微生物檢驗課件

12五月2024微生物檢驗細胞數量的測定方法----七種方法測定微生物生長的方法很多，各種方法均有其優(yōu)缺點，也不是在任何情況下都適用。在微生物學工作中一般常用的是平皿菌落計數法、計數器法和比濁法。至于哪種方法比較適合你，得根據你的具體條件而定。1、計數器測定法即用血細胞計數器進行計數。取一定體積的樣品細胞懸液置于血細胞計數器的計數室內，用顯微鏡觀察計數。由于計數室的容積是一定的(O.1mm3)，因而根據計數器刻度內的細菌數，可計算樣品中的含菌數。本法簡便易行，可立即得出結果。

本法不僅適于細菌計數，也適用于酵母菌及霉菌孢子計數2、電子計數器計數法電子計數器的工作原理是測定小孔中液體的電阻變化，小孔僅能通過一個細胞，當一個細胞通過這個小孔時，電阻明顯增加，形成一個脈沖，自動記錄在電子記錄裝置上。

該法測定結果較準確，但它只識別顆粒大小，而不能區(qū)分是否為細菌。因此，要求菌懸液中不含任何碎片。

3、活細胞計數法

常用的有平板菌落計數法，是根據每個活的細菌能長出一個菌落的原理設計的。取一定容量的菌懸液，作一系列的倍比稀釋，然后將定量的稀釋液進行平板培養(yǎng)，根據培養(yǎng)出的菌落數，可算出培養(yǎng)物中的活菌數。此法靈敏度高，是一種檢測污染活菌數的方法，也是目前國際上許多國家所采用的方法。平板菌落計數法的步驟平板菌落計數法使用該法應注意①一般選取菌落數在30～300之間的平板進行計數，過多或過少均不準確；②為了防止菌落蔓延，影響計數，可在培養(yǎng)基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。

廣泛應用于水、牛奶、食物、藥品等各種材料的細菌檢驗，是最常用的活菌計數法

4、比濁法

比濁法是根據菌懸液的透光量間接地測定細菌的數量。細菌懸浮液的濃度在一定范圍內與透光度成反比，與光密度成正比，所以，可用光電比色計測定菌液，用光密度(OD值)表示樣品菌液濃度。

此法簡便快捷，但只能檢測含有大量細菌的懸浮液，得出相對的細菌數目，對顏色太深的樣品，不能用此法測定。

5、測定細胞重量法

此法分為濕重法和干重法。濕重法系單位體積培養(yǎng)物經離心后將濕菌體進行稱重；干重法系單位體積培養(yǎng)物經離心后，以清水洗凈放人干燥器加熱烘干，使之失去水分然后稱重。

此法適于菌體濃度較高的樣品，是測定絲狀真菌生長量的一種常用方法。6、測定細胞總氮量或總碳量

氮、碳是細胞的主要成分，含量較穩(wěn)定，測定氮、碳的含量可以推知細胞的質量。此法適于細胞濃度較高的樣品。

7、顏色改變單位法（colourchangeunit,簡稱CCU）

這種方法通常用于很小，用一般的比濁法無法計數的微生物，比如支原體等，因為支原體的液體培養(yǎng)物是完全透明的，呈現(xiàn)為清亮透明紅色，因此無法用比濁法來計數，由于支原體固體培養(yǎng)很困難，用cfu法也不容易計數，因此需要用特殊的