醫(yī)院感染監(jiān)測

醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)消毒/滅菌效果監(jiān)測麥苗一、監(jiān)測依據(jù)2006年8月2監(jiān)測的目的是為了控制感染。揭示醫(yī)院感染的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律及醫(yī)院感染管理的現(xiàn)狀，為控制醫(yī)院感染提供依據(jù)、方向和途徑。不以控制為目的監(jiān)測是無意義的監(jiān)測，不以監(jiān)測為依據(jù)的控制是盲目的控制。2006年8月3醫(yī)院消毒是預(yù)防醫(yī)院內(nèi)感染的重要措施之一，消毒效果的監(jiān)測是評(píng)價(jià)其消毒設(shè)備、消毒藥劑、消毒方法、消毒效果是否達(dá)標(biāo)的唯一手段。2006年8月4監(jiān)測人員需經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)。掌握一定的消毒知識(shí)，熟悉消毒設(shè)備和藥劑性能，具備熟練的檢驗(yàn)技能。選擇合理的采樣時(shí)間。遵循嚴(yán)格的無菌操作。醫(yī)院消毒效果監(jiān)測時(shí)需遵循以下原則：2006年8月5醫(yī)院消毒/滅菌效果監(jiān)測相關(guān)的法律法規(guī)、規(guī)范、標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定：《中華人民共和國傳染病防治法》《中華人民共和國傳染病防治法實(shí)施辦法》《醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理?xiàng)l例》《醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理?xiàng)l例實(shí)施細(xì)則》《消毒管理辦法》2006年8月6《醫(yī)院感染管理規(guī)范（試行）》old

《醫(yī)院感染管理辦法（2006）》new《消毒技術(shù)規(guī)范》《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》《消毒與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)》《醫(yī)院消毒供應(yīng)室驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)（試行）》《內(nèi)鏡清潔消毒技術(shù)操作規(guī)范（2004）》《醫(yī)療機(jī)構(gòu)口腔診療器械消毒技術(shù)操作規(guī)范》

2006年8月7二、監(jiān)測要點(diǎn)監(jiān)測頻率:

年度綜合性監(jiān)測每年至少一次監(jiān)測內(nèi)容:1.醫(yī)院感染病例監(jiān)測（醫(yī)院感染發(fā)病率、醫(yī)院感染罹患率、漏報(bào)率）2.對(duì)醫(yī)院內(nèi)部日常監(jiān)測檢查（規(guī)章制度、報(bào)告、檢驗(yàn)單、學(xué)習(xí)培訓(xùn)等）2006年8月9

3.

消毒/滅菌效果監(jiān)測消毒/滅菌物品監(jiān)測：消毒物品不得檢出致病性微生物，滅菌物品不得檢出任何微生物。使用中的消毒劑/滅菌劑：進(jìn)行生物和化學(xué)監(jiān)測。壓力蒸汽滅菌器：進(jìn)行工藝監(jiān)測、化學(xué)監(jiān)測和生物監(jiān)測。紫外線消毒：紫外燈管照射強(qiáng)度監(jiān)測。血液凈化系統(tǒng)：透析入口液、透析出口液監(jiān)測。2006年8月104.環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測:重點(diǎn)部門（對(duì)手術(shù)室、重癥監(jiān)護(hù)病房/室（ICU）、產(chǎn)房、母嬰室、新生兒病房、骨髓移植病房、血液病房、血液透析室、供應(yīng)室無菌間、治療室、換藥室等）空氣消毒效果的監(jiān)測物體表面消毒效果的監(jiān)測醫(yī)護(hù)人員手消毒效果的監(jiān)測2006年8月11三、監(jiān)測采樣

