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課時(shí)4動(dòng)物細(xì)胞工程1.[2024江蘇]航天員葉光富和王亞平在天宮課堂上展示了培育的心肌細(xì)胞跳動(dòng)的視頻。下列相關(guān)敘述正確的是(B)A.培育心肌細(xì)胞的器具和試劑都要先進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B.培育心肌細(xì)胞的時(shí)候既須要氧氣也須要二氧化碳C.心肌細(xì)胞在培育容器中通過有絲分裂不斷增殖D.心肌細(xì)胞在神經(jīng)細(xì)胞發(fā)出的神經(jīng)沖動(dòng)的支配下跳動(dòng)解析培育心肌細(xì)胞的器具須要用高壓蒸汽滅菌法滅菌,但是部分培育心肌細(xì)胞所用試劑(如動(dòng)物血清)不能用高壓蒸汽滅菌法滅菌,A錯(cuò)誤;培育心肌細(xì)胞的時(shí)候既須要氧氣(有助于心肌細(xì)胞進(jìn)行有氧呼吸)也須要二氧化碳(有助于維持培育液的pH),B正確;在體外培育條件下,心肌細(xì)胞通過有絲分裂進(jìn)行增殖,但細(xì)胞增殖一段時(shí)間后會(huì)出現(xiàn)接觸抑制等現(xiàn)象,因此不會(huì)不斷增殖,C錯(cuò)誤;心肌細(xì)胞在神經(jīng)細(xì)胞釋放的神經(jīng)遞質(zhì)的支配下跳動(dòng),D錯(cuò)誤。2.[2024山東]一個(gè)抗原往往有多個(gè)不同的抗原確定簇,一個(gè)抗原確定簇只能刺激機(jī)體產(chǎn)生一種抗體,由同一抗原刺激產(chǎn)生的不同抗體統(tǒng)稱為多抗。將非洲豬瘟病毒衣殼蛋白p72注入小鼠體內(nèi),可利用該小鼠的免疫細(xì)胞制備抗p72的單抗,也可以從該小鼠的血清中干脆分別出多抗。下列說法正確的是(D)A.注入小鼠體內(nèi)的抗原純度對單抗純度的影響比對多抗純度的影響大B.單抗制備過程中通常將分別出的漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合C.利用該小鼠只能制備出一種抗p72的單抗D.p72部分結(jié)構(gòu)變更后會(huì)出現(xiàn)原單抗失效而多抗仍有效的狀況解析由題中信息“一個(gè)抗原往往有多個(gè)不同的抗原確定簇,一個(gè)抗原確定簇只能刺激機(jī)體產(chǎn)生一種抗體”可知,由同一抗原刺激機(jī)體可以產(chǎn)生多抗,說明多抗與一個(gè)抗原的多個(gè)不同的抗原確定簇有關(guān),抗原純度對多抗純度的影響大,單抗理論上與抗原純度無關(guān),A錯(cuò)誤;單抗制備過程中,通常將分別出的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,B錯(cuò)誤;一個(gè)抗原往往有多個(gè)不同的抗原確定簇,一個(gè)抗原確定簇只能刺激機(jī)體產(chǎn)生一種抗體,由同一抗原刺激可產(chǎn)生多種不同的抗體,因此利用該小鼠能制備出多種抗p72的單抗,C錯(cuò)誤;p72部分結(jié)構(gòu)變更會(huì)導(dǎo)致部分抗原確定簇變更,原單抗會(huì)失效,而多抗仍有效,D正確。3.[2024海南,13分]以我國科學(xué)家為主的科研團(tuán)隊(duì)將OSNL(即4個(gè)基因Oct4/Sox2/Nanog/Lin28A的縮寫)導(dǎo)入黑羽雞胚成纖維細(xì)胞(CEFs),誘導(dǎo)其重編程為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS),再誘導(dǎo)iPS分化為誘導(dǎo)原始生殖細(xì)胞(iPGCs),然后將iPGCs注射到孵化2.5天的白羽雞胚血管中,最終獲得具有黑羽雞遺傳特性的后代,試驗(yàn)流程如圖?;卮鹣铝袉栴}。(1)CEFs是從孵化9天的黑羽雞胚中分別獲得的,為了獲得單細(xì)胞懸液,雞胚組織剪碎后需用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理。動(dòng)物細(xì)胞培育通常須要在合成培育基中添加血清等自然成分,以滿意細(xì)胞對某些細(xì)胞因子的需求。(2)體外獲得OSNL的方法有基因文庫法、PCR、人工合成法(答出1種即可)。若要在CEFs中表達(dá)外源基因的蛋白,需構(gòu)建基因表達(dá)載體,載體中除含有目的基因和標(biāo)記基因外,還須有啟動(dòng)子和終止子等。啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,有了它才能驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA,最終表達(dá)出所須要的蛋白質(zhì)。(3)iPS細(xì)胞和iPGCs細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能不同的根本緣由是基因的選擇性表達(dá)。(4)誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)與體細(xì)胞核移植技術(shù)的主要區(qū)分是誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)是將已分化的細(xì)胞誘導(dǎo)為類似胚胎干細(xì)胞的一種細(xì)胞(iPS),再誘導(dǎo)iPS分化為誘導(dǎo)原始生殖細(xì)胞(iPGCs)的技術(shù);體細(xì)胞核移植技術(shù)是將動(dòng)物一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中,使這個(gè)重新組合的細(xì)胞發(fā)育成新胚胎,繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的技術(shù)。