液相色譜儀“堵”的三大原因及選購指南

第第頁液相色譜儀“堵”的三大原因及選購指南液相色譜儀“堵”的三大原因

液相色譜儀常見的故障一是堵，二是漏。下面我們來談一下“堵”的情況

“堵”的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常上升，直接原因就是流路不暢。堵塞的緊要位置就是在色譜柱的前端，緊要原因就是流動相里有雜質(zhì)，雜質(zhì)的緊要來源就是細(xì)菌。

“堵”的原因之一：配制流動相時細(xì)菌污染

首先，我們要認(rèn)得到，一般的國產(chǎn)甲醇其實(shí)不需要額外過濾處理，直接使用沒有問題。即使是有些固態(tài)微粒雜質(zhì)，也能在液相流路系統(tǒng)最前端的過濾頭上排出，真正簡單引起問題的，是水中的細(xì)菌。

新制備的純水在室內(nèi)放置幾天就會長菌，而這些細(xì)菌雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報廢。這就是在配制流動相時造成的細(xì)菌污染的原因，解決它的方法很簡單，就是確保水的牢靠性。這里有兩種方式推舉：

（1）較為理想的方式當(dāng)然是購買試驗室專用純水機(jī)，既便利又牢靠，質(zhì)量也放心。唯一的缺點(diǎn)就是價格不菲。

（2）成箱購買市售品牌純潔水，如，500mL一支的怡寶或娃哈哈，這些水的質(zhì)量足以應(yīng)付液相色譜的要求。先隨機(jī)抽取一支做一下細(xì)菌平板試驗，待菌落數(shù)合格方可使用。這樣每次只要單獨(dú)開一支即可，也很便利。每次成本2元左右。

※這里特別指出一個細(xì)節(jié)：在絕大多數(shù)書本上，凡談到配制流動相都會談到最后有一個過濾的步驟。但是從我們長期使用的實(shí)際效果來說，只要能保證水的質(zhì)量，這一步完全可以也應(yīng)當(dāng)去除。

原因有以下三點(diǎn)：

（1）流動相過濾在理論上有好處，但是，實(shí)際操作時由于不可能做到專瓶專用，反而簡單造成的交叉污染，對于配比多而雜的流動相影響更大。

（2）流動相過濾在經(jīng)濟(jì)成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000多元，且過濾器公認(rèn)是比較簡單損壞的設(shè)備。緊要是過濾片的成本太高，一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計算，過濾片的成本會遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于色譜柱的成本。

（3）流動相過濾對于工作效率成本不劃算。使用溶劑過濾器有一個預(yù)清洗、裝備、使用、用后清洗，晾干的過程，至少也有一個小時的時間。這個成本也不能忽視。

（4）在實(shí)際工作未發(fā)覺流動相不過濾會對柱壽命有任何影響。我們起碼有6年時間沒有做過流動相過濾的工作，但是和國內(nèi)同行相比較，在同等使用強(qiáng)度下我們的柱壽命是比較長的。

“堵”的原因之二：使用流動相時的細(xì)菌污染。

指的是：

流動相剛開始沒有長菌，在使用時卻產(chǎn)生了細(xì)菌污染。這緊要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習(xí)慣造成的。

舉簡單的例子：

50％的甲醇水流動相，有兩種使用方式。一種方式是在上機(jī)前就配好混合在一起，另一種方式是在流路A放純甲醇，流路B放純水。

從單純試驗效果來說，后一種有明顯的優(yōu)點(diǎn)：首先是簡單，不需要試驗者另個計算配比混合，其次就是比例精準(zhǔn)，能得到保留時間重復(fù)性極好的試驗效果。

但是，它有一個致命的缺陷，就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細(xì)菌（很多情況下不僅僅用純水作流動相，而是用緩沖鹽溶液，本身就是優(yōu)質(zhì)肥料，細(xì)菌長得更快速），一旦有細(xì)菌柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次試驗都要用新制備的純水，更要求在每次試驗后把水相換掉，換成甲醇沖洗干凈，這一點(diǎn)在實(shí)際工作中很多人意識不強(qiáng)，就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺漏，但是往往這一兩次就足以產(chǎn)生致命的影響。由于液相色譜柱的堵塞是不可逆的。

所以，寧可犧牲小小的保留時間的重復(fù)性，也不要用純水溶液作為流動相的一組。從實(shí)際試驗效果來說，我建議用10％的甲醇水代替純水溶液（以前我做過不同比例甲醇水的細(xì)菌總數(shù)試驗，在5％就基本可以抑菌，在10％及以上就可以完全殺菌了），這樣可以有效排出長細(xì)菌的隱患，既可作流動相，也可沖柱。就算是在配制流動相時會計算得麻煩一些，但是一次麻煩，終身受益。

“堵”的原因之三：不適當(dāng)操作。

常見問題的有以下幾種：

（1）在更換零件時選擇的型號有誤，接口不是很匹配，在擰緊的時候產(chǎn)生變形而使得管路堵塞。

（2）樣品處理液凈化得不干凈，長期會在六通閥和柱之間形成堵塞不暢。

（3）在使用手動六通閥時，有些人可能由于手勁小的原因，轉(zhuǎn)動的不到位，于是造成流路形成了死堵，壓力快速升超群過警戒值。

（4）在使用金屬管路作出廢液管時，應(yīng)當(dāng)注意可以廢液瓶中先放一些水，并把廢液管的出口端放在液面下。假如位于在液相上且試驗使用較高濃度的緩沖鹽溶液，在停機(jī)時可能在出口端結(jié)晶成塊并造成堵塞。這種情況不常見，但卻的確發(fā)生過。

“堵”的原因講了不少，現(xiàn)介紹查堵的方法。

在發(fā)生“堵”的現(xiàn)象后，就需要找出原因，緊要是什么位置發(fā)生了“堵”。注意，絕大多數(shù)情況下，整個系統(tǒng)只會有一