臨檢血檢類儀器專家講座

臨檢血檢類

儀器臨檢血檢類儀器第1頁(yè)教學(xué)重點(diǎn)：傳統(tǒng)儀器—生物顯微鏡當(dāng)代儀器—血液分析儀當(dāng)代儀器—尿液分析儀臨檢血檢類儀器第2頁(yè)教學(xué)重點(diǎn)：

傳統(tǒng)儀器—生物顯微鏡當(dāng)代儀器—血液分析儀當(dāng)代儀器—尿液分析儀臨檢血檢類儀器第3頁(yè)HansJanssen臨檢血檢類儀器第4頁(yè)1665年，羅伯特·虎克觀察到細(xì)胞RobertHook(1635-1703)臨檢血檢類儀器第5頁(yè)

Leeuwenhoek(1632-1723)Malpighi（1628-1694）臨檢血檢類儀器第6頁(yè)19世紀(jì)70年代，德國(guó)人阿貝奠定了顯微鏡成像原理ErnstAbbe（1840-1905）顯微鏡成像理論提出大大促進(jìn)了顯微鏡制造和顯微觀察技術(shù)快速發(fā)展臨檢血檢類儀器第7頁(yè)偏光顯微鏡熒光顯微鏡相差顯微鏡臨檢血檢類儀器第8頁(yè)掃描式電子顯微鏡SEM透射式電子顯微鏡TEM臨檢血檢類儀器第9頁(yè)臨檢血檢類儀器第10頁(yè)

重點(diǎn)1：顯微鏡原理顯微鏡成像原理顯微鏡主要光學(xué)技術(shù)參數(shù)光學(xué)顯微鏡是由兩組透鏡組成光學(xué)折射成像系統(tǒng)其成像原理見圖：臨檢血檢類儀器第11頁(yè)光學(xué)原理物體像2像1F1’與F2之間距離稱為光學(xué)筒長(zhǎng)臨檢血檢類儀器第12頁(yè)

重點(diǎn)1：顯微鏡原理顯微鏡成像原理顯微鏡主要光學(xué)技術(shù)參數(shù)數(shù)值孔徑NA分辨率d放大率M焦點(diǎn)深度Depthoffield視場(chǎng)Fieldofview工作距離WD臨檢血檢類儀器第13頁(yè)數(shù)值孔徑定義：數(shù)值孔徑(numericalaperture,NA)又稱鏡口率，指物鏡前介質(zhì)折射率(n)和物鏡孔徑角(α)半數(shù)正弦乘積，與顯微鏡分辨率成正比表示公式：NA=n×sinα/2N：物鏡與樣本之間介質(zhì)（空氣、水、香柏油等）折射率α：物鏡孔徑角，即從物鏡光軸上物點(diǎn)發(fā)出光線與物鏡前透鏡有效直徑所形成張角臨檢血檢類儀器第14頁(yè)分辨率定義：分辨率是指顯微鏡分辨兩個(gè)物點(diǎn)最小間距，顯微鏡分辨間距越小，顯微鏡分辨率就越高，所以分辨率普通以分辨距離(d)來(lái)表示表示公式：d=0.61λ/N.Aλ：為光線波長(zhǎng)臨檢血檢類儀器第15頁(yè)放大率定義：放大率(magnification)是指物鏡放大率和目鏡放大率乘積。表示公式：M總=M目×M物注意：當(dāng)顯微鏡分辨率不高時(shí)，假如只增大放大倍數(shù)，那么得到圖象即便輪廓很大，細(xì)節(jié)也會(huì)不清所以使用顯微鏡時(shí)，應(yīng)該注意顯微鏡有效放大率表示公式：M有效=d肉眼/d臨檢血檢類儀器第16頁(yè)其它技術(shù)參數(shù)焦深：又稱景深。即用顯微鏡觀察某一平面時(shí)，不但位于平面上各點(diǎn)能夠看清楚，而且平面上下一定厚度內(nèi)各點(diǎn)也能看清楚，這個(gè)厚度就是焦深。焦深與總放大倍數(shù)及物鏡分辨率成反比關(guān)系視場(chǎng)：又稱為視野。即顯微鏡觀察時(shí)所看到樣本圓形范圍。其大小由視場(chǎng)光柵直徑和放大率大小來(lái)決定。視野直徑大小與視場(chǎng)光柵直徑成正比，與放大率成反比工作距離：指物鏡前透鏡表面到被觀察樣本表面距離NA大高倍物鏡，其工作距離越小臨檢血檢類儀器第17頁(yè)重點(diǎn)2：顯微鏡結(jié)構(gòu)顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)：目鏡物鏡照明系統(tǒng)臨檢血檢類儀器第18頁(yè)目鏡目鏡由兩組透鏡組成：

