致病菌檢驗方法

需要檢測的致病菌乙型溶血鏈球菌大腸桿菌綠膿桿菌金黃色葡萄球菌志賀氏菌沙門氏菌第一頁，編輯于星期三：五點三十三分。1致病菌檢驗方法5/9/2024溶血性鏈球菌檢測依據(jù)：GB/T4789.11-2003食品衛(wèi)生微生物學檢驗溶血性鏈球菌檢驗第二頁，編輯于星期三：五點三十三分。2致病菌檢驗方法5/9/2024檢驗程序檢樣葡萄糖肉湯36℃±1℃24h血平板36℃±1℃24h血平板（分純培養(yǎng)）36℃±1℃鏈激酶試驗桿菌肽敏感試驗觀察溶血24h革蘭氏染色報告第三頁，編輯于星期三：五點三十三分。3致病菌檢驗方法5/9/20241、菌落特征：溶血性鏈球菌菌落特征：灰白色細小針尖樣。菌落周圍形成一個2-4mm寬、界限分明、完全透明的無色溶血環(huán)。第四頁，編輯于星期三：五點三十三分。4致病菌檢驗方法5/9/20242、革蘭氏染色：乙型溶血性鏈球菌為革蘭氏陽性球菌，在鏡下呈現(xiàn)為藍紫色，圓形，鏈狀排列。第五頁，編輯于星期三：五點三十三分。5致病菌檢驗方法5/9/20243、桿菌肽敏感試驗乙型溶血性鏈球菌對桿菌肽敏感，在涂布了該菌菌液的血平板上貼上桿菌肽，36℃培養(yǎng)18~24h，如果有大于10mm的抑菌帶出現(xiàn)即為陽性。第六頁，編輯于星期三：五點三十三分。6致病菌檢驗方法5/9/20244、鏈激酶試驗乙型溶血性鏈球菌能產(chǎn)生鏈激酶，能激活正常人體血液中的血漿蛋白酶原，形成血漿蛋白酶，而后溶解纖維蛋白。試驗中，能使凝固的血漿完全溶解為鏈激酶試驗陽性。凝固溶解第七頁，編輯于星期三：五點三十三分。7致病菌檢驗方法5/9/2024大腸桿菌依據(jù)：GB15979-2002一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準附錄B3大腸菌群檢測方法第八頁，編輯于星期三：五點三十三分。8致病菌檢驗方法5/9/20241、發(fā)酵試驗取樣液5ml接種50ml乳糖膽鹽發(fā)酵管，置37℃培養(yǎng)24h，如不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，則報告為陰性，如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則進行下一步試驗。第九頁，編輯于星期三：五點三十三分。9致病菌檢驗方法5/9/20242、接種平板乳糖膽鹽發(fā)酵試驗陽性的管，劃線接種伊紅美藍平板。典型的大腸桿菌菌落為黑紫色或紅紫色，圓形，邊緣整齊，表面光滑濕潤，有金屬光澤，也有的呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤，或粉紅色，中心較深的菌落。第十頁，編輯于星期三：五點三十三分。10致病菌檢驗方法5/9/20243、革蘭氏染色取疑似菌落作革蘭氏染色鏡檢，大腸桿菌為革蘭氏陰性桿菌，鏡下呈紅色桿狀。第十一頁，編輯于星期三：五點三十三分。11致病菌檢驗方法5/9/20245、復發(fā)酵伊紅美藍平板上的疑似菌落在染色鏡檢的同時接種乳糖發(fā)酵管，如有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則可報告檢出大腸桿菌。第十二頁，編輯于星期三：五點三十三分。12致病菌檢驗方法5/9/2024綠膿桿菌依據(jù)：GB7918.4-87化妝品微生物標準檢驗方法綠膿桿菌第十三頁，編輯于星期三：五點三十三分。13致病菌檢驗方法5/9/2024檢驗程序：增菌培養(yǎng)37℃培養(yǎng)18~24h分離培養(yǎng)37℃培養(yǎng)18~24h染色鏡檢氧化酶試驗綠膿菌素試驗硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗明膠液化試驗42℃生長試驗報告第十四頁，編輯于星期三：五點三十三分。14致病菌檢驗方法5/9/20241、增菌培養(yǎng)如有綠膿桿菌生長，培養(yǎng)表面多有一層薄菌膜，培養(yǎng)液常呈黃綠色或藍綠色第十五頁，編輯于星期三：五點三十三分。15致病菌檢驗方法5/9/20242、分離培養(yǎng)綠膿桿菌菌落扁平無定型，向周邊擴散或略有蔓延，表面濕潤，菌落呈灰白色，菌落周圍培養(yǎng)基常擴散有水溶性色素。第十六頁，編輯于星期三：五點三十三分。16致病菌檢驗方法5/9/20243、染色鏡檢取疑似菌落作革蘭氏染色鏡檢，綠膿桿菌為革蘭氏陰性桿菌，鏡下呈紅色短桿狀。第十七頁，編輯于星期三：五點三十三分。17致病菌檢驗方法5/9/20244、氧化酶試驗挑取綠膿桿菌可疑菌落涂在白色濾紙上，加一滴新配制的1%二甲基對苯二胺試液，在15~30s內(nèi)，出現(xiàn)粉紅色或紫紅色，為陽性，無色或淡黃色為陰性。第十八頁，編輯于星期三：五點三十三分。18致病菌檢驗方法5/9/20245、綠膿菌素試驗取可疑菌落接種綠膿菌素鑒定用培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h,加入氯仿3~5mL，充分振蕩使培養(yǎng)物中的綠膿菌素溶解于氯仿液中，等氯仿提取液呈藍色時，用吸管將氯仿移到另一試管內(nèi)并加入1mol/L的鹽酸1mL，振蕩，靜置片刻，如上層鹽酸內(nèi)出現(xiàn)粉紅到紫紅色時，為陽性，表示有綠膿菌素存在。