DB2308T 185-2023佳木斯水稻品種（系）稻瘟病抗性離體葉片鑒定技術(shù)規(guī)范

ICS65.020.20DB23佳木斯市市場監(jiān)督管理局發(fā)布ⅠDB2308/T185—2023本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請注意本文件某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由黑龍江省佳木斯市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。本文件由黑龍江省佳木斯市市場監(jiān)督管理局批準發(fā)布。本文件起草單位：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學院水稻研究所。本文件主要起草人：陸文靜、王桂玲、周通、周雪松、韓笑。本文件2023年首次發(fā)布。1DB2308/T185—2023佳木斯水稻品種（系）稻瘟病抗性離體葉片鑒定技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了佳木斯水稻品種（系）稻瘟病抗性離體葉片接種鑒定中接種體制備、抗性鑒定和抗性評價等技術(shù)要求。本文件適用于佳木斯常規(guī)水稻品種（系）稻瘟病抗性的離體葉片鑒定和評價。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T15790-2009稻瘟病測報調(diào)查規(guī)范GB/T19557.7-2002植物品種特異性（可區(qū)別性）、一致性和穩(wěn)定性測試指南水稻3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標準。3.1水稻稻瘟病指由稻瘟病菌引起的水稻病害。依據(jù)病害發(fā)生的時期和部位，可分為苗瘟、葉瘟、穗頸瘟、枝梗瘟、粒瘟等。3.2抗病性植物與病原物在長期進化和相互作用的復(fù)雜過程中，逐漸形成和表現(xiàn)出各種抵御有害病原物的特征和能力。3.2接種物人工制備能夠侵染寄主并引起病害的微生物病原體。3.3接種體制備制備人工接種用的稻瘟病菌單孢菌液。2DB2308/T185—20233.4人工接種采取人工方法將病菌直接或間接接種到寄主植株組織上使其發(fā)病，如：噴霧法、涂抹法、注射法、針刺法等。3.5抗性評價根據(jù)采用的技術(shù)標準判別寄主植物對特定病害反應(yīng)程度和抵抗水平的定性描述。4病原物的采集、分離和保存采集佳木斯水稻種植地區(qū)具有典型病斑的發(fā)病組織。剪取含有單個典型病斑的水稻組織，75%酒精和無菌水漂洗后用滅菌濾紙吸干水分，用無菌凡士林將發(fā)病組織懸掛無菌培養(yǎng)皿中，28℃光照培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)24h。發(fā)病組織產(chǎn)孢后徒手輕輕拍打，使稻瘟病菌孢子落至無菌水瓊脂平板上，顯微鏡下做好單孢標記，無菌環(huán)境下轉(zhuǎn)移至新的水瓊脂板上，28℃光照培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)12h～24h，顯微鏡下觀察孢子萌發(fā)情況確認分離出稻瘟菌單孢。剔除混雜多孢平板，將單孢平板置于28℃光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3d～5d后可長出稻瘟菌單孢菌落。將分離得到的無污染單孢接種在無菌的水稻稻節(jié)上，放置28℃光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15h，待組織上布滿菌絲后做好標記放入干燥器中密封保存。5水稻的種植與管理根據(jù)需要稱取適量的供試（待測）水稻種子，按常規(guī)方法種植水稻幼苗，待水稻生長至3～7葉齡時用于接種。6接種體制備將保存稻瘟病菌單孢的稻節(jié)置于無菌培養(yǎng)基中央部位，28℃光照培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)5d～7d，培養(yǎng)基表面即可生成大量分生孢子。在產(chǎn)孢培養(yǎng)皿上加入滅菌水，用玻璃棒將菌落表面形成的分生孢子洗下，移液槍轉(zhuǎn)移菌液至5mLEP管中，充分混勻后用血球計數(shù)板測定孢子濃度，重復(fù)測定3次，取平均值。接種用的分生孢子懸浮液濃度調(diào)至105個孢子/mL，保證接種菌液量不少于2mL，分生孢子懸浮液需現(xiàn)配現(xiàn)用。7離體葉片接種剪取5cm充分展開心葉的中下部葉段，用滅菌針在葉正面、垂直于主葉脈處制造3個均勻分布的微創(chuàng)傷點，每個點長約2mm，注意不要劃穿葉片。將濾紙裁剪成直徑約8cm的無菌圓片至于無菌培養(yǎng)皿中，充分用無菌水浸濕。將2根滅菌牙簽放置濾紙片上搭放上水稻葉片，牙簽間距2cm～3cm。接種前，先在劃傷葉段上均勻噴灑滅菌水。用移液器在劃傷處點接5μL～10μL孢子懸液，每個葉片3個接種點，3次獨立重復(fù)。接種水稻葉段的培養(yǎng)皿先放置于相對濕度100%、26℃下，黑暗培養(yǎng)24h~3DB2308/T185—202336h；再將培養(yǎng)皿擺放在26℃、光照條件下保濕培養(yǎng)，每天噴水1次～2次，觀察葉片發(fā)病情況。根據(jù)發(fā)病情況，在接種后4d～7d拍照、記錄。8抗病性評價8.1抗感性判斷抗性病斑僅局限于葉片劃傷處，呈褐色點狀，病斑中無分生孢子形成，即為“+”。感病病斑呈梭形，中央灰色部分生有菌絲和分生孢子，外圍可能有褐色壞死，最外層是淡黃色、形狀不規(guī)則，邊緣呈現(xiàn)出暗綠色記為“-”。8.2抗譜計算a：形成抗病病斑的菌株數(shù)，單位為個；b：總接種菌株數(shù)，單位為個；C：抗譜，單位為百分率（%）。8.3抗瘟性評價標準水稻稻瘟病抗性的評價標準抗性評價評價標準（C）%抗病Resistant