替米沙坦對(duì)ppar-的干預(yù)作用

替米沙坦對(duì)ppar-的干預(yù)作用

活性物質(zhì)受體（ppar）是激活后調(diào)節(jié)靶基因突變的核受體。可將各種體內(nèi)穩(wěn)態(tài)變化、藥物、營(yíng)養(yǎng)、炎性刺激等轉(zhuǎn)變?yōu)榧?xì)胞內(nèi)信號(hào),在調(diào)節(jié)能量代謝,細(xì)胞分化、增殖、凋亡、炎性反應(yīng)、內(nèi)源性活性物質(zhì)合成和分泌中發(fā)揮重要信使作用。PPAR-γ是其中一種亞型,除表達(dá)于脂肪、心臟和骨骼肌外,近年來研究發(fā)現(xiàn)其可在單核/巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌中表達(dá),影響血管生物功能和動(dòng)脈粥樣硬化形成等,是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。最近的研究證實(shí),替米沙坦除了是血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ARB)外,還是過氧化體增殖劑活化受體γ(PPAR-γ)激動(dòng)劑。替米沙坦是唯一在常規(guī)治療劑量下即具有PPAR-γ作用的藥物,而其他ARB雖然也有PPAR-γ激動(dòng)劑的作用,但均需要在超過治療劑量許多倍的情況下才能顯示出這一作用。那么替米沙坦這一獨(dú)有的特點(diǎn)是否具有更強(qiáng)的抗動(dòng)脈粥樣硬化形成的作用,以及應(yīng)用前景如何,國內(nèi)報(bào)道不多。他本實(shí)驗(yàn)旨在通過檢測(cè)兔動(dòng)脈粥樣硬化模型中PPAR-γ的表達(dá)及替米沙坦的干預(yù)作用,以探討影響PPAR-γ表達(dá)的因素及替米沙坦對(duì)其的影響。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼料雄性日本大耳白兔32只,體重2.0-2.5kg,購自吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;高脂及常規(guī)飼料由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心配制,高脂飼料成分:膽固醇1%,蛋黃粉7.5%,牛油8%,常規(guī)飼料83.5%;PPAR-γ試劑盒購自上海天呈公司;氯沙坦購自杭州默沙東制藥有限公司。替米沙坦(商品名:美卡素)購自德國勃林格殷格翰大藥廠。1.2方法1.2.1動(dòng)物飼養(yǎng)及分組32只兔隨機(jī)分成高脂飲食組(A組)、高脂飲食+替米沙坦組(B組)、高脂飲食+氯沙坦(C組)和正常飲食組(D組)四組,每組8只,平均體重2.2kg,統(tǒng)一在白求恩醫(yī)學(xué)部動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心喂養(yǎng)16周。1.2.2高脂飼料混養(yǎng)各組飼料均按每日每只200g,分3次喂養(yǎng)。高脂飲食+替米沙坦組的替米沙坦按每日每只10mg.kg-1與高脂飼料混和喂養(yǎng);高脂飲食+氯沙坦組的氯沙坦按每日每只10mg.kg-1與高脂飼料混和喂養(yǎng)。全部動(dòng)物于飼養(yǎng)16周末耳靜脈采血,離心分離血漿。全部動(dòng)物于飼養(yǎng)16周后通過心臟空氣栓塞方法處死。1.2.3免疫組化法檢測(cè)主動(dòng)脈中抗菌藥物的表達(dá)體重:16周末測(cè)各組體重。組織形態(tài)學(xué)觀察:16周末空氣栓塞處死動(dòng)物,剖開胸腔,剝離主動(dòng)脈至胸主動(dòng)脈,去除外膜的脂肪組織,生理鹽水沖洗后縱行剪開,鋪平,攝像進(jìn)行大體觀察。用10%甲醛溶液固定36h,梯度乙醇脫水,石蠟包埋,在切片機(jī)上橫斷面制成5μm厚的連續(xù)切片,H-E染色。H-E染色片上隨機(jī)選取10個(gè)視野進(jìn)行光鏡下觀察。