上端“接目鏡”下端“場(chǎng)鏡”目鏡分類：

惠更斯目鏡(Huygenseyepiece)

冉斯登目鏡(Ramsdeneyepiece)賠償目鏡（K）平場(chǎng)目鏡（P）臨檢血檢類儀器第19頁(yè)物鏡物鏡筒上標(biāo)識(shí)：

放大倍數(shù)、數(shù)值孔徑(NA)機(jī)械筒長(zhǎng)、蓋玻片厚度物鏡分類：

消色差物鏡(Ach)

復(fù)消色差物鏡(Apo)平場(chǎng)消色差物鏡（Plan）平場(chǎng)復(fù)消色差物鏡（PlanApo）臨檢血檢類儀器第20頁(yè)

重點(diǎn)2：顯微鏡結(jié)構(gòu)顯微鏡機(jī)械系統(tǒng)：目鏡筒物鏡轉(zhuǎn)換器鏡座和鏡臂載物臺(tái)調(diào)焦系統(tǒng)臨檢血檢類儀器第21頁(yè)

重點(diǎn)3：顯微鏡操作臨檢血檢類儀器第22頁(yè)瞳距調(diào)整臨檢血檢類儀器第23頁(yè)屈光度調(diào)整調(diào)整臨檢血檢類儀器第24頁(yè)粗調(diào)松緊調(diào)整旋鈕臨檢血檢類儀器第25頁(yè)聚光鏡中心調(diào)整⑤光軸中心調(diào)整螺釘③視場(chǎng)光欄③孔徑光欄②10X物鏡①標(biāo)本④聚光鏡升降旋鈕臨檢血檢類儀器第26頁(yè)孔徑光欄調(diào)整N.A聚=(0.6-0.8)N.A物臨檢血檢類儀器第27頁(yè)孔徑光欄開度與圖象100%70%30%臨檢血檢類儀器第28頁(yè)顯微鏡維護(hù)經(jīng)常性維護(hù)1．持鏡時(shí)必須是右手握臂、左手托座姿勢(shì)，不可單手提取，以免零件脫落或遭受碰撞。2．輕拿輕放，不可把顯微鏡放置在試驗(yàn)臺(tái)邊緣，以免碰翻落地。3．保持顯微鏡清潔，光學(xué)和照明部分只能用擦鏡紙擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，機(jī)械部分用布擦拭。臨檢血檢類儀器第29頁(yè)顯微鏡維護(hù)使用中維護(hù)4．水滴、酒精或其它藥品切勿接觸顯微鏡鏡頭和鏡臺(tái)，假如沾污應(yīng)馬上擦凈。5．放置玻片標(biāo)本時(shí)要對(duì)準(zhǔn)通光孔中央，且不能反放玻片，預(yù)防壓壞玻片或碰壞物鏡。6．不要隨意取下顯微鏡目鏡，以預(yù)防塵土落入物鏡，也不要任意拆卸各種零件，以防損壞。臨檢血檢類儀器第30頁(yè)顯微鏡維護(hù)其它注意事項(xiàng)7．顯微鏡使用完成后，必須復(fù)原才能放回鏡箱內(nèi)，其步驟是：取下標(biāo)本片，轉(zhuǎn)動(dòng)旋轉(zhuǎn)器使顯微鏡鏡頭離開通光孔，下降鏡臺(tái)，下降聚光器、光亮度調(diào)制最小，關(guān)閉光源，推片器回位，蓋上綢布和外罩，放回試驗(yàn)臺(tái)柜內(nèi)。最終填寫使用記錄表。臨檢血檢類儀器第31頁(yè)清潔工具臨檢血檢類儀器第32頁(yè)擦拭方法臨檢血檢類儀器第33頁(yè)教學(xué)重點(diǎn)：傳統(tǒng)儀器—生物顯微鏡