空氣采樣:采樣時(shí)間:消毒處理后與進(jìn)行醫(yī)療活動(dòng)之前這段時(shí)間內(nèi)采樣。布點(diǎn)方法：高度：與地面垂直高度150cm布點(diǎn)數(shù)：室內(nèi)面積≤30m2，取室內(nèi)一條對(duì)角線上的3點(diǎn)（中心一點(diǎn)，兩端各距墻1m兩點(diǎn)）；室內(nèi)面積＞30m2，取五點(diǎn)（中心一點(diǎn)，東、西、南、北均距墻1m的四點(diǎn)）2006年8月13采樣方法：一般用9cm直徑普通營養(yǎng)瓊脂平板在采樣點(diǎn)暴露5分鐘后送檢培養(yǎng)。注意事項(xiàng)：采樣平板直徑不同，以后計(jì)算公式代入值不同。平板擺放如取一條對(duì)角線，避免離門近的一條。采樣前，不要有人員在室內(nèi)走動(dòng)，關(guān)閉門窗，至少靜態(tài)10分鐘以后再采。工作人員不要靠近自動(dòng)門，以免影響監(jiān)測結(jié)果。2006年8月142006年8月15物體表面采樣：采樣時(shí)間：消毒處理后4小時(shí)內(nèi)進(jìn)行采樣。采樣面積：被采表面＜100cm2,取全部表面；被采表面＞100cm2,取100cm2。2006年8月16采樣方法：用5cm×5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格版，放在被檢物體表面，用浸有無菌采樣液的棉拭子，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，連續(xù)采樣1-4個(gè)規(guī)格板面積，去掉手接觸部分，將棉拭子放入10ml采樣液的試管中送檢。門把手等小型物體則采用棉拭子直接涂抹物體的方法采樣。2006年8月175cm橫豎來回各五次2006年8月18注意事項(xiàng)：規(guī)格板要干熱法滅菌處理。不規(guī)則物體表面的采樣，盡量準(zhǔn)確估算實(shí)際面積。2006年8月192006年8月20醫(yī)護(hù)人員手采樣采樣時(shí)間：消毒后從事診療操作前進(jìn)行采樣。采樣方法：被檢人五指并攏，手心向上。將浸有采樣液的棉拭子從指根到指端來回涂擦各兩次（一只手涂擦面積按30cm2計(jì)算），并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子，去掉手接觸部位，裝入試管內(nèi)送檢。2006年8月21注意事項(xiàng)：不同的洗手法，標(biāo)準(zhǔn)要求不同。雙手都要采樣。洗手后不要接觸未消毒的物品。用消毒巾擦干，或控干手上的水分。2006年8月22醫(yī)療用品采樣采樣時(shí)間在消毒/滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。采樣方法可用破壞性方法取樣的醫(yī)療用品，如輸液器按《無菌檢查法》執(zhí)行。不能用破壞性方法取樣的醫(yī)療用品，用浸有采樣液的棉拭子在被檢物體表面涂抹采樣，被采表面＜100cm2,取全部表面；被采表面＞100cm2,取100cm2。2006年8月23注意事項(xiàng)滅菌物品采樣有環(huán)境要求。