PPAR-γ檢測(cè):采用S-P免疫組化方法,取主動(dòng)脈大體標(biāo)本,固定后經(jīng)無水酒精常規(guī)逐級(jí)脫水,二甲苯透明浸蠟,常規(guī)石蠟包埋,以5μm厚度切片(LEICARM2135輪轉(zhuǎn)切片機(jī))。蘇木精-伊紅染色(HE)。石蠟切片脫蠟和水化后,PBS沖洗3次;滴加過氧化酶阻斷溶液,室溫孵育10min,PBS沖洗;滴加一抗,4℃過夜,PBS沖洗;滴加生物素標(biāo)記的二抗,室溫孵育10min,PBS沖洗;滴加鏈霉素抗生物素-過氧化物酶溶液,室溫孵育10min,PBS沖洗;DAB顯色。血脂檢測(cè):采用美國庫爾特貝特曼公司生產(chǎn)的LX-20全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)。1.2.4統(tǒng)計(jì)方法采用t檢驗(yàn),P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1動(dòng)脈配方硬化病變A組主動(dòng)脈內(nèi)膜內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、變性,部分缺失,內(nèi)膜明顯增厚,內(nèi)含大量泡沫細(xì)胞,內(nèi)彈力膜斷裂、模糊,中膜增厚伴平滑肌細(xì)胞增生,胞體變大,排列紊亂,內(nèi)膜及中膜均可見巨噬細(xì)胞和細(xì)胞外脂質(zhì)沉積(圖A)。B組動(dòng)脈粥樣硬化病變較膽固醇飼料組明顯減輕,內(nèi)膜和內(nèi)皮細(xì)胞基本完整,內(nèi)膜厚度和內(nèi)膜/中膜厚度較膽固醇飼料組明顯減少,泡沫細(xì)胞很少,中膜平滑肌增生不明顯(圖B)。C組動(dòng)脈粥樣硬化病變較膽固醇飼料組輕,內(nèi)膜和內(nèi)皮細(xì)胞部分不完整,內(nèi)膜厚度和內(nèi)膜/中膜厚度較膽固醇飼料組明顯減少,但較B組增加,有較多的泡沫細(xì)胞和中膜平滑肌增生(圖C)。D組主動(dòng)脈內(nèi)膜內(nèi)皮細(xì)胞完整,排列整齊,內(nèi)彈力膜清晰完好,中膜平滑肌細(xì)胞體積、排列正常,內(nèi)膜及中膜均未見泡沫細(xì)胞及脂質(zhì)沉積(圖D)。(H-E染色,×400)2.2低密度膽固醇ldl及tg水平總膽固醇(TC)在A、B、C、D4組的表達(dá)分別為(23.51±10.58)mmol/L,(15.74±6.15)mmol/L,(22.72±9.56)mmol/L,(1.36±0.33)mmol/L,B與A、C、D差異顯著(P<0.01);低密度脂蛋白(LDL)在A、B、C、D四組的表達(dá)分別為(21.39±10.00)mmol/L,(16.32±7.13)mmol/L,(22.79±8.83)mmol/L,(0.72±0.35)mmol/L,B組和A、C、D組差異顯著(P<0.01);C組和A組差異無顯著性(P>0.05);甘油三酯(TG)水平B組和A、C、D差異顯著(P<0.01);C組和A組差異無顯著性(P>0.05)。2.3各組c組5.840.320.330.330.330.330.330.333.323.323.320.330.330.330.335.320.330.330.335.320.330.334.320.335.320.334.320.334.320.334.320.334.323.323.324.324.323.323.323.323.323.323.323.323.323.323.323.323.323.323.323.323.323.323.323.323.323.324.323.323.323.324.323.323.324.323.324.323.323.324.323.323.324.323.323.324.323.323.324.323.324.323.323.324.323.323.324.323.323.324.325.325.325.324.325.325.325.325.325.325.324.325.325.325.325.325.325.325.325.325.325.325.325.325.325.325.325.325.325.325.325.325.325.325.325.325.32體重分別為A組(5.78±0.45)kg,B組(4.98±0.42)kg,C(5.49±0.37)kg,D組(4.73±0.35)kg。