TNAIA 0259-2023 牛輪狀病毒病診斷與防控技術(shù)規(guī)程

ICSICS65.020.30ICSCCSA031

T/NAIA團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/NAIA0259-2023牛輪狀病毒病診斷與防控技術(shù)規(guī)程Technicalregulationsfordiagnosis,preventionandcontrolofBovinerotavirusdisease2023-12-18發(fā)布 2023-12-31實(shí)施寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì) 發(fā)布T/NAIA0259-2023T/NAIA0259-2023前言GB/T1.1-20201定起草。本文件由寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：寧夏農(nóng)林科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所、寧夏大學(xué)、寧夏職業(yè)技術(shù)學(xué)院、同心縣科技服務(wù)中心。王世博、郭吉平、尤建村、張永康、李生虎、于有利、張久盤(pán)、馬玉禮、郝萬(wàn)軍。本文件為首次發(fā)布。牛輪狀病毒病診斷與防控技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了牛場(chǎng)牛輪狀病毒病診斷與防治技術(shù)的術(shù)語(yǔ)和定義、診斷、防控和治療。本文件適用于牛場(chǎng)牛輪狀病毒病的防控。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T16568奶牛場(chǎng)衛(wèi)生規(guī)范NY5030無(wú)公害農(nóng)產(chǎn)品獸藥使用準(zhǔn)則NY5047無(wú)公害食品奶牛飼養(yǎng)獸醫(yī)防疫準(zhǔn)則NY/T5049無(wú)公害食品奶牛飼養(yǎng)管理準(zhǔn)則術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。牛輪狀病毒病 Bovinerotavirus是指由牛輪狀病毒引發(fā)犢牛精神沉郁、厭食、嘔吐、腹瀉、脫水為主要特征的急性胃腸道傳染病。診斷流行病學(xué)7臨床癥狀12h～24h多呈隱性感染，并在一定時(shí)間持續(xù)向外界排毒。病理變化爛 爛牛輪狀病毒感染病理變化主要表現(xiàn)在消化腸道，腸腔內(nèi)充滿凝乳塊和乳汁，小腸腸壁變薄、半透明，腸內(nèi)容物呈液狀、灰黃或灰黑色。實(shí)驗(yàn)室診斷樣品采集及處理3mLPBS采樣管中；也可無(wú)菌采集地上剛排出3mLPBS管中，充分振蕩，12000r/min45min1g5mLPBS，混勻，800045min0.22μm濾器過(guò)濾，-80冰箱保存。分子檢測(cè)RNA提取將4.4.1中樣品上清或分離病毒用商品化試劑盒進(jìn)行基因組RNA提取。反轉(zhuǎn)錄將5.5.2中的基因組RNA利用反轉(zhuǎn)錄試劑進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄（見(jiàn)附錄表A.1,A.2）。RPA鑒定RPA方法進(jìn)行病原核酸檢測(cè)，BRV引物序列（A.3）RPA擴(kuò)增RPA（℃25min。RPA產(chǎn)物電泳1×TAE2%5μLDNA分子量標(biāo)準(zhǔn)5V/cm恒壓電泳，30min后采用凝膠成像系統(tǒng)判定核酸片段大小。RPA結(jié)果判定陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)一條199bp大小的條帶，且陰性對(duì)照不出現(xiàn)條帶（參見(jiàn)附錄B.1）。確診出現(xiàn)4.1、4.2、4.3，可判定為牛輪狀病毒病疑似病例。符合4.4可判定為牛輪狀病毒病。防控GB/T16568和NY/T5049的規(guī)定。毒。在保證舍內(nèi)溫度的前提下，自然通風(fēng)，保證牛舍干燥、舒適、溫暖。避免應(yīng)激，消除可能降低機(jī)體抵抗力的各種應(yīng)激因素。自然哺乳母牛定期消毒乳頭，防止致病微生物傳染犢牛。分娩時(shí)，落地犢牛口鼻切勿接觸臟污。初生犢牛及時(shí)哺喂初乳。犢牛出生后1h內(nèi)及時(shí)吸吮初乳。哺乳犢牛給予開(kāi)食料，補(bǔ)充微量元素，飼料配比適當(dāng)。NY5047的規(guī)定。病死或死因不明牛按照《病死及病害動(dòng)物無(wú)害化處理技術(shù)規(guī)范》及《病死畜禽和病害畜禽產(chǎn)品無(wú)害化處理管理辦法》的規(guī)定處理。治療NY/T5030的規(guī)定。5%100mL～200mL。對(duì)持續(xù)腹瀉不止的犢牛，可應(yīng)用白頭翁散或明礬或次硝酸鉍，內(nèi)服。8%以下時(shí)，給予口服補(bǔ)液;8%以上或腹瀉嚴(yán)重時(shí)，應(yīng)在給予口服補(bǔ)液的同時(shí)，皮下或靜脈注射含有碳酸鈉的林格氏液。爛 爛附錄A(規(guī)范性)反應(yīng)體系A(chǔ).1反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系試劑使用量RNase-freeddH2O10μL5×All-in-oneQrtsUPERMix4μLEnzymeMix1μL模板RNA5μLA.2反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)程序溫度時(shí)間50℃15min85℃5sec表A.3 輪狀病毒基礎(chǔ)RPA引物序列信息引物名稱引物序列（5'→3'）片段大?。╞p）參考序列BRV-F1ACATATTGTACAGCTCCGAAGAGTGTTGACT199MN067448.1BRV-R1TGCTTGGTAAGTATTTATTATCTGCCCGTTT表A.4 RPA反應(yīng)體系試劑體積μLBRV-F1（10μM）1.2μLBRV-R1（10μM）1.2μLRehydrationbuffer14.75μL模板1