高效液相色譜柱

高效液相色譜柱參與者：賴云飛、曾麗華、李菁、吳海霞、劉佳、徐玲霞01高效液相色譜柱的結(jié)構(gòu)02高效液相色譜柱的分類與應(yīng)用范圍03品牌色譜柱廠家、型號(hào)04高效液相色譜柱使用注意事項(xiàng)目錄1.液相色譜柱的結(jié)構(gòu)液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲與柱填料等組成柱管：多用不銹鋼制成，如果使用時(shí)柱壓不高于70kg/cm2時(shí)，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。用于柱填料的裝填。壓帽：即色譜柱兩端套合于柱管端外壁的塑性圓柱帽，中部有小孔，多為聚四氟乙烯制成，用于固定篩板。多孔燒結(jié)物（濾片）：封閉色譜柱的兩端，固體色譜柱的填料。一般來(lái)說(shuō)，5um與3um的微粒分別用2um與0.5um孔徑的不銹鋼濾片。密封環(huán)：位于接頭螺旋環(huán)內(nèi)壁的彈性環(huán)，多為聚四氟乙烯制成，用于色譜柱兩端壓帽與柱外壁的密封。柱填料：色譜柱擔(dān)體，常用的填料為硅膠、多孔聚合物、氧化鋁等；2.液相色譜柱的分類與應(yīng)用范圍分類方法很多，可按鍵合相類型、用途（分析型與制備型）、基質(zhì)種類等進(jìn)行分類。硅膠基質(zhì)柱（4大類）：

目前，分析型液相色譜柱多為硅膠基質(zhì)柱，細(xì)分為：高純硅膠柱：以高純度硅烷化硅膠（Silica）為填料，應(yīng)用范圍較廣，但只能在PH2.0-7.5，小于60度的條件下使用。又由于強(qiáng)極性硅羥基（Si-OH)的次級(jí)保留效應(yīng)較強(qiáng)，所以應(yīng)用受到局限，已被鍵合相柱所取代。反相硅膠柱：是以硅烷化硅膠為基質(zhì)，表面鍵合弱極性官能團(tuán)的固定相。目前多用C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B）、C6H5（phenyl，苯基）等。用于分離大多數(shù)有機(jī)化合物，應(yīng)用范圍最廣。正相硅膠柱：是以硅烷化硅膠為基質(zhì)，表面鍵合極性官能團(tuán)的固定相。目前較多的為：NH2—（氨基）、CN—（氰基）、DIOL（二羥基，也常做HILIC單獨(dú)分類列出，多用于分離有機(jī)酸、蛋白質(zhì)等）。多用于分離光學(xué)異構(gòu)體和反相柱子不能分離的極性比較大的物質(zhì)。離子交換柱：是以硅烷化硅膠為基質(zhì)，以磺化交聯(lián)鍵合強(qiáng)陽(yáng)/陰離子基團(tuán)（磺酸鹽/季銨堿）的固定相，又分為強(qiáng)酸性、強(qiáng)堿性、弱酸性、弱堿性等不同規(guī)格。用于分離解離性較強(qiáng)的有機(jī)鹽類化合物。（注意：不要同離子色譜混淆，離子色譜主要是分離無(wú)機(jī)鹽類化合物或某些帶點(diǎn)離子。）聚合物基質(zhì)柱

