微生物得利用

微生物得利用微生物得利用微生物得利用微生物得利用一。培養(yǎng)基種類固體培養(yǎng)基,培養(yǎng)基，配制固體培養(yǎng)基時(shí)，需要添加凝固劑如成分:一般都含有水、、氮源和無機(jī)鹽等最基本得物質(zhì),有時(shí)還需要加入特殊得營養(yǎng)物質(zhì)。2、無菌技術(shù)①對(duì)實(shí)驗(yàn)空間、操作臺(tái)可用或酒精消毒，操作者得手用消毒。②實(shí)驗(yàn)用得培養(yǎng)器皿和培養(yǎng)基一般用法滅菌,接種環(huán)方法滅菌。③為避免周圍環(huán)境中微生物得污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在附近進(jìn)行。4、不能加熱滅菌得化合物，要用過濾固體。。瓊脂、碳源、紫外線酒精高壓蒸汽滅菌法酒精燈火焰G6玻璃砂漏斗二、大腸桿菌得培養(yǎng)和分離1、大腸桿菌(1）性質(zhì):大腸桿菌是革蘭氏性、得腸道桿菌。(２）用途：大腸桿菌是技術(shù)中被廣泛采用得工具。2、實(shí)驗(yàn)原理(1)擴(kuò)大培養(yǎng)原理:將大腸桿菌接種在培養(yǎng)基中，使其快速分裂繁殖。（2)分離純化原理:將待檢測(cè)微生物樣品通過或接種在培養(yǎng)基上,樣品中得每一個(gè)細(xì)胞或孢子都可以生長繁殖形成單個(gè)菌落。將單個(gè)菌落接種到培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后,即可得到一個(gè)微生物得純種。陰性、兼性厭氧劃線或涂布LB固體斜面３、實(shí)驗(yàn)步驟eｑ\a＼vs４\ａl(培養(yǎng)基,滅菌)ｅq\b\lc\{＼rc＼(\a＼vs４\ａl\co1(\a＼vs4\al(5０mLＬＢ液體培養(yǎng)基和50mLLB固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿高壓蒸汽滅菌)）)倒平板e(cuò)ｑ＼b＼lc\{＼rc\(\a\vｓ4\al\ｃo１(＼a\vs4\al（將培養(yǎng)基分別倒入4個(gè)滅菌后得培養(yǎng)皿中,水平放置,使之形成平面）))接種eq＼ｂ\ｌc＼｛＼rｃ\（\a\ｖs4\ａl\co1(\a\vs4＼al(在裝有液體培養(yǎng)基得三角瓶中接種大腸桿菌，培養(yǎng)12h)))eq\a\ｖs4\al（劃線,分離)eq\ｂ\ｌc\{＼rc＼(＼ａ＼vs4\al\ｃｏ1（\a\vs4\ａl(用接種環(huán)在接種有大腸桿菌得三角瓶中蘸菌液一次,,在固體培養(yǎng)基得平板上連續(xù)劃線，蓋好培養(yǎng)皿)))eｑ\a＼vｓ４\al（培養(yǎng)，觀察)eq\ｂ\lc\｛\rc\(＼a＼ｖs４\al＼co1(\a\vs4\ａl(培養(yǎng)皿倒置蓋在下面，放在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12~2４ｈ后，,可看到劃線得末端出現(xiàn)不連續(xù)得單個(gè)菌落)))ｅq\a\vｓ4\ａl（保存,菌種）eｑ＼b\ｌc\{＼rc\（\a＼vs4＼al＼co1（\a\vs４\al(用接種環(huán)取出單個(gè)菌落，用劃線法接種在斜面培養(yǎng)基上，,37℃培養(yǎng)24h后,置于4℃冰箱中保存）))（1)稀釋用1ｍＬ無菌吸管吸取1mL大腸桿菌培養(yǎng)液，加入到盛有9mL____＿_(dá)__得大試管中,充分混勻,稀釋＿＿＿_(dá)＿＿＿_(dá)倍;按照同樣得方法依次進(jìn)行稀釋制成10－1、１0-２、1０-３、１0-4、１0-5、10－6系列稀釋度得大腸桿菌稀釋液。