實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物質(zhì)量控制

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物質(zhì)量控制國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)等級(jí)種類(lèi)飼養(yǎng)條件四級(jí)無(wú)菌動(dòng)物GermfreeanimalGF隔離系統(tǒng)Isolationsystem四級(jí)悉生動(dòng)物GnotobioticsanimalGN隔離系統(tǒng)Isolationsystem三級(jí)無(wú)特定病原體動(dòng)物SpecificpathogenfreeanimalSPF屏障系統(tǒng)Barriersystem二級(jí)清潔動(dòng)物CleananimalCL屏障系統(tǒng)Barriersystem一級(jí)普通動(dòng)物ConventionalanimalCV開(kāi)放系統(tǒng)Opensystem各種動(dòng)物國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)物種分級(jí)小鼠、大鼠CL、SPF、GF地鼠、豚鼠、兔CV、CL、SPF、GF犬、猴CV、SPF第二節(jié)普通動(dòng)物一、概念定義(conventionalanimalCV):不攜帶人獸共患病病原和動(dòng)物烈性傳染病病原得實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。特點(diǎn):1、微生物控制要求最低。2、生理學(xué)特性:健康得外貌,正常得飲食,眼角、鼻腔無(wú)分泌物附著,尸檢無(wú)眼觀(guān)病灶。二、人獸共患病病毒性疾病疾病病原媒介動(dòng)物人類(lèi)臨床癥狀傳染途徑猴皰疹病毒感染(B-Virusinfection)cercopithecineHerpesvirusType1獼猴類(lèi)肌痛、發(fā)熱、頭痛;迅速發(fā)展得上行性麻痹;感覺(jué)異常、復(fù)視、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、潴尿、抽搐、吞咽困難,直至死亡唾液(咬傷)、抓傷馬爾堡病毒癥

(Marburg-Viresdisease)Marburg-Virus

非洲綠猴、

肌痛、發(fā)熱、頭痛、器官壞死、出血性休克、眼結(jié)膜溢血、惡心、嘔吐、嚴(yán)重下痢、白細(xì)胞減少,急性死亡接觸、空氣傳染;人類(lèi)之間可經(jīng)由血液、分泌物或精液傳染

痘病毒癥

(PoxMrusdisease)Poxvirus其她靈長(zhǎng)類(lèi)

類(lèi)似天花癥狀,如發(fā)熱、皮疹、頭痛、咽喉痛、虛脫、偶有腹痛,嚴(yán)重致死接觸傳染或呼吸道感染猴痘(Monkeypox)Poxvirus獼猴類(lèi)

眼瞼、臉部、身體或生殖器有局部得卵圓形或圓形隆起紅斑接觸傳染續(xù)表疾病病原媒介動(dòng)物人類(lèi)臨床癥狀傳染途徑

麻疹(Measles;Rubeola)Paramyxovirus

自然宿主為人群,靈長(zhǎng)類(lèi)患病后可感染人類(lèi)發(fā)熱、結(jié)膜炎、鼻炎、咳嗽、有紅暈小白點(diǎn)于頰部黏膜,在臉部及其她部位出現(xiàn)皮疹空氣傳染、呼吸道分泌物接觸能傳染甲型肝炎(HepatitisA)HepatitisAvirus

黑猩猩、械猴、石蟹獼猴、梟猴

發(fā)熱、身體不適、厭食、惡心、腹部不適、黃疸糞便排毒、經(jīng)口或胃腸道外途徑感染出血熱(Koreanhemorrhagicfever)

HantaanVirus

大鼠、小鼠肌痛、咳嗽,發(fā)熱、腹瀉、出血、蛋白尿、腎臟損害,嚴(yán)重致死吸入感染、嚙齒類(lèi)動(dòng)物咬傷、傷口污染淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染癥(Lyphocyticchoriomeningitisvirusinfection)

Lyphocyticchoriomeningitisvirus

小鼠、倉(cāng)鼠類(lèi)似流行性感冒得癥狀,頭痛、肌痛、發(fā)熱、惡心、嘔吐、喉痛、畏光。接觸感染(接觸小鼠糞便和尿液);吸入;咬傷,或由節(jié)肢動(dòng)物如蚊子、蟑螂傳播狂犬病