聚合物基質(zhì)柱是指采用聚苯乙烯—二乙烯基苯、聚甲基丙烯酸脂、多孔性微球蛋白等聚合物凝膠作為主要填料的一類色譜柱。其相對(duì)于硅膠柱具有更強(qiáng)的疏水性及更寬泛的pH范圍（1.0～14.0），但柱效較低，目前主要應(yīng)用于凝膠滲透色譜（GPC）、凝膠過(guò)濾色譜（GFC）及分子排阻色譜（MEC）。主要用于分離蛋白質(zhì)類等大分子化合物。其他無(wú)機(jī)物填料柱這類色譜柱僅限于特殊用途，主要有石墨化碳、氧化鋁（Al2O3）、氧化鋯（ZrO2）等填料。不需要進(jìn)行表面改性，其自身表面即可對(duì)各類化合物有強(qiáng)保留?？稍谌我鈖H（氧化鋁除外，不能大于12.0）及高溫度（可達(dá)100℃）下使用。其中，石墨化碳填料柱能分離多種化合物，主要用于分離幾何異構(gòu)體；氧化鋁柱剛性強(qiáng)，柱床穩(wěn)定，可分離多種化合物且多用于制備色譜；氧化鋯柱較氧化鋁柱有更強(qiáng)的pH適用范圍及能耐受更高的溫度，但其應(yīng)用尚待進(jìn)一步研究。建立色譜柱檔案在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的色譜柱應(yīng)該進(jìn)行統(tǒng)一標(biāo)號(hào)，收納進(jìn)倉(cāng)庫(kù)中，然后關(guān)于色譜柱的建立紙質(zhì)版以及電子版檔案，檔案中色譜柱的信息一定要添加完整，為以后積累色譜柱的適用信息提供參考，這其中應(yīng)該包括：色譜柱的編號(hào)、品牌、填充材料、型號(hào)、正在運(yùn)輸中的溶劑、最大耐壓值及流速、最佳使用溫度范圍、PH值范圍、需要注意的事項(xiàng)、產(chǎn)品序列號(hào)以及備注信息等.常用液相色譜柱主要應(yīng)用范圍與特點(diǎn)匯總反相色譜柱柱填料類型主要應(yīng)用范圍特點(diǎn)C18（ODS）可分離多種化合物，最適合用于極性樣品或做離子抑制的樣品的分析

普適性好；保留性強(qiáng)，用途廣

；可用于正相。C8（辛基）

與C18相似與C18相似，但保留值稍小C3，C4

多用于肽類與蛋白質(zhì)

保留值更小

C1[三甲基單氯硅烷(TMS)]普通反相溶劑分析疏水性強(qiáng)的化合物；使用高水含量溶劑分析高極性化合物

；分離多功能團(tuán)化合物保留值最?。蛔畈环€(wěn)定；可用于反相與正相

苯基，苯乙基

多用于分離分析同時(shí)含極性和非極性芳香化合物的混合物

保留值適中；選擇性有所不同

，對(duì)極性芳香化合物選擇性更強(qiáng)；可用于正相。正相色譜柱柱填料類型主要應(yīng)用范圍特點(diǎn)CN（氰基）

適用于在ODS上無(wú)保留或分離時(shí)間太長(zhǎng)的組分的分離，以及樣品中同時(shí)含有親水與疏水性化合物而在ODS上色譜優(yōu)化困難的場(chǎng)合，也可用于氨基酸分析。屬中等級(jí)性柱，普適性好；保留適中，可用于正相與反相。

NH2（氨基）

主要用于分析單糖類、烴類化合物保留性弱；極性大，不穩(wěn)定，酸性條件下易水解；亦可用于反相。OH（二醇基，DIOL）

多用于有機(jī)酸、肽類與蛋白質(zhì)分析

極性大于CN，小于NH2，常做HILIC用。可反相用。高純硅膠柱多用于制備LC，適用于多種化合物普適性好；價(jià)廉；操作不太方便；pH窄（2-7.5）；次級(jí)保留效應(yīng)強(qiáng)（硅羥基），易峰拖尾或前延，分叉等。柱填料類型主要應(yīng)用范圍特點(diǎn)Chiral（手性柱）

常用于分離手性異構(gòu)體，根據(jù)分離不同機(jī)理選擇。不同化學(xué)性質(zhì)的異構(gòu)體需采用不同類型的手性柱

。部分亦可用于反相。HILIC（親水作用柱）最常用Diol柱、丙基酰胺基鍵合硅膠柱，多用于分析極性化合物、端基異構(gòu)體、如藥物極性代謝產(chǎn)物、多肽、有機(jī)酸、糖類等。多用于ELSD檢測(cè)，C18無(wú)保留化合物，毒品檢查等?？捎糜诜聪唷＞酆衔锘|(zhì)柱

單獨(dú)的聚苯乙烯類填料柱主要用于分離蛋白質(zhì)類等大分子化合物，多用于GPC、GFC、MEC等；若與離子交換基團(tuán)共鍵則形成離子交換柱，用于分離酸性化合物（磺酸基團(tuán)）、堿性合物（季銨基團(tuán)）及藥物代謝產(chǎn)物等。特點(diǎn)：在1＜PH＜13的流動(dòng)相中穩(wěn)定；分離峰形較好，柱子壽命較長(zhǎng)。其他無(wú)機(jī)物填料柱如氧化鋁、石墨化碳、氧化鋯、硅藻土等，主要作制備色譜用。