當(dāng)代儀器—血液分析儀當(dāng)代儀器—尿液分析儀臨檢血檢類儀器第34頁(yè)1855年創(chuàng)造了血細(xì)胞計(jì)數(shù)板1、傳統(tǒng)血液學(xué)檢驗(yàn)：顯微鏡手工檢驗(yàn)法。檢驗(yàn)人員費(fèi)時(shí)費(fèi)勁，且可靠性和結(jié)果準(zhǔn)確性受到人為一定影響。臨檢血檢類儀器第35頁(yè)2、50年代初，庫(kù)爾特弟兄利用電阻抗原理設(shè)計(jì)了第一臺(tái)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀－CoulterModelA型。能計(jì)數(shù)血液中紅細(xì)胞和白細(xì)胞，突破了手工模式，開創(chuàng)血液分析儀新時(shí)代Coulter（1913-1998）臨檢血檢類儀器第36頁(yè)1962年日本Sysmex企業(yè)開始生產(chǎn)第一臺(tái)血球計(jì)數(shù)儀。型號(hào)為：CC－10013、60年代，血液分析儀在血細(xì)胞檢測(cè)參數(shù)數(shù)量上有了很大提升，70年代計(jì)算機(jī)技術(shù)發(fā)展，使血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀增加了血小板計(jì)數(shù)，至此，儀器已能夠進(jìn)行全血細(xì)胞計(jì)數(shù)（CBC）。臨檢血檢類儀器第37頁(yè)SysmexF820半自動(dòng)4、80年代，開發(fā)了白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞分布寬度等新參數(shù)。1980年Coulter企業(yè)推出第一臺(tái)二分類血液分析儀CoulterS-plus，之后S-plusIV等三分類血液分析儀問(wèn)世臨檢血檢類儀器第38頁(yè)5、90年代，將激光，射頻，化學(xué)染色等技術(shù)紛紛應(yīng)用于對(duì)細(xì)胞特征分析，出現(xiàn)了自動(dòng)五分類血液分析儀，推進(jìn)了血液普通檢驗(yàn)自動(dòng)化深入發(fā)展臨檢血檢類儀器第39頁(yè)檢測(cè)參數(shù)縮寫WBC白細(xì)胞總數(shù)

PDW血小板體積分布寬度RBC紅細(xì)胞總數(shù)

PCT血小板比積HGB血紅蛋白濃度

PLT血小板總數(shù)HCT紅細(xì)胞比積

MPV平均血小板體積MCV平均紅細(xì)胞體積

RET網(wǎng)織紅細(xì)胞MCH平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量HFR高熒光強(qiáng)度RETMCHC平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度MFR中熒光強(qiáng)度RETRDW紅細(xì)胞體積分布寬度LFR低熒光強(qiáng)度RETHDW血紅蛋白分布寬度臨檢血檢類儀器第40頁(yè)重點(diǎn)1：基本原理