(5)該試驗(yàn)流程中用到的生物技術(shù)有基因工程、動(dòng)物細(xì)胞培育(答出2點(diǎn)即可)。解析(1)進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培育時(shí),動(dòng)物組織剪碎后須要用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理,以獲得單細(xì)胞懸液。運(yùn)用合成培育基培育動(dòng)物細(xì)胞時(shí),通常須要添加血清等自然成分,以滿意細(xì)胞對某些細(xì)胞因子的需求。(2)體外獲得目的基因的方法有多種,如基因文庫法、PCR、人工合成法等。基因表達(dá)載體的組成包括目的基因、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子等結(jié)構(gòu),啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,有了啟動(dòng)子才能驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA,最終表達(dá)出所須要的蛋白質(zhì)。(3)iPGCs細(xì)胞是由iPS細(xì)胞分化而來的,兩者的遺傳物質(zhì)相同,兩者的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能不同的根本緣由是基因的選擇性表達(dá)。(4)誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)與體細(xì)胞核移植技術(shù)存在明顯的區(qū)分,主要表現(xiàn)在誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)是將已分化的細(xì)胞誘導(dǎo)為類似胚胎干細(xì)胞的一種細(xì)胞(iPS),再誘導(dǎo)iPS分化為誘導(dǎo)原始生殖細(xì)胞(iPGCs)的技術(shù);而體細(xì)胞核移植技術(shù)是將動(dòng)物一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中,使這個(gè)重新組合的細(xì)胞發(fā)育成新胚胎,繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的技術(shù)。(5)分析題意可知,該試驗(yàn)流程中用到的生物技術(shù)有基因工程、動(dòng)物細(xì)胞培育等。4.[2024遼寧節(jié)選,6分]某抗膜蛋白治療性抗體藥物研發(fā)過程中,須要表達(dá)N蛋白胞外段,制備相應(yīng)的單克隆抗體,增加其對N蛋白胞外段特異性結(jié)合的實(shí)力。Ⅱ.N蛋白胞外段單克隆抗體制備,流程如圖。(3)用N蛋白胞外段作為抗原對小鼠進(jìn)行免疫后,取小鼠脾組織用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理,制成細(xì)胞懸液,置于含有混合氣體的CO2培育箱中培育,離心收集小鼠的B淋巴細(xì)胞,與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。(4)用選擇性培育基對融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選,獲得雜交瘤細(xì)胞,將其接種到96孔板,進(jìn)行克隆化培育。用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測每孔中的抗體,篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體,又能大量增殖的單克隆雜交瘤細(xì)胞株,經(jīng)體外擴(kuò)大培育,收集細(xì)胞培育液,提取單克隆抗體。(5)利用N蛋白胞外段抗體與藥物結(jié)合,形成抗體—藥物偶聯(lián)物(ADC),實(shí)現(xiàn)特異性治療。解析(3)用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理小鼠脾組織,可使組織分散成單個(gè)細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液,可將細(xì)胞懸液置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培育箱中進(jìn)行培育。(4)運(yùn)用選擇性培育基篩選出雜交瘤細(xì)胞后,將其接種到96孔板,進(jìn)行克隆化培育。用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測每孔中的抗體,最終獲得既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體,又能大量增殖的單克隆雜交瘤細(xì)胞株,經(jīng)擴(kuò)大
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