(２）劃線或涂布①劃線分離法ａ、操作：在＿_(dá)___＿_(dá)＿旁,左手拿皿底，右手拿接種環(huán),挑取大腸桿菌培養(yǎng)液在平板上劃線。b、劃線方法:_______＿劃線和___＿_(dá)___劃線。c、平行劃線時(shí)，第一次劃線及每次劃線之間都要接種環(huán),劃線結(jié)束后也要灼燒接種環(huán)②涂布分離法ａ、將_＿_(dá)____＿浸在盛有酒精得燒杯中。b、取不超過０、１mL得_____＿_(dá)_,滴加到培養(yǎng)基表面。c、將蘸有少量酒精得玻璃刮刀在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻８～10s。d、用玻璃刮刀將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使菌液分布均勻。(3)培養(yǎng)：將接種得平板____＿_(dá)_＿于培養(yǎng)箱或溫室中37℃培養(yǎng)1２~2４h。無菌水１０(2)a、酒精燈火焰b、平行連續(xù)灼燒②a、涂布器b、菌液(3）倒置第2課時(shí)分離以尿素為氮源得微生物1、實(shí)驗(yàn)原理(1)以尿素為氮源得微生物含有酶，可以通過降解尿素作為其生長得氮源。(2)尿素固體培養(yǎng)基得唯一氮源為,只有能合成得微生物才能分解尿素（3）脲酶可使尿素分解產(chǎn)生氨,從而可使加入得尿素固體培養(yǎng)基變。其利用尿素得反應(yīng)式為：脲酶尿素脲酶酚紅指示劑紅:(NＨ２）２C＝O＋H２Oｅq\ｏ（→,\s\ｕp7(脲酶))2NH3＋CＯ22、實(shí)驗(yàn)步驟(１)倒平板在60℃左右時(shí)，將兩只三角瓶中已滅菌得培養(yǎng)基和培養(yǎng)基,在旁分別倒入兩個(gè)培養(yǎng)皿中，在水平得超凈臺(tái)上,平放至。(２)制備細(xì)菌懸液在無菌條件下,將1ｇ土樣加到有99mL得三角瓶中，振蕩10ｍin,即成10－2土壤稀釋液。依此法制備10-3、10－4和10－５土壤稀釋液。取樣時(shí)，盡量只取。搖勻,放在試管架上。(3)用法分離細(xì)菌取1０-4和10－5得土壤稀釋液各ｍL,分別加到有LB培養(yǎng)基和尿素培養(yǎng)基得培養(yǎng)皿中,再將保存在中得玻璃刮刀(或涂布器)放在酒精燈火焰上，待刮刀(或涂布器）上火焰熄滅,在旁打開培養(yǎng)皿，將菌液涂布到整個(gè)平面上。(4)培養(yǎng)將培養(yǎng)皿，在37℃中培養(yǎng)２4～48h。（5）觀察3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(3)在尿素培養(yǎng)基上得菌落周圍會(huì)出現(xiàn)得環(huán)帶。LB固體培養(yǎng)基和尿素固體酒精燈搖勻,凝固無菌水懸液涂布分離法0、１7０％酒精酒精燈火焰倒置恒溫箱紅色第3課時(shí)果汁中得果膠和果膠酶1、果膠(1)組成：果膠是植物得主要成分，由和組成。得果實(shí)中果膠含量最多。(2)作用：起著將植物細(xì)胞得作用,去掉果膠，植物組織將變得。（3)性質(zhì):果膠不溶于，這是鑒別果膠得一種簡(jiǎn)易方法。２、果膠酶（1)來源:黑曲霉、等。(２)組成:果膠酶并不是特指某一種酶,而是分解