光學(xué)檢測(cè)原理電學(xué)檢測(cè)原理光散色檢測(cè)比色測(cè)定電阻抗原理電導(dǎo)原理臨檢血檢類儀器第41頁(yè)Coulter原理臨檢血檢類儀器第42頁(yè)臨檢血檢類儀器第43頁(yè)白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)1、血液先經(jīng)稀釋和溶血?jiǎng)┨幚砣苎獎(jiǎng)┳饔?使紅細(xì)胞快速溶解;使白細(xì)胞胞漿經(jīng)過(guò)膜滲出,胞膜緊貼于胞核或顆粒周圍;經(jīng)處理后白細(xì)胞與自然體積無(wú)關(guān),含有顆粒粒細(xì)胞體積大于無(wú)顆粒單核及淋巴細(xì)胞.臨檢血檢類儀器第44頁(yè)2、儀器將35-450fl血細(xì)胞分為256個(gè)通道，每個(gè)通道為1.64fl，依據(jù)細(xì)胞大小分置于不一樣通道中從而顯示白細(xì)胞體積分布直方圖。白細(xì)胞按照體積可分為三群：35-90fl：小細(xì)胞群,淋巴細(xì)胞為主;90-160fl：中間細(xì)胞群,包含單核細(xì)胞,嗜酸性粒細(xì)胞,嗜堿性粒細(xì)胞,幼稚細(xì)胞或白血病細(xì)胞;135-450fl：大細(xì)胞群,主要為中性粒細(xì)胞.臨檢血檢類儀器第45頁(yè)臨檢血檢類儀器第46頁(yè)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)經(jīng)稀釋后紅細(xì)胞經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)小孔時(shí)產(chǎn)生對(duì)應(yīng)脈沖，脈沖高低代表紅細(xì)胞體積，脈沖數(shù)量為紅細(xì)胞數(shù)，脈沖高度疊加換算為紅細(xì)胞比積，(有儀器先計(jì)算MCV再乘以紅細(xì)胞數(shù))稀釋血液中含有白細(xì)胞，因其百分比較小，可忽略。但在白血病及嚴(yán)重感染患者并伴有嚴(yán)重貧血時(shí)，需去掉白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果。36~360fl，256個(gè)通道，范圍在50~200fl。臨檢血檢類儀器第47頁(yè)各項(xiàng)紅細(xì)胞參數(shù)MCV，MCH，MCHC，依據(jù)儀器檢測(cè)紅細(xì)胞數(shù)，紅細(xì)胞比積和血紅蛋白含量計(jì)算而來(lái)；RDW：紅細(xì)胞體積分布寬度，反應(yīng)紅細(xì)胞大小不等程度，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)近萬(wàn)個(gè)紅細(xì)胞數(shù)據(jù)求得，以RDW-CV和RDW-SD匯報(bào)。臨檢血檢類儀器第48頁(yè)血小板測(cè)定與紅細(xì)胞在一個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)；當(dāng)各種細(xì)胞所產(chǎn)生脈沖數(shù)字化后，依據(jù)不一樣閾值，分別計(jì)算血小板和紅細(xì)胞數(shù)目分別儲(chǔ)存于64個(gè)通道，范圍在2~30fl依據(jù)血小板體積大小計(jì)算出血小板平均體積（MPV）臨檢血檢類儀器第49頁(yè)血紅蛋白測(cè)定加溶血?jiǎng)┖?，血紅蛋白釋放，與轉(zhuǎn)化劑結(jié)合形成血紅蛋白衍生物,在特定波長(zhǎng)下比色，用光電比色法求出血紅蛋白含量。ICSH推薦使用氰化高鐵法。校正儀器須以HiCN值為標(biāo)準(zhǔn)，HiCN最大吸收峰在540nm。因?yàn)榍杌锒拘?，非氰化溶血?jiǎng)⊿DS）應(yīng)用日益廣泛。臨檢血檢類儀器第50頁(yè)光散射原理FSCSensorSSCSensorLaser全血標(biāo)本稀釋后，在鞘液作用下，形成細(xì)胞流，細(xì)胞被排成單列快速經(jīng)過(guò)光學(xué)檢測(cè)區(qū)，細(xì)胞與測(cè)定光速相交時(shí)，因?yàn)檠?xì)胞透光度與鞘液不一樣，引發(fā)光散射改變，引發(fā)脈沖信號(hào)，信號(hào)大小與細(xì)胞體積相關(guān)，脈沖數(shù)量代表細(xì)胞數(shù)量。臨檢血檢類儀器第51頁(yè)激光器激光器激光探測(cè)器大顆粒小顆粒前散射光示意圖臨檢血檢類儀器第52頁(yè)激光器激光器側(cè)向散射光探測(cè)器復(fù)雜顆粒簡(jiǎn)單顆粒側(cè)向散射光示意圖臨檢血檢類儀器第53頁(yè)容量,電導(dǎo),光散射(VCS技術(shù))血細(xì)胞保持自然形態(tài)V:電阻抗原理測(cè)細(xì)胞體積大小C:高頻電磁探針測(cè)量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu),核質(zhì)比,細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成份.S:細(xì)胞表面光散射特點(diǎn),判別細(xì)胞內(nèi)部顆粒構(gòu)型和顆粒質(zhì)量區(qū)分這種技術(shù)是Coulter企業(yè)推出專有方法，應(yīng)用VCS技術(shù)血液細(xì)胞分析儀主要有MAXM、STKS、HMX等型號(hào)臨檢血檢類儀器第54頁(yè)