第十九頁，編輯于星期三：五點三十三分。19致病菌檢驗方法5/9/20246、硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗接種被檢純培養(yǎng)物于硝酸鹽胨水培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h。小倒管中有氣體者，為陽性，表明該菌能還原硝酸鹽，產(chǎn)生氮氣。第二十頁，編輯于星期三：五點三十三分。20致病菌檢驗方法5/9/20247、明膠液化試驗將可疑菌落穿刺接種在明膠培養(yǎng)基內(nèi)，37℃培養(yǎng)24h,取出放冰箱10~30min，如何呈溶解狀態(tài)，即為明膠液化試驗陽性，如凝固不溶者為陰性。第二十一頁，編輯于星期三：五點三十三分。21致病菌檢驗方法5/9/20248、42℃生長試驗挑取純培養(yǎng)物，接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上，放在41℃~42℃培養(yǎng)箱中24h~48h，綠膿菌能生長，為陽性。不能生長為陰性。第二十二頁，編輯于星期三：五點三十三分。22致病菌檢驗方法5/9/2024第二十三頁，編輯于星期三：五點三十三分。23致病菌檢驗方法5/9/2024金黃色葡萄球菌依據(jù)：GB7918.5-87化妝品微生物標準檢驗方法金黃色葡萄球菌第二十四頁，編輯于星期三：五點三十三分。24致病菌檢驗方法5/9/2024檢驗程序增菌37℃18~24h分離37℃24~48h染色鏡檢甘露醇發(fā)酵試驗血漿凝固酶試驗報告第二十五頁，編輯于星期三：五點三十三分。25致病菌檢驗方法5/9/20241、增菌：取樣液按1：10比例接種到SCDLP液體培養(yǎng)基中，或者可用7.5%氯化鈉肉湯，置37℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h。第二十六頁，編輯于星期三：五點三十三分。26致病菌檢驗方法5/9/20242、分離將增菌培養(yǎng)液劃線接種于血瓊脂平板置37℃培養(yǎng)24~48h，菌落呈金黃色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，周圍有溶血圈。第二十七頁，編輯于星期三：五點三十三分。27致病菌檢驗方法5/9/20243、染色鏡檢挑取可疑菌落涂片染色鏡檢，該菌為革蘭氏陽性球菌，排列成葡萄狀，藍紫色。第二十八頁，編輯于星期三：五點三十三分。28致病菌檢驗方法5/9/20244、甘露醇發(fā)酵試驗取上述分純菌落接種到甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基中，置37℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h。金黃色葡萄球菌應能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸。第二十九頁，編輯于星期三：五點三十三分。29致病菌檢驗方法5/9/20245、血漿凝固酶試驗玻片法：取清潔干燥載玻片上，一端加一滴滅菌生理鹽水，另一端滴加一滴血漿，用接種環(huán)挑取菌落，分別在生鹽及血漿中充分研磨混合。血漿與菌在5min內(nèi)出現(xiàn)團塊或顆粒狀凝塊時，而鹽水滴仍呈均勻混濁無凝固現(xiàn)象都為陽性，如兩者均無凝固現(xiàn)象則為陰性。凡玻片試驗陰性或鹽水滴與血漿滴均有凝固現(xiàn)象，再進行試管凝固酶試驗。第三十頁，編輯于星期三：五點三十三分。30致病菌檢驗方法5/9/20245、血漿凝固酶試驗試管法：吸取1：4新鮮血漿0.5ml，加入待檢菌24h肉湯培養(yǎng)物0.5ml?；靹?，于37℃水浴或恒溫箱中，半小時觀察一次，24h內(nèi)呈現(xiàn)凝塊為陽性。第三十一頁，編輯于星期三：五點三十三分。31致病菌檢驗方法5/9/20245、血漿凝固酶試驗乳膠凝集法金黃色葡萄球菌鑒定試劑盒第三十二頁，編輯于星期三：五點三十三分。32致病菌檢驗方法5/9/2024志賀氏菌依據(jù)：GB4789.5-2012食品安全國家標準食品衛(wèi)生微生物學檢驗志賀氏菌檢驗第三十三頁，編輯于星期三：五點三十三分。33致病菌檢驗方法5/9/2024檢驗程序第三十四頁，編輯于星期三：五點三十三分。34致病菌檢驗方法5/9/2024沙門氏菌依據(jù)：GB4789.4-2010食品安全國家標準食品衛(wèi)生微生物學檢驗沙門氏菌檢驗第三十五頁，編輯于星期三：五點三十三分。35致病菌檢驗方法5/9/2024第三十六頁，編輯于星期三：五點三十三分。36致病菌檢驗方法5/9/2024基本操作步驟1、前增菌：BPW(緩沖蛋白胨水）2、增菌：TTB（四硫磺酸鈉煌綠增菌液）SC（亞硒酸鹽胱氨酸增菌液）3、分離：①BS（亞硫酸鉍瓊脂）XLD（木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂）②HE瓊脂沙門氏菌顯色培養(yǎng)基第三十七頁，編輯于星期三：五點三十三分。37致病菌