接觸皮膚和黏膜的醫(yī)療用品，消毒標(biāo)準(zhǔn)要求不同。2006年8月24內(nèi)窺鏡采樣消毒后內(nèi)窺鏡的采樣方法：內(nèi)窺鏡（如胃鏡、腸鏡）內(nèi)腔面：用20ml無菌注射器抽取10ml含相應(yīng)中和劑的緩沖液，從內(nèi)鏡活檢口注入，用15ml無菌試管從活檢出口收集。內(nèi)窺鏡外表面：按醫(yī)療用品表面方法采樣，從活檢出口向上計(jì)算面積，采集100cm2。2006年8月25從活檢出口接從內(nèi)鏡活檢孔口注入2006年8月26血液透析系統(tǒng)采樣標(biāo)本采集：單一透析系統(tǒng)：采樣點(diǎn)為透析液進(jìn)口及出口，消毒后用無菌試管接原液10ml即可。疑有透析液污染或嚴(yán)重感染病例時(shí)，應(yīng)增加采樣點(diǎn)，如：原水口、軟化水出口、反滲水出口、透析液配液口。監(jiān)測時(shí)間：每月一次。檢查結(jié)果超過參考標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，須再復(fù)查。懷疑或確定病人在治療中有熱原反應(yīng)或菌血癥時(shí)，應(yīng)隨時(shí)檢測。2006年8月27消毒/滅菌劑采樣采樣時(shí)間:正在使用中的消毒/滅菌劑。采樣方法：用10ml無菌試管吸取一定量消毒劑，注入干燥無菌試管，待檢。監(jiān)測頻率：含氯消毒劑、過氧乙酸等每日監(jiān)測一次2%戊二醛每周一次（重點(diǎn)科室每日監(jiān)測）2006年8月28采樣中常用溶液中和劑的選擇中和劑是中和殘留消毒劑的藥物，其作用是正確測定化學(xué)消毒劑的殺菌能力，防止消毒后殘余消毒劑繼續(xù)和微生物作用。中和劑的使用是要經(jīng)過鑒定篩選的。理想中的中和劑標(biāo)準(zhǔn)是：能有效中和相應(yīng)的消毒劑及其對(duì)細(xì)菌有害的產(chǎn)物。中和劑本身及其反應(yīng)物對(duì)細(xì)菌無害。中和劑與消毒劑無協(xié)同作用。對(duì)培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分無破壞作用，不形成對(duì)細(xì)菌有害的副產(chǎn)物，并且不影響培養(yǎng)基的透明度。2006年8月30先將消毒劑1.0mL與中和劑溶液9.0mL混合，制成中和產(chǎn)物溶液。對(duì)于醇類與酚類消毒劑，稀釋液用普通營養(yǎng)肉湯即可；對(duì)于含氯消毒劑、含碘消毒劑、過氧化物消毒劑，需在肉湯中加入0.1％硫代硫酸鈉；對(duì)于洗必泰、季銨鹽類消毒劑，需在肉湯中加入3％（W/V）吐溫80和0.3％卵磷脂；對(duì)于醛類消毒劑，需在肉湯中加入0.3％甘氨酸；對(duì)于含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑，需在肉湯中加入3％（W/V）吐溫80。以中和被檢樣液的殘效作用。2006年8月31無水磷酸氫二鈉2.83g磷酸二氫鉀1.36g蒸餾水加至1000ml將各成分加入到1000ml蒸餾水中，待完全溶解后，調(diào)pH至7.2～7.4，于121℃壓力蒸汽滅菌20min備用。磷酸鹽緩沖液