采取阻抗、激光散色和熒光染色技術(shù)：主要應(yīng)用在Sysmex研制和開發(fā)SF-3000、SE-9000、SE-9500、XE-2100、XT-1800等系列血液分析儀中激光散色和細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)：該類型儀器最新型號(hào)為Bayer企業(yè)Advia120型和Advia2120型臨檢血檢類儀器第55頁(yè)多角度偏振光散色法：該類型儀器型號(hào)為ABBOTT企業(yè)CD-3200，CD-3500型和CD3700，CD4000等型采取圖象分析單純細(xì)胞分類儀：該類型儀器以日本日立企業(yè)生產(chǎn)8200為代表。這類儀器要求大型計(jì)算機(jī)系統(tǒng)支持臨檢血檢類儀器第56頁(yè)檢測(cè)流程質(zhì)控標(biāo)本測(cè)定

儀器準(zhǔn)備：開啟;自檢及清洗;空白計(jì)數(shù)血液標(biāo)本測(cè)定結(jié)果分析與判定采抗凝血、稀釋、制血涂片臨檢血檢類儀器第57頁(yè)儀器使用和維護(hù)標(biāo)本采集與儲(chǔ)存良好使用環(huán)境試劑使用注意儀器檢測(cè)不足工作人員素質(zhì)和責(zé)任心抗凝劑使用臨檢血檢類儀器第58頁(yè)儀器本身保養(yǎng)小孔堵塞問(wèn)題燃燒電路及高壓反沖技術(shù)故障自檢功效－開機(jī)循環(huán)管道和進(jìn)樣針自動(dòng)清洗1.運(yùn)行樣本間自動(dòng)清洗2.測(cè)試完成后停機(jī)自動(dòng)進(jìn)行全系統(tǒng)漂洗3.每次計(jì)數(shù)循環(huán)結(jié)束,自動(dòng)進(jìn)行循環(huán)清洗計(jì)數(shù)孔4.長(zhǎng)時(shí)間不用機(jī)，自動(dòng)進(jìn)入靜止?fàn)顟B(tài)5.關(guān)機(jī)沖洗程序臨檢血檢類儀器第59頁(yè)教學(xué)重點(diǎn)：傳統(tǒng)儀器—生物顯微鏡當(dāng)代儀器—血液分析儀