(Rabies)Rhabdovirus

所有哺乳類(lèi)頭痛、肌痛、發(fā)熱、恐水、狂妄、抽搐、昏厥、死亡

咬傷、皮膚傷口或黏膜感染含狂犬病毒得唾液

細(xì)菌性疾病

疾病病原媒介動(dòng)物人類(lèi)臨床癥狀傳染途徑全身性感染(Systemicinfections)

布氏桿菌病

(Brucellosis)犬BrucdlaCanis、豬Brucellasuis

犬、牛、豬、羊發(fā)熱、頭痛、惡心、體重減輕。有可能發(fā)生菌血癥,睪丸炎、不育等由接觸感染,可經(jīng)口、皮膚、呼吸道、尿液、黏膜感染鉤端螺旋體病(Leptospirosis)Leptospirosisinterro-gans各種脊椎動(dòng)物得哺乳類(lèi)、兩棲類(lèi)、爬行類(lèi)

精神萎靡、體重減輕、嘔吐、下痢、發(fā)熱、黃疸、突發(fā)性死亡接觸感染動(dòng)物得尿液,由創(chuàng)傷、皮膚或口腔感染鼠疫(Plague)Yersinia(Pasteurella)pestis

鼠類(lèi)、貓、犬、兔、山羊

淋巴結(jié)型鼠疫:發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大與發(fā)炎?；撔褪笠?全身性尤其就是肺、腦膜化膿由蚤傳染。另外,接觸受感染得動(dòng)物,或吸入帶菌得空氣感染。皮膚傷口或黏膜亦可感染鸚鵡熱

(Psittacosis)Chlamydiapsittaci

多種鳥(niǎo)類(lèi)(鸚鵡科、火雞、鴿、鴨等)

呈急性或隱性感染,包括發(fā)熱、厭食、肌痛、干咳。與帶病原得滲出物、分泌物、排泄物接觸傳染,或經(jīng)呼吸道感染鼠咬熱(Rat-BiteFever)Streptobacillusmonili-fonnisspirillumminus

大鼠等嚙齒類(lèi)

發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大、發(fā)抖、頭痛、肌痛

被帶菌得大鼠、小鼠、犬、貓咬傷,由空氣、灰塵或飲用污染得牛乳感染

續(xù)表疾病病原媒介動(dòng)物人類(lèi)臨床癥狀傳染途徑呼吸道感染(Respiratorylnfections)結(jié)核病(Tuberculosis)Mycobacteriumtu-berculosis犬、貓、猴

咳嗽、生痰、咳血、體重減輕、無(wú)力疲倦、發(fā)熱、發(fā)冷、惡病質(zhì)

吸入傳染,或經(jīng)口腔、傷口及消化道感染

腸道感染

(Entericlnfections)沙門(mén)氏菌病

(Salmonellosis)Salmonellatyphimu-riumS、enteritidis鼠類(lèi)、犬、貓、靈長(zhǎng)類(lèi)急性腸胃炎,腹痛、腹瀉、惡心、發(fā)熱、厭食經(jīng)由食物、飲水感染

志賀氏菌病

(Shigellosis)S、flexneri,S、Sonnei,及S、dysenteriae

豚鼠、鼠類(lèi)、犬、靈長(zhǎng)類(lèi)

急性下痢、發(fā)熱、惡心、有時(shí)伴有嘔吐、先急后重、痛經(jīng)與毒血癥

接觸或口腔感染

腸道耶氏癥

(EntericYersiniosis)YersiniaEnterocolitica犬、貓、豚鼠、兔、靈長(zhǎng)類(lèi)發(fā)熱、下痢、腹痛。后遺癥有關(guān)節(jié)炎,虹膜炎、皮膚潰瘍、肝脾膿腫

接觸感染動(dòng)物或其糞便,亦可經(jīng)口感染

三、動(dòng)物烈性傳染病疾病病原癥狀傳播方式控制小鼠脫腳病(ectromelia)Mousepoxvirus腳、尾、鼻出現(xiàn)皮疹和潰瘍,嚴(yán)重出現(xiàn)尾壞死脫落。皮膚傷口、呼吸道、消化道兔出血癥RabbithemorrhagicdiseaseRabbithemorrhagicdiseasevirus11大家應(yīng)該也有點(diǎn)累了，稍作休息大家有疑問(wèn)的，可以詢(xún)問(wèn)和交流第三節(jié)清潔級(jí)動(dòng)物與無(wú)特定病原體動(dòng)物一、概念Cleananimal:

除普通動(dòng)物應(yīng)排除得病原外,不攜帶對(duì)動(dòng)物危害大和對(duì)科學(xué)研究干擾大得病原。來(lái)源于SPF動(dòng)物或剖腹產(chǎn)動(dòng)物。血清病毒抗體檢測(cè)可檢測(cè)出一定滴度得抗體,病理切片應(yīng)無(wú)病變。小鼠病原菌應(yīng)排除10種,病毒5種;大鼠病原菌應(yīng)排除10種,病毒2種。Specificpathogenfree(SPF)animal:

指動(dòng)物體內(nèi)無(wú)特定得微生物、寄生蟲(chóng)存在,但帶有非特定得微生物、寄生蟲(chóng)得動(dòng)物。主要指不攜帶潛在感染、條件致病和對(duì)實(shí)驗(yàn)干擾大得病原。來(lái)源于剖腹產(chǎn)動(dòng)物。小鼠病原菌應(yīng)排除16種,病毒11種;大鼠病原菌應(yīng)排除16種,病毒7種。二、應(yīng)用CL動(dòng)物國(guó)際上認(rèn)為僅適合短期或部分科研實(shí)驗(yàn);我國(guó)認(rèn)為適用于大多數(shù)科研實(shí)驗(yàn),可用于生物醫(yī)學(xué)研究得各領(lǐng)域。SPF動(dòng)物適用于所有科研實(shí)驗(yàn),就是目前國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別得實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。三、微生物、寄生蟲(chóng)潛在感染對(duì)實(shí)驗(yàn)研究得干擾實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病毒對(duì)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)得干擾鼠痘病毒實(shí)驗(yàn)性結(jié)核、X射線(xiàn)、化學(xué)毒素、組織移植、腫瘤、運(yùn)輸可使隱性感染病毒激活。大量?jī)?nèi)毒素或切除脾臟可改變吞噬細(xì)胞功能,而增加小鼠對(duì)病毒得易感性。仙臺(tái)病毒飼養(yǎng)條件惡化、氣溫驟變或呼吸道細(xì)菌感染,可導(dǎo)致呼吸道疾病流行。嚴(yán)重影響體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答:抑制大鼠淋巴細(xì)胞對(duì)綿羊紅細(xì)胞得抗體應(yīng)答。減弱植物血凝素、刀豆素對(duì)淋巴細(xì)胞得促有絲分裂。致瘤作用得干擾:感染后得組織學(xué)改變酷似浸潤(rùn)性肺癌;對(duì)化學(xué)致癌作用具有很強(qiáng)得影響。生殖影響:妊娠4-5天感染,胚胎被吸收;11-12天感染,妊娠期延長(zhǎng),新生鼠死亡率升高。小鼠肝炎病毒在應(yīng)激條件下,引起小鼠致死性肝炎、腦炎、腸炎改變機(jī)體各種免疫應(yīng)答參數(shù):降低血清免疫球蛋白水平;影響吞噬細(xì)胞數(shù)目。改變酶系統(tǒng):增高或降低一些肝臟得酶活性。乳酸脫氫酶病毒污染生物材料和移植腫瘤,影響機(jī)體免疫。嚙齒類(lèi)動(dòng)物病毒對(duì)生物材料、細(xì)胞系及可移植腫瘤得污染就是一個(gè)不容忽視得問(wèn)題。抑制細(xì)胞免疫應(yīng)答,延緩?fù)N異體排斥,抑制移植物對(duì)宿主得反應(yīng)。對(duì)腫瘤研究得影響:病毒慢性感染,抑制或延緩腫瘤得形成。對(duì)酶系統(tǒng):小鼠感染后,一些血清酶活性升高。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物細(xì)菌對(duì)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)得干擾動(dòng)物致病菌鼠棒狀桿菌、泰澤氏菌、鼠肺炎霉形體可引起動(dòng)物嚴(yán)重疾病,使實(shí)驗(yàn)中斷。條件致病菌綠膿桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、葡萄球菌在某些誘因作用下,機(jī)體抵抗力下降,導(dǎo)致動(dòng)物疾病發(fā)生,干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。發(fā)病誘因包括免疫抑制劑、射線(xiàn)、營(yíng)養(yǎng)失調(diào)、潮濕、擁擠、氨濃度過(guò)高、實(shí)驗(yàn)處理等一切使動(dòng)物處于應(yīng)激狀態(tài)得因素。耐受過(guò)感染得長(zhǎng)期帶菌者,在實(shí)驗(yàn)中受試驗(yàn)因素刺激使動(dòng)物發(fā)生不規(guī)律死亡,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。正常菌群正常菌群受內(nèi)外環(huán)境變化發(fā)生菌群失調(diào),將產(chǎn)生數(shù)量和位置得改變,由非致病菌變?yōu)橹虏【?。真菌感染?duì)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)得干擾病原真菌大多為人獸共患病原,病原性弱,為慢性過(guò)程,以慢性增生性炎癥為主。真菌孢子飛揚(yáng),污染環(huán)境,威脅動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)、飼養(yǎng)人員。寄生蟲(chóng)感染對(duì)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)得干擾掠奪宿主得營(yíng)養(yǎng)因種類(lèi)、數(shù)量、寄生部位不同,對(duì)動(dòng)物影響不同?；紫x(chóng)寄生小腸,以半消化物質(zhì)為食,導(dǎo)致動(dòng)物發(fā)育緩慢、體重下降營(yíng)養(yǎng)不良。螨皮下吸血,鉤蟲(chóng)移位吸血導(dǎo)致動(dòng)物慢性貧血。體表寄生蟲(chóng)對(duì)宿主得干擾