（PBS，0.03mol/L，pH7.2）2006年8月32無菌檢驗(yàn)用洗脫液吐溫-801g蛋白胨10g氯化鈉8.5g蒸餾水1000ml將各成分加入到1000ml0.03mol/LPBS液中，加熱溶解后調(diào)pH至7.2～7.4，于121℃壓力蒸汽滅菌20min備用。2006年8月33營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基蛋白胨10g牛肉膏5g氯化鈉5g蒸餾水1000ml將各成分溶解于蒸餾水中，調(diào)pH至7.2～7.4，分裝，于121℃壓力蒸汽滅菌20min備用。2006年8月34壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測是一組綜合監(jiān)測，包括工藝監(jiān)測、化學(xué)監(jiān)測、生物監(jiān)測。2006年8月35工藝監(jiān)測工藝監(jiān)測：應(yīng)每鍋監(jiān)測，并詳細(xì)記錄（鍋號(hào)、壓力、溫度、時(shí)間、滅菌物品、滅菌操作者簽名等項(xiàng)）。2006年8月36化學(xué)監(jiān)測監(jiān)測原理化學(xué)指示劑是將某些熱敏物質(zhì)與輔料配制成印墨印制在特殊紙上制作而成。印墨的印記在飽和壓力蒸汽下規(guī)定的溫度、作用時(shí)間下，色塊顏色變成標(biāo)準(zhǔn)色（多為黑色或灰黑色），間接指示壓力蒸汽滅菌基本條件得到滿足，表示滅菌合格。色塊變色標(biāo)準(zhǔn)的設(shè)計(jì)是根據(jù)生物指示劑芽孢的耐熱參數(shù)制定而成。下排氣壓力蒸汽滅菌化學(xué)指示卡在121℃飽和蒸汽下作用20min,變至標(biāo)準(zhǔn)色；預(yù)真空壓力蒸汽滅菌化學(xué)指示卡在132℃飽和蒸汽下作用3min，變至標(biāo)準(zhǔn)色。2006年8月37冷空氣測試圖（又稱B-D試紙），用于監(jiān)測預(yù)真空和脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌器內(nèi)是否殘留冷空氣，冷空氣是否排除。在滅菌之前測試，不指示滅菌合格與否。監(jiān)測時(shí)間：于新滅菌柜安裝調(diào)試之后或滅菌器維修之后；用于每天滅菌器使用之前。2006年8月38操作方法：①準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)測試包②將1張B-D試紙放于包的中層，包好放于滅菌器底部靠前端；③按照正常滅菌程序運(yùn)行，測試結(jié)束，取出B-D試紙觀察色條顏色變化。結(jié)果判定：若為均勻一致變色即說明排除冷空氣性能良好；反之若變色不均勻，有淺顏色區(qū)說明滅菌器內(nèi)存在冷空氣團(tuán)。2006年8月39適用范圍121℃壓力蒸汽滅菌化學(xué)指示卡：專用于下排氣式壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測。132℃壓力蒸汽滅菌化學(xué)指示卡：專用于預(yù)真空或脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測。化學(xué)指示卡監(jiān)測法：包內(nèi)中央部位。每包監(jiān)測。壓力蒸汽滅菌指示膠帶：用于貼封滅菌包，指示該物品包是否經(jīng)過滅菌處理，作為滅菌標(biāo)識(shí)物而不表示滅菌是否合格?；瘜W(xué)指示膠帶監(jiān)測法：包外。每包監(jiān)測。2006年8月40使用方法和結(jié)果判斷化學(xué)指示卡和指示膠帶作為日常監(jiān)測使用。領(lǐng)取滅菌包時(shí)首先查驗(yàn)指示膠帶是否變色，變成黑色即表示此包經(jīng)過滅菌處理?；瘜W(xué)指示卡作為滅菌指示劑放于滅菌包中心，勿將指示卡色塊與金屬物品和玻璃直接接觸，以免被冷凝水浸濕，影響變色。在使用滅菌包時(shí)打開包首先觀察化學(xué)指示卡色塊變色情況，變色達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)色塊表示可以使用，否則更換并查找原因。2006年8月41注意事項(xiàng)選用合格指示劑，必須選用國家批準(zhǔn)的有效期內(nèi)的衛(wèi)消準(zhǔn)字號(hào)衛(wèi)生許可證產(chǎn)品。合理使用指示器材，指示器材不可相互代替，嚴(yán)格按照指示的用途使用。正確分析檢測結(jié)果，當(dāng)發(fā)現(xiàn)指示器材變色不合格時(shí)，要認(rèn)真分析原因，切不可隨便下結(jié)論；滅菌處理后指示色塊出現(xiàn)花白點(diǎn)并有水浸濕痕，可能是被冷凝水或蒸氣含水量過高浸濕，若色塊均勻變淺未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)色則可能為其他因素致滅菌失敗。2006年8月42生物監(jiān)測生物監(jiān)測是指用標(biāo)準(zhǔn)菌株（國際標(biāo)準(zhǔn)菌株為嗜熱脂肪桿菌芽孢）制成的干燥菌片或由菌片和培養(yǎng)基組成的管即生物指示劑進(jìn)行的監(jiān)測。通過生物指示劑是否全部被殺滅來判斷滅菌物品包內(nèi)各種微生物是否完全被殺滅。生物監(jiān)測是判斷滅菌效果的直接指標(biāo)，屬于裁定性監(jiān)測。2006年8月43生物指示劑使用方法在壓力蒸汽滅菌器滅菌柜室內(nèi)，排氣口上方放置一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包（下排氣式）3件平紋長袖手術(shù)衣4塊小手術(shù)巾2塊中手術(shù)巾1塊大手術(shù)巾30塊10㎝×10㎝8層紗布敷料