當(dāng)代儀器—尿液分析儀臨檢血檢類儀器第60頁(yè)儀器發(fā)展史1、1827年，Bright最早把尿液檢驗(yàn)用于患者診療和護(hù)理成為尿液常規(guī)分析最早期開拓者和支持者2、20世紀(jì)40年代，逐步出現(xiàn)了尿液干化學(xué)試劑帶法，成為篩檢健康人或患者尿液首選方法。1956年,美Ames企業(yè)生產(chǎn)第一條尿糖試帶-Clinistrix；1957年,尿蛋白試帶-Albustix；1958年,葡萄糖尿蛋白二聯(lián)試帶-Uristix；1959年,Glu-Pro-pH三聯(lián)試帶-Combistix;十聯(lián)試帶-Multistix

；11項(xiàng)參數(shù)試劑帶3、70年代，第一臺(tái)尿液試紙帶檢測(cè)自動(dòng)化學(xué)分析儀問(wèn)世，從此在相當(dāng)程度上改變了傳統(tǒng)尿液檢驗(yàn)繁瑣費(fèi)時(shí)操作方式，成為當(dāng)代尿液分析標(biāo)志；臨檢血檢類儀器第61頁(yè)儀器發(fā)展史

4、80年代，伴隨色譜和免疫技術(shù)發(fā)展，生產(chǎn)出含有檢測(cè)敏感性和特異性極高單克隆抗體試劑帶；80年代中后期，韓國(guó)采取比較尖端光電轉(zhuǎn)換元件CCD(電荷耦合器件)生產(chǎn)出技術(shù)先進(jìn)Uriscan-S300型自動(dòng)11項(xiàng)尿液分析儀。5、90年代，尿液分析儀自動(dòng)化程度和性能都得到突飛猛進(jìn)發(fā)展。Bayer企業(yè)推出Clinitek-atlas型全自動(dòng)尿液干化學(xué)分析儀，含有條碼識(shí)別系統(tǒng)，雙探頭讀數(shù)裝置，能儲(chǔ)存500個(gè)結(jié)果和200個(gè)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù),自動(dòng)打印檢驗(yàn)時(shí)間、日期等功效。臨檢血檢類儀器第62頁(yè)儀器分類按工作方式濕式尿液分析儀干式尿液分析儀按測(cè)試項(xiàng)目按自動(dòng)化程度半自動(dòng)尿液分析儀:8/9/10/11全自動(dòng)尿液分析儀:10/11項(xiàng)8項(xiàng):蛋白/糖/pH/酮體/膽紅質(zhì)/膽原/隱血/亞硝酸鹽9項(xiàng):8項(xiàng)/尿白細(xì)胞10項(xiàng):9項(xiàng)/尿比重11項(xiàng):10項(xiàng)/維生素C臨檢血檢類儀器第63頁(yè)重點(diǎn)1：試劑帶第一層尼龍膜起保護(hù)作用，預(yù)防大分子物質(zhì)污染；第二層絨制層，包含碘酸鹽層和試劑層，碘酸鹽層可破壞維生素C等干擾物質(zhì)，試劑層含有機(jī)試劑成份，主要與尿液中所測(cè)定物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生顏色改變；第三層是固定有試劑吸水層，可使尿液均勻快速地浸入，并能抑制尿液流到相鄰反應(yīng)區(qū)；最終一層選取尿液不浸潤(rùn)塑料片作為支持體。臨檢血檢類儀器第64頁(yè)基本結(jié)構(gòu)機(jī)械系統(tǒng):

將待測(cè)試劑帶傳送到預(yù)定檢測(cè)位置，檢測(cè)后將試劑帶傳送到廢物盒中光學(xué)系統(tǒng):

光學(xué)系統(tǒng)通常包括光源、單色處理、光電轉(zhuǎn)換三部分。光線照射到反應(yīng)表面產(chǎn)生反射光，反射光強(qiáng)度與各個(gè)項(xiàng)目標(biāo)反應(yīng)顏色成反比。電路系統(tǒng):

將轉(zhuǎn)換后電信號(hào)放大,經(jīng)模