虱、螨吸血得同時(shí)分泌有毒素得唾液,刺激宿主神經(jīng)末梢產(chǎn)生騷癢。對(duì)宿主產(chǎn)生機(jī)械損傷蟲(chóng)體移行可對(duì)組織、臟器造成損傷?；紫x(chóng)幼蟲(chóng)移行,損傷腸壁、肺毛細(xì)血管和肺泡壁。腸道中,與粘液混合形成栓塞,引起腸梗阻或破裂。產(chǎn)生毒性作用

即寄生蟲(chóng)分泌物、排泄物得毒性。如肝片吸蟲(chóng)導(dǎo)致膽管纖維變性,肝臟萎縮硬化。對(duì)生理、生化、免疫得影響一、概念悉生生物學(xué)(gnotobiology):

1885年pasteur認(rèn)為宿主動(dòng)物沒(méi)有腸道菌群參與,生命難以維持。無(wú)菌動(dòng)物得問(wèn)世,證明腸道菌群得存在,并非完全就是哺乳動(dòng)物生存所必需。悉生生物學(xué)就是以無(wú)菌隔離技術(shù)提供得各種動(dòng)物為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,研究實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身以及各種動(dòng)物與微生物之間相互依存和制約關(guān)系得一門(mén)綜合科學(xué)。第四節(jié)無(wú)菌動(dòng)物與悉生動(dòng)物無(wú)菌動(dòng)物(germfreeanimalGF):指用現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)在動(dòng)物體內(nèi)外得任何部位均檢不出任何活得微生物和寄生蟲(chóng)得動(dòng)物。來(lái)源于剖腹產(chǎn)或無(wú)菌卵孵化,飼養(yǎng)于隔離系統(tǒng)中。悉生動(dòng)物(gnotobioticanimalGN):或稱(chēng)已知菌動(dòng)物,廣義上把無(wú)菌動(dòng)物、已知菌動(dòng)物、無(wú)特定病原體動(dòng)物統(tǒng)稱(chēng)悉生動(dòng)物;狹義上指已知菌動(dòng)物。二、無(wú)菌動(dòng)物得特點(diǎn)形態(tài)學(xué)改變消化系統(tǒng):盲腸膨大,腸壁菲薄,易發(fā)生盲腸扭轉(zhuǎn),導(dǎo)致破裂。循環(huán)系統(tǒng):心臟變小。免疫系統(tǒng):胸腺上皮細(xì)胞變大,胞漿泡狀結(jié)構(gòu)和溶酶體變小。生理學(xué)改變免疫功能:免疫應(yīng)答慢,過(guò)敏反應(yīng)、對(duì)異體移植物得排斥反應(yīng)以及自身免疫現(xiàn)象消失或減弱。對(duì)微生物感染非常敏感。生長(zhǎng)率:豚鼠、兔生長(zhǎng)率降低,大、小鼠改變不大。代謝:水分代謝周期延長(zhǎng),腸管對(duì)水得吸收率低。營(yíng)養(yǎng):體內(nèi)不能合成VitB、VitK。抗輻射能力:增強(qiáng)。壽命:長(zhǎng)于普通動(dòng)物。三、悉生動(dòng)物得特點(diǎn)GN動(dòng)物就是動(dòng)物與微生物得共生復(fù)合體。腸道存在能合成維生素和氨基酸得細(xì)菌,不會(huì)出現(xiàn)維生素缺乏癥。生活力、抵抗力明顯增強(qiáng),易于飼養(yǎng)。四、GF動(dòng)物得應(yīng)用微生物研究GF就是研究微生物與宿主相互作用,即微生生物與宏生生物相互關(guān)系,微生物與微生物得共生與拮(jie)抗關(guān)系得最佳動(dòng)物。口服霍亂弧菌使幼齡GF豚鼠死亡,口服前感染梭狀芽胞桿菌,動(dòng)物不發(fā)生死亡;口服福氏痢疾桿菌使幼齡GF豚鼠死亡,口服前接種大腸桿菌,動(dòng)物不發(fā)生死亡。炎癥涉及細(xì)菌感染得多因素作用,GF可把多因素變成單因素,整體反應(yīng)變成局部反應(yīng)。老年學(xué)研究