液相色譜柱分離機(jī)理概述

色譜柱類型分離機(jī)理備注常規(guī)反相柱相似相溶常規(guī)正相柱相似相溶離子交換柱樣品離子與色譜柱離子達(dá)到置換動(dòng)態(tài)平衡要關(guān)注pH條件手性柱（Chiralcolumn）氫鍵作用、偶級(jí)-偶級(jí)作用、π-π作用、靜電作用、疏水作用、空間作用

一般，AGP、HSA、BSA等以疏水作用、空間作用為主

。親水性色譜柱（HILIC）氫鍵作用、偶極作用和靜電作用等多種次級(jí)效應(yīng)及相似相溶氨基酸分析柱相似相溶3.品牌色譜柱廠家、型號(hào)實(shí)驗(yàn)室常用色譜柱有C8柱、C18柱、氰基柱、苯基柱、氨基柱、手性柱、離子交換柱；Waters公司的μBondapak系列填料柱(分析柱部份產(chǎn)品節(jié)選)安捷倫公司的Zorbax系列填料柱

YMC公司的pack系列填料柱其他品牌：

美國(guó)Supelco公司的Supelco柱,瑞典AkzoNobel公司的Kroma-sil填料柱，迪馬公司的Diamonsil柱以及部分日本島津公司的產(chǎn)品，此外Merk公司和Mecherey-Nagel公司也是世界知名的色譜填料和色譜柱生產(chǎn)廠家。4.高效液相色譜使用注意事項(xiàng)普通C8及C18反相色譜柱（C8&C18Reversed-phasechromatographycolumn）當(dāng)色譜柱使用較長(zhǎng)時(shí)間之后，就可能發(fā)生柱壓升高、分離度不好、柱效降低、峰形不好等情況，這時(shí)就需要根據(jù)故障原因?qū)ιV柱進(jìn)行清堵與再生，以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。具體原因及處理方法如下：（1）篩板堵塞與柱頭塌陷：主要現(xiàn)象有柱壓嚴(yán)重升高或不穩(wěn)定、色譜峰拖尾、色譜峰變寬、色譜峰分叉、禿峰等，需要進(jìn)行清堵與彈性復(fù)原處理。（此方法適合于任何類型有相同故障的色譜柱的處理，不同的是溶劑要與相應(yīng)類型色譜柱匹配。）主要處理方法如下：①一般情況下，將色譜柱反接，不接檢測(cè)器，用純水或水-有機(jī)相（多用甲醇、乙腈）（95:5）以0.6ml/min流速?zèng)_洗約4h→再正向連接，接或不接檢測(cè)器，用純水或水-有機(jī)相（多用甲醇、乙腈）（95:5）以0.6ml/min流速?zèng)_洗約1h→再提高流速至1.0ml/min沖洗1h，觀察柱壓變化。若不湊效，則擰開(kāi)柱頭螺母（色譜柱進(jìn)口），小心取下篩板，用5%左右的硝酸溶液超聲處理20min左右，再用純水超聲20min左右。用小勺清理掉柱進(jìn)口污染的部分填料，再將用乙醇調(diào)和后的相應(yīng)的硅膠裝入柱入口（也可用已經(jīng)報(bào)廢的同類柱中的填料替代），用平面不銹鋼小鏟壓緊填平至略高出柱管口，但量不宜太多，否則，壓得太緊柱壓會(huì)升高，然后裝上清洗過(guò)的篩板，注意篩板安裝方向必需與原裝相同，最后緊固。②沖洗與飽和：清堵緊固后，先反向連接色譜柱，不接檢測(cè)器，用純水或水-有機(jī)相（多用甲醇、乙腈）（95:5）以0.3ml/min流速?zèng)_洗約4h→再換成甲醇以0.5ml/min流速?zèng)_洗約2h→再正向連接色譜柱，接或不接檢測(cè)器，用純水或水-有機(jī)相（多用甲醇、乙腈）（95:5）以0.3ml/min流速?zèng)_洗約2h→再換成甲醇以0.5ml/min流速?zèng)_洗約1h→然后用甲醇或乙腈以1ml/min流速?zèng)_洗約1h以上，再根據(jù)測(cè)試用流動(dòng)相比例調(diào)整水-甲醇（或乙腈）比例，以1ml/min流速?zèng)_洗約1h，最后用測(cè)試用流動(dòng)相平衡2h，進(jìn)樣測(cè)試即可。