B、D組分別與A、B組有顯著差異,(P<0.01)。2.4各組大鼠血清中b組5.651.354.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.324.4.4.4.4.4的方法PPAR-γ的表達(dá)水平分別為A組(11.23±1.21)%,B組(10.83±1.35)%,C(7.65±1.54)%,D組(7.79±1.47)%。C、D組分別與A、B組有顯著差異(P<0.01)。3替米沙坦的代謝調(diào)節(jié)作用多數(shù)的報(bào)道認(rèn)為PPAR-γ的激活可通過改善胰島素抵抗,改善糖、脂代謝紊亂發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化作用;還可通過對(duì)巨噬細(xì)胞影響,通過抑制炎癥反應(yīng),抑制平滑肌細(xì)胞增殖、遷移,通過對(duì)血管內(nèi)皮功能的影響、調(diào)節(jié)血管張力等,阻止動(dòng)脈粥樣硬化的形成。本實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈粥樣硬化的模型制作采用了高脂飲食作為唯一干預(yù)因素,結(jié)果顯示,模型組有明確的動(dòng)脈硬化組織學(xué)改變,且嚴(yán)重程度與血漿TC水平與LDL水平增高平行,證明了高脂血癥是動(dòng)脈粥樣硬化的重要易患因素。分別給予替米沙坦和氯沙坦干預(yù)后,主動(dòng)脈內(nèi)膜的動(dòng)脈硬化明顯減輕,證實(shí)ARB類藥物能夠減輕動(dòng)脈粥樣硬化。但替米沙坦組動(dòng)脈硬化程度較氯沙坦組較明顯減輕,似乎可以歸因于替米沙坦組血脂和體重明顯低于氯沙坦組,而PPAR-γ明顯高于氯沙坦組。可能說明替米沙坦獨(dú)特的代謝調(diào)節(jié)作用對(duì)抑制動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)揮了作用。替米沙坦(美卡素)在結(jié)構(gòu)上與氯沙坦不同,其親脂性更強(qiáng),易進(jìn)入組織。因此替米沙坦在體內(nèi)分布的容量在所有ARB內(nèi)是最高的。替米沙坦除了是ARB外,還是過氧化體增殖劑活化受體γ(PPARγ)激動(dòng)劑。本實(shí)驗(yàn)觀察到A組PPAR-γ表達(dá)含量顯著高于C組,說明在動(dòng)脈粥樣硬化形成過程中某種物質(zhì)為PPAR-γ激活劑,使其表達(dá)量上升。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,氧化的低密度脂蛋白(ox-LDL)可使PPAR-γ的表達(dá)上調(diào),是動(dòng)脈粥樣硬化形成過程中PPAR-γ的內(nèi)源性激活劑。本實(shí)驗(yàn)中A組血漿TC與LDL水平水平及PPAR-γ表達(dá)均顯著高于D組,證實(shí)了該報(bào)道。而LDL與ox-LDL的量成正相關(guān),是反映ox-LDL水平的一個(gè)臨床常用指標(biāo)。對(duì)于A組,由于僅采用了高脂飲食作為干預(yù)因素,因而血脂可視作該組PPAR-γ的唯一激活劑。而對(duì)于B組,其PPAR-γ表達(dá)量明顯高于其較低血脂水平下的預(yù)測(cè)值,說明替米沙坦有直接或間接上調(diào)PPAR-γ的作用。由于PPAR-γ的廣泛作用及與動(dòng)脈粥樣硬化的密切關(guān)系,尋找能選擇性的控制PPAR-γ介導(dǎo)的有益的生物學(xué)效應(yīng)的激活劑是動(dòng)脈粥樣硬化治療的新靶點(diǎn)。替米沙坦是唯一在常規(guī)治療劑量下即具有PPAR-γ作用的ARB類藥物,而其他ARB雖然也有PPAR-γ激動(dòng)劑的作用,但均需要在超過治療劑量許多倍的情況下才能顯示出這一作用。另外,替米沙坦與傳統(tǒng)的PPAR-γ激動(dòng)劑不同,它僅具有部分PPAR-γ激動(dòng)劑的作用,是選擇性的PPARγ調(diào)節(jié)劑。與傳統(tǒng)的PPAR-γ激動(dòng)劑(如吡格列酮等