GF大鼠壽命比CV大鼠延長(zhǎng)1/3。雌性GF壽命比雄性動(dòng)物短,雌性CV動(dòng)物比雄性長(zhǎng)。

2-3年得GF大鼠臟器均未呈現(xiàn)同齡CV大鼠所具有得各種衰老變化。腫瘤學(xué)研究在致癌因素中,微生物引起癌變得比重較大。有些病毒可通過(guò)胎盤(pán)傳播。GF動(dòng)物口服蘇鐵素不出現(xiàn)腫瘤,但CV動(dòng)物口服蘇鐵素出現(xiàn)腫瘤。第五節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物及寄生蟲(chóng)監(jiān)測(cè)監(jiān)測(cè)程序:1、微生物檢測(cè)程序分離血清,檢查病毒抗體或其她病原得抗體

氣管分泌物,腸內(nèi)容物,臟器分離細(xì)菌

真菌檢查動(dòng)物編號(hào)外觀(guān)檢查麻醉皮膚取樣取血無(wú)菌解剖檢測(cè)檢測(cè)報(bào)告2、寄生蟲(chóng)檢測(cè)程序弓形蟲(chóng)檢測(cè)

體外寄生蟲(chóng)檢測(cè)體內(nèi)寄生蟲(chóng)檢測(cè)

體外寄生蟲(chóng)檢測(cè)動(dòng)物編號(hào)外觀(guān)檢查麻醉拔毛或梳毛取血擠壓或刀片刮取皮層物取樣檢測(cè)檢測(cè)報(bào)告解剖、臟器、腸內(nèi)容物、糞便取樣取樣要求與監(jiān)測(cè)規(guī)則:1、普通動(dòng)物、清潔級(jí)動(dòng)物和無(wú)特定病原體動(dòng)物每三個(gè)月至少檢測(cè)一次。2、無(wú)菌動(dòng)物每年至少檢測(cè)一次。3、每2-4周檢測(cè)一次糞便標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不同生產(chǎn)繁殖單元取樣數(shù)量群體大小，只取樣數(shù)量<100100—150>500>5只>10只>20只

每個(gè)隔離器檢測(cè)2只監(jiān)測(cè)方法:1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病毒檢測(cè):1)血清學(xué)診斷:血凝抑制試驗(yàn)(HI);酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。2)病原學(xué)檢查:接種細(xì)胞培養(yǎng)物觀(guān)察CPE出現(xiàn)(鼠痘、鼠肝炎);血吸附試驗(yàn)(仙臺(tái)病毒);免疫酶試驗(yàn)(LCM病毒)。連續(xù)三次傳代未有病毒跡象為陰性。接種敏感動(dòng)物,觀(guān)察發(fā)病、抗體產(chǎn)生、病理改變、接種動(dòng)物病毒再分離。動(dòng)物組織細(xì)胞傳代培養(yǎng)。3)病毒顆粒、抗原和核酸得檢出光鏡檢查病理改變或包涵體得存在。