③特別說(shuō)明：如不是特殊情況，按其他辦法可行，則最好不要反沖色譜柱和拆卸篩板。（2）柱效降低：主要特征性現(xiàn)象有柱壓基本正常，但出現(xiàn)拖尾峰、禿峰、分叉峰、前延峰、峰變寬、基線漂移、理論板數(shù)降低、分離度降低等。需要進(jìn)行再生處理，具體方法如下：①一般情況下，順接色譜柱，按如下溶劑順序及條件沖洗：95%水-5%甲醇（或乙腈）（1.0ml/min，1h以上）→100％甲醇（1.0ml/min，1h以上）→100％乙晴（1.0ml/min，1h以上）→75％乙晴-25％異丙醇（0.5ml/min，10倍柱體積以上）→100％異丙醇（0.5ml/min，10倍柱體積以上）→100％二氯甲烷（0.5ml/min，10倍柱體積以上）→100％正己烷（0.5ml/min，10倍柱體積以上，根據(jù)實(shí)際情況可忽略）→100%異丙醇（0.5ml/min，20倍柱體積以上）→95%水-5%甲醇（或乙腈）（0.5ml/min，30min；再升至1.0ml/min，10倍柱體積以上）→檢測(cè)用流動(dòng)相平衡2h或至基線平穩(wěn)，進(jìn)樣測(cè)試。在沖洗過(guò)程中，隨時(shí)關(guān)注柱壓變化，確保不超過(guò)4000psi；若超出，可通過(guò)降低流速，升高柱溫來(lái)調(diào)整，具體操作可咨詢具備相關(guān)專業(yè)知識(shí)背景和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的人士。②若上述方法效果不理想，可按如上溶劑順序和條件，先反接色譜柱沖洗→再順接色譜柱，用100%乙腈以1ml/min流速?zèng)_洗約2h→再用與流動(dòng)相同比例的水-有機(jī)相以1ml/min流速?zèng)_洗約30min→最后用流動(dòng)相平衡2h或至基線平穩(wěn)，進(jìn)樣測(cè)試即可。③特別說(shuō)明：再生過(guò)程必須隨時(shí)關(guān)注柱壓變化，柱壓過(guò)高易導(dǎo)致硅膠變形與開(kāi)裂及鍵合相極性端連接順序紊亂，同時(shí)要保證再生時(shí)間足夠。（3）當(dāng)分析復(fù)雜樣品時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，尤其是中藥分析，若出現(xiàn)柱壓正常而色譜峰形變差，分離度降低時(shí)可嘗試如下方法再生：先用5%甲醇（或乙腈）-95%水，將色譜柱反向連接，以1ml/min沖洗60分鐘以上→再用四氫呋喃（或丙酮）以0.5ml/min沖洗60分鐘以上（去除脂類）→再用65%甲醇（或乙腈）-35%水，以流速1ml/min沖洗60分鐘→然后用純甲醇或乙腈沖洗30分鐘→接著用與流動(dòng)相同比例的水-有機(jī)相以1ml/min流速?zèng)_洗約30min→最后用流動(dòng)相平衡2h，進(jìn)樣測(cè)試即可。（4）特別提醒：再生時(shí)最好選擇不具備在線脫氣的獨(dú)立泵送系統(tǒng)色譜儀器進(jìn)行，以防正相溶劑損壞脫氣機(jī)密封膜或分子篩及比例閥等儀器精密部件。正相色譜柱（Normal–PhaseChromatographycolumn）氨基柱（-NH2）①在正相條件下使用時(shí)，故障率較低。但要注意不可進(jìn)樣含有醛基、羰基的化合物，不可用于還原糖的分析；流動(dòng)相要徹底脫氣，并不得含有羰基化合物和過(guò)氧化物（質(zhì)量較差的乙醚、四氫呋喃等溶劑中含有少量）。任何時(shí)候更換流動(dòng)相時(shí)都要確保新流動(dòng)相與柱子原保存液可互溶，若不互溶，必需用異丙醇過(guò)渡。