包大小為30㎝×30㎝×25㎝2006年8月44標(biāo)準(zhǔn)測試包（預(yù)真空和脈動(dòng)預(yù)真空式）16條41㎝×66㎝大小全棉手術(shù)巾每條長邊折成3層，短邊折成2層，疊放。包的大小為23㎝×23㎝×15㎝

2006年8月45手提式壓力滅菌器用通氣貯物盒（22㎝×13㎝×6㎝）代替。盒內(nèi)盛滿中試管，指示菌片放于中心部位的兩只滅菌試管內(nèi)(試管口用滅菌牛皮紙包封)，將貯物盒平放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。2006年8月46干熱滅菌效果監(jiān)測適用于耐高溫診療用品、油脂、粉末、玻璃、金屬制品常用160℃2h?；瘜W(xué)檢測法：用既能指示溫度又能指示時(shí)間化學(xué)指示劑。觀測顏色和性狀的改變。物理檢測法：熱電偶溫度檢測儀。生物監(jiān)測法：枯草桿菌黑色變種芽孢（ATCC9372）株。36℃±1℃培養(yǎng)48小時(shí)。2006年8月47環(huán)氧乙烷滅菌效果監(jiān)測化學(xué)檢測法：環(huán)氧乙烷化學(xué)指示劑。儀器監(jiān)測法：測定EO氣體濃度（氣相色譜或紅外分析）。生物監(jiān)測法：枯草桿菌黑色變種芽孢（ATCC9372）株，每月一次。根據(jù)柜內(nèi)容積放置菌片，柜容積＜5m3，至少放置10片；5m3－10m3，每增加1m3，增加1個(gè)菌片；＞10m3，每增加2m3，增加1個(gè)菌片。2006年8月48紫外線消毒效果監(jiān)測紫外線輻照計(jì)測定法：開燈5min后，將測定波長為253.7nm的紫外線輻照計(jì)探頭置于被檢紫外線燈下垂直距離1m的中央處，待儀表穩(wěn)定后，讀取紫外線燈管的輻照度值。紫外線強(qiáng)度指示卡監(jiān)測法：開啟紫外線燈5min后，將指示卡置紫外燈下垂直距離1m處，有圖案一面朝上，照射1min（紫外線照射后，圖案正中光敏色塊由乳白色變成不同程度的淡紫色），觀察指示卡色塊的顏色，將其與標(biāo)準(zhǔn)色塊比較，讀出照射強(qiáng)度。2006年8月49生物監(jiān)測法：同空氣消毒和表面消毒效果檢測方法結(jié)果判斷：普通30W直管型紫外燈，新燈輻照強(qiáng)度≥90uW/cm2，使用中燈管輻照強(qiáng)度≥70uW/cm2，高強(qiáng)度燈管輻照強(qiáng)度≥180uW/cm2為合格。2006年8月50注意事項(xiàng)：

測定時(shí)電壓220V±５V，溫度20℃～25℃，相對(duì)濕度＜60％，紫外線輻照計(jì)必須在計(jì)量部門檢定的有效期內(nèi)使用(要求一年校準(zhǔn)一次)指示卡應(yīng)獲得衛(wèi)生許可批件，并在有效期內(nèi)使用。放于燈管中央部位，儀器探頭與拉桿保持垂直。1米2006年8月51監(jiān)測樣品送檢時(shí)間

采樣后必須盡快對(duì)樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測,送檢時(shí)間不得超過6小時(shí),若樣品保存于0-4℃條件時(shí),送檢時(shí)間不得超過24小時(shí)。2006年8月52四、檢驗(yàn)及結(jié)果評(píng)價(jià)空氣消毒效果檢驗(yàn)：細(xì)菌總數(shù)：將瓊脂平板，置于36℃±1℃溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)細(xì)菌菌落數(shù)。致病菌檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌：溶血性鏈球菌：

2006年8月54檢驗(yàn)結(jié)果計(jì)算方法：A為平板面積（cm2）T為平板暴露時(shí)間（min）：5minN為平均菌落數(shù)（cfu）9cm直徑的平皿計(jì)算常數(shù)為1572006年8月55結(jié)果判定Ⅰ類區(qū)域空氣：細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/m3

