂7天，分娩后喂7天。哺乳仔豬舊齡、7日齡、21日齡各肌肉分別注射一次“速解靈”(頭抱唾吠500毫克/毫升)，舊齡、滿七日每頭0.2毫