當(dāng)使用氨基柱進(jìn)行酸性物質(zhì)分析時(shí)，酸性物質(zhì)溶液有質(zhì)子存在，會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化，導(dǎo)致使用一段時(shí)間后被測(cè)成分保留性質(zhì)有所改變或柱效下降。這時(shí)，建議按如下方法處理：首先用異丙醇，以0.5ml/min流速，沖洗約50倍柱體積→然后用甲醇，以0.5ml/min流速，沖洗約50倍柱體積→再用異丙醇，以0.5ml/min流速，沖洗約10倍柱體積過(guò)渡，回到平常使用的正相流動(dòng)相平衡2h，進(jìn)樣檢測(cè)即可。若上述方法不湊效，可嘗試按以下程序沖洗與再生：

首先用含0.5%～1.0％NH3的50%乙腈-50%水溶液，以1.0ml/min流速?zèng)_洗該柱約5～10倍柱體積→然后用不含NH3的50%乙腈-50%水溶液，以1.0ml/min流速?zèng)_洗該柱約5～10倍柱體積以洗去多余NH3→再用添加少許NH3（如0.1％）的酸性分析物的流動(dòng)相平衡2h左右，進(jìn)樣檢測(cè)即可。②在反相條件下使用時(shí)，-NH2鍵會(huì)水解，尤其是在該柱子pH范圍以外，在極端酸性和堿性條件下柱效會(huì)下降很快，所以故障率較高。若出現(xiàn)柱壓增高柱效降低等情況，建議采用如下方法處理：若流動(dòng)相含有緩沖鹽，先以流動(dòng)相比例的水-有機(jī)溶劑，以檢測(cè)分析時(shí)同流速?zèng)_洗約30倍柱體積→再用純甲醇，以1.0ml/min流速?zèng)_洗約50倍柱體積→然后用異丙醇，以0.5ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積過(guò)渡→再用二氯甲烷以0.6ml/min流速?zèng)_洗色譜柱約10倍柱體積→再用異丙醇以0.5ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積過(guò)渡回到甲醇條件下，以1.0ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積，密封保存或用流動(dòng)相平衡2h左右（若流動(dòng)相含有緩沖鹽，需先用與流動(dòng)相同比例的水-有機(jī)相以1.0ml/min流速?zèng)_洗約30min），進(jìn)樣檢測(cè)即可。若上述方法不湊效，可嘗試如下程序沖洗與再生：95％水-5％乙腈，以1.0ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積→THF（四氫呋喃），以0.6ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積→95％乙腈-5％水以1.0ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積→保持95％乙腈-5％水，以低流速0.2-0.5mL/min沖洗過(guò)夜→流動(dòng)相平衡2h（若流動(dòng)相含有緩沖鹽，需先用與流動(dòng)相同比例的水-有機(jī)相以1.0ml/min流速?zèng)_洗30min），進(jìn)樣檢測(cè)即可。氰基柱（-CN）①在正相條件下使用時(shí)，故障率較低，操作和維護(hù)與氨基柱基本完全相同。但當(dāng)柱子使用一定時(shí)間后，若出現(xiàn)柱效下降，柱子老化，可通過(guò)沖洗再生來(lái)恢復(fù)其柱性能。具體方法如下：用氯仿以0.5ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積→再用異丙醇以0.5ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積→然后用二氯甲烷以0.5ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積→再用流動(dòng)相（pH1.5-7.0為佳）平衡1h，待基線平穩(wěn)，進(jìn)樣檢測(cè)即可。②在反相條件下使用時(shí)，-CN鍵會(huì)水解，尤其是在pH1.5-7.0范圍以外，在極端酸性和堿性條件下柱效會(huì)下降很快，所以故障率較高。如果在這個(gè)條件下使用，一定要注意及時(shí)清洗。若出現(xiàn)柱效下降，柱子老化，可通過(guò)沖洗再生來(lái)恢復(fù)其柱性能。具體方法如下：若流動(dòng)相含有緩沖鹽，先以流動(dòng)相比例的水-有機(jī)溶劑，以檢測(cè)時(shí)同流速?zèng)_洗約30倍柱體積→再用95%水-5%乙腈以1.0ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積→再用THF（四氫呋喃）以0.6ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積→再用95%乙腈-5%水以1.0ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積→再用流動(dòng)相平衡2h（若流動(dòng)相含有緩沖鹽，需先用與流動(dòng)相同比例的水-有機(jī)相以1.0ml/min流速?zèng)_洗約30min），進(jìn)樣檢測(cè)即可。若上述方法不湊效，可嘗試如下程序沖洗與再生：用95%水-5%乙腈以1.0ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積→再用THF（四氫呋喃）以0.5ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積→再用95%乙腈-5%水以1.0ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積→保持95%乙腈-5%水繼續(xù)沖洗，以低流速0.2～0.5mL/min沖洗過(guò)夜→流動(dòng)相平衡2h（若流動(dòng)相含有緩沖鹽，需先用與流動(dòng)相同比例的水-有機(jī)相以1.0ml/min流速?zèng)_洗約30min），進(jìn)樣檢測(cè)即可。陰/陽(yáng)離子交換柱陽(yáng)離子交換柱常見(jiàn)故障與處理離子交換柱屬于較脆弱的色譜柱，陽(yáng)離子交換柱在使用過(guò)程中，往往會(huì)由于不規(guī)范操作而導(dǎo)致一系列故障。常見(jiàn)故障如下：①柱壓升高伴隨柱效降低：主要是由于系統(tǒng)管路或柱保存過(guò)程中柱內(nèi)或長(zhǎng)菌、樣品溶液中的顆粒物積聚在燒結(jié)物或者柱床上等所致。②色譜峰額外地展寬：主要是由于管路太長(zhǎng)、非新鮮配制的流動(dòng)相中含有不正確的陰離子、流動(dòng)相pH與離子強(qiáng)度不正確、用流動(dòng)相平衡時(shí)間不夠等所致。③柱壓正常伴隨柱效降低：主要是由于樣品中有脂肪，油脂，脂質(zhì)等有機(jī)物致使固定相的表面被覆蓋、從樣品中帶來(lái)的不確切的有機(jī)物或未正確制備洗脫液、在洗脫液制備完成以后帶入洗脫液中的非特定有機(jī)物（eg.運(yùn)輸時(shí)從大氣中帶來(lái)）。針對(duì)上述情況，在使用離子交換柱過(guò)程中需特別注意即可避免。若已經(jīng)產(chǎn)生故障，可根據(jù)實(shí)際情況處理，嘗試按如下方法再生：首先反接色譜柱→用1mol/L的硝酸銨溶液，以0.4ml/min的流速洗脫30ml～60ml→再用甲醇-水（40：60），以0.4ml/min的流速洗脫30ml～60ml→然后用異丙醇，以0.4ml/min的流速洗脫30ml→再用去離子水，以0.4ml/min的流速洗脫30ml→然后用檢測(cè)用洗脫液，以0.4ml/min的流速洗脫30ml→最后將柱子接回正常方向，用檢測(cè)用洗脫液平衡至基線平穩(wěn)，進(jìn)樣檢測(cè)即可。陰離子交換柱常見(jiàn)故障與處理同陽(yáng)離子交換柱。不同的是，陰離子交換柱在不正確的較低pH條件下會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)峰（溶劑峰+硫酸鹽峰）逐漸前移和峰向（正與負(fù)）針針變化。處理：正確配制新鮮的pH在3.8-4.3之間的洗脫液。若出現(xiàn)與陽(yáng)離子交換柱相同的常見(jiàn)故障，處理方法同陽(yáng)離子交換柱。部分離子交換柱要求不同可采用0.05mol/L的硫酸溶液（陽(yáng)離子交換柱）或0.05mol/L的氨水溶液（陰離子交換柱），反向連接色譜柱，以0.3ml/min流速過(guò)夜沖洗→換成去離子水，以0.5ml/min流速，沖洗約12h→再正向連接色譜柱，用流動(dòng)相平衡至基線穩(wěn)定（若流動(dòng)相中含有緩沖鹽，需先用超純水以0.5ml/min流速?zèng)_洗約10倍柱體積，再進(jìn)行平衡），進(jìn)樣測(cè)試即可。手性柱（ChiralHPLCColumn）手性色譜柱在使用過(guò)程中往往會(huì)由于操作不當(dāng)而導(dǎo)致一系列問(wèn)題，現(xiàn)以AGP柱為例加以說(shuō)明和規(guī)范。（1）常見(jiàn)故障原因及處理辦法：①手性異構(gòu)體無(wú)法完全分離：多為色譜條件不妥，需要重新考察色譜條件。②峰形變差，諸如拖尾、分叉、前延：多為色譜柱污染、柱床硅膠溶解與柱頭塌陷（往往是由于流動(dòng)相pH超過(guò)8.0