不得檢出致病菌（金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌）Ⅱ類區(qū)域空氣：細(xì)菌總數(shù)≤200cfu/m3不得檢出致病菌（金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌）Ⅲ類區(qū)域空氣：細(xì)菌總數(shù)≤500cfu/m3不得檢出致病菌（金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌）2006年8月56無菌檢驗(yàn)無菌檢驗(yàn)是指檢查經(jīng)滅菌的敷料、縫線、一次性使用的醫(yī)療用品、無菌器械以及適合于無菌檢查的其它品種是否無菌的一種方法。無菌檢驗(yàn)應(yīng)在潔凈度為100級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，避免微生物污染；對(duì)單向流空氣區(qū)域及工作臺(tái)面，必須進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。2006年8月57無菌檢驗(yàn)前準(zhǔn)備

洗脫液與培養(yǎng)基無菌性試驗(yàn):無菌試驗(yàn)前3d，于需-厭養(yǎng)培養(yǎng)基與霉菌培養(yǎng)基內(nèi)各接種1ml洗脫液，分別置30℃～35℃與20℃～25℃培養(yǎng)72h，應(yīng)無菌生長。陽性對(duì)照管菌液制備:①金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]②生孢梭菌[CMCC(B)64941]③白色念珠菌[CMCC（F）98001]2006年8月58無菌操作小件醫(yī)療器械(縫合針、針頭、刀片等)取5件直接浸入6管需-厭氧培養(yǎng)管(其中一管作陽性對(duì)照)與4管霉菌培養(yǎng)管。培養(yǎng)基用量為15ml/管。大件醫(yī)療器械(手術(shù)鉗、鑷子等)取2件用沾有無菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂抹采樣，將棉拭子投入5ml無菌洗脫液中，將采樣液混勻，接種于需-厭氧培養(yǎng)管與霉菌培養(yǎng)基。接種量為1ml/管，培養(yǎng)基用量為15ml/管。2006年8月59培養(yǎng)在待檢樣品的需-厭氧培養(yǎng)管中，接種預(yù)先準(zhǔn)備的金黃色葡萄球菌陽性對(duì)照管液1:1000稀釋1ml。將需-厭氧培養(yǎng)管以及陽性與陰性對(duì)照管均于30℃～35℃培養(yǎng)5d，霉菌培養(yǎng)管與陰性對(duì)照管于20℃～25℃培養(yǎng)7d。培養(yǎng)期間逐日檢查是否有菌生長，如培養(yǎng)基出現(xiàn)混濁或沉淀，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀上判斷時(shí)，可取培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種入另一支相同的培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48h～72h后，觀察是否再現(xiàn)混濁或在斜面上有無菌落生長，并在轉(zhuǎn)種的同時(shí)，取培養(yǎng)液少量，涂片染色，用顯微鏡觀察是否有菌生長。2006年8月60結(jié)果判定滅菌合格：陽性對(duì)照在24h內(nèi)應(yīng)有菌生長，陰性對(duì)照在培養(yǎng)期間應(yīng)無菌生長。如需-厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管內(nèi)均為澄清或雖顯混濁但經(jīng)證明并非有菌生長。滅菌不合格：如需-厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管中（除陽性對(duì)照外）任何1管顯混濁并證實(shí)有菌生長。2006年8月61注意事項(xiàng)送檢時(shí)間不得超過6h，若樣品保存于0℃～4℃，則不得超過24h。被采樣本表面積＜100cm2取全部表面；被采樣本表面積≥100cm2，取100cm2。若消毒因子為化學(xué)消毒劑，采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)中和劑。2006年8月62無菌保持液檢驗(yàn)方法：吸取被檢樣液1.0ml加入9.0ml中和劑混勻，取1.0ml接種15ml需-厭氧菌培養(yǎng)管（6管，其中1管為陽性對(duì)照）30℃～35℃培養(yǎng)5d，霉菌培養(yǎng)管（共4管，其中1管作為陽性對(duì)照）與陰性對(duì)照管于20℃～25℃培養(yǎng)7d。結(jié)果判定：同無菌檢出,為合格。2006年8月63生物學(xué)監(jiān)測檢驗(yàn):滅菌處理之后將滅菌包在無菌室內(nèi)取出菌片接種于溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，于56℃條件下培養(yǎng)24h觀察初步結(jié)果，連續(xù)培養(yǎng)7d觀察最終結(jié)果；生物指示劑菌管可以在現(xiàn)場或?qū)嶒?yàn)室內(nèi)

取出擠碎管內(nèi)安瓿讓培養(yǎng)液浸透菌片，置于56℃條件下培養(yǎng)48h觀察結(jié)果。壓力蒸汽滅菌器2006年8月64結(jié)果判定：溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基可因細(xì)菌生長繁殖而使其pH值發(fā)生改變從而使溴甲酚紫指示劑顏色發(fā)黃。所以，當(dāng)培養(yǎng)液顏色變黃時(shí)即表示有菌生長為陽性，判定為滅菌不合格；若培養(yǎng)后培養(yǎng)液仍為紫色者表示無菌生長為陰性，判定為滅菌合格。2006年8月65

注意事項(xiàng):使用菌片進(jìn)行監(jiān)測首先要注意無菌操作;自制培養(yǎng)基注意配方標(biāo)準(zhǔn)、pH適當(dāng)、滅菌合格。培養(yǎng)溫度必須滿足：嗜熱脂肪桿菌最適合生長溫度為55-65℃范圍，容易出現(xiàn)的問題經(jīng)常是培養(yǎng)溫度不夠，生長不好，甚至陽性對(duì)照亦不變顏色。判斷結(jié)果注意仔細(xì)觀察，有時(shí)培養(yǎng)管剛從培養(yǎng)箱內(nèi)取出呈灰色，不易觀察，可以待其冷卻時(shí)再觀察。監(jiān)測頻率：生物監(jiān)測每月至少進(jìn)行1次。2006年8月66醫(yī)院器械按使用時(shí)發(fā)生交叉感染的危險(xiǎn)程度，分為三個(gè)消毒等級(jí):①嚴(yán)格：進(jìn)入正常無菌組織或血管系統(tǒng)的器械。要求無菌。如腹腔鏡。②半嚴(yán)格：主要指與完整的粘膜接觸而一般不穿透無菌組織的器械。如上消化道內(nèi)窺鏡至少應(yīng)該接受高水平消毒。③不嚴(yán)格：通常不接觸患者或僅接觸完整皮膚。如聽診器。醫(yī)療用品2006年8月67醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：進(jìn)入無菌組織、器官或接觸破損皮膚、黏膜：無菌。接觸黏膜：細(xì)菌總數(shù)≤20cfu/g或100cm2；接觸皮膚：細(xì)菌總數(shù)≤200cfu/g或100cm2；*氣管鏡、胃鏡、腸鏡要求達(dá)到高水平消毒。*腹腔鏡、腦室內(nèi)窺鏡、關(guān)節(jié)鏡要求無菌。2006年8月68內(nèi)窺鏡菌落計(jì)數(shù)：將送檢液用旋渦器充分震蕩，取0.5ml，加入2只直徑90mm無菌平皿，每個(gè)平皿分別加入已經(jīng)熔化的45℃-48℃營養(yǎng)瓊脂15ml-18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，于35℃培養(yǎng)48小時(shí)后計(jì)數(shù)。致病菌檢測：將送檢液用旋渦器充分震蕩，取0.2ml分別接種9cm血平皿、中國蘭平皿和SS平皿，均勻涂布，35℃培養(yǎng)48小時(shí)，觀察有無致病菌生長。2006年8月69內(nèi)窺鏡內(nèi)腔面：細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/鏡）=平均平板菌落數(shù)×20內(nèi)窺鏡鏡身：內(nèi)鏡檢驗(yàn)結(jié)果計(jì)算2006年8月70內(nèi)鏡結(jié)果判定消毒后的內(nèi)鏡應(yīng)當(dāng)每季度進(jìn)行生物學(xué)監(jiān)測并做好監(jiān)測記錄。滅菌后的內(nèi)鏡應(yīng)當(dāng)每月進(jìn)行生物學(xué)監(jiān)測并做好監(jiān)測記錄。消毒后的內(nèi)鏡合格標(biāo)準(zhǔn)為：細(xì)菌總數(shù)<20cfu/件，不能檢出致病菌；滅菌后內(nèi)鏡合格標(biāo)準(zhǔn)為：無菌檢測合格。2006年8月71血液透析系統(tǒng)菌落計(jì)數(shù)：將送檢液用旋渦器充分震蕩，取0.5ml，加入2只直徑90mm無菌平皿，每個(gè)平皿分別加入已經(jīng)熔化的45℃-48℃營養(yǎng)瓊脂15ml-18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，于35℃培養(yǎng)48小時(shí)后計(jì)數(shù)。致病菌檢驗(yàn):金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌2006年8月72結(jié)果計(jì)算：細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/ml）=平均平板菌落數(shù)×2結(jié)果判定：透析入口液，細(xì)菌總數(shù)≤200cfu/ml。透析出口液，細(xì)菌總數(shù)≤2000cfu/ml。2006年8月73手和皮膚黏膜消毒效果細(xì)菌總數(shù)檢測:將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打80次。用無菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個(gè)平皿，內(nèi)加入已溶化的45℃的營養(yǎng)瓊脂15ml～18ml，邊傾注邊搖勻。待瓊脂凝固，置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。2006年8月74致病菌檢測：注意事項(xiàng):將樣品在用電動(dòng)混合器混合20s或在手掌上用力振敲80次。取液時(shí)要準(zhǔn)確，盡量減少吸管使用中產(chǎn)生的誤差。傾注時(shí)瓊脂培養(yǎng)基溫度不得超過48℃，以防損傷細(xì)菌。傾注和搖動(dòng)時(shí)，動(dòng)作應(yīng)盡量平穩(wěn)，以利細(xì)菌分散均勻，便于計(jì)數(shù)菌落。不要使培養(yǎng)基外溢。將平皿蓋好，即刻輕輕搖動(dòng)混勻，平放于臺(tái)上。待瓊脂凝固后，置36℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)。2006年8月75采樣結(jié)果計(jì)算方法：手面積：60cm2稀釋倍數(shù):10倍2006年8月76結(jié)果判定Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤5cfu/cm2

不得檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單孢菌Ⅲ類區(qū)域工作人員細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/cm2不得檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌Ⅳ類區(qū)域工作人員細(xì)菌總數(shù)≤15cfu/cm2不得檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌★母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員不得檢出沙門氏菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌2006年8月77物品和環(huán)境表面消毒效果

細(xì)菌總數(shù)檢測:檢測方法同手執(zhí)行。小型物體表面的結(jié)果計(jì)算，用cfu/件表示。致病菌檢測:采樣結(jié)果計(jì)算方法：物表面積：100cm2稀釋倍數(shù):10倍2006年8月78結(jié)果判定Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域物表：細(xì)菌總數(shù)≤5cfu/cm2

不得檢出致病菌（金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌）Ⅲ類區(qū)域物表：細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/cm2不得檢出致病菌（金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌）Ⅳ類區(qū)域物表：細(xì)菌總數(shù)≤15cfu/cm2不得檢出致病菌（金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌）★母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌2006年8月79消毒/滅菌劑濃度測定消毒劑濃度監(jiān)測濃度測試紙(卡)法：用相應(yīng)消毒劑濃度測試紙(卡)進(jìn)行現(xiàn)場測試。2%戊二醛：用3M1.8%戊二醛濃度測試卡。含氯消毒劑、過氧乙酸、二氧化氯：G-1型消毒濃度試紙?；瘜W(xué)滴定法：含氯消毒劑有效氯含量，戊二醛含量，過氧乙酸含量及二氧化氯含量測定方法參照《醫(yī)院消毒技術(shù)規(guī)范》20.8規(guī)定方法執(zhí)行。2006年8月80消毒液染菌量測定涂抹法:用無菌吸管吸取消毒液1.0ml，加入9.0ml含有相應(yīng)中和劑的采樣管內(nèi)混勻。用無菌吸管吸取上述溶液0.2ml，滴于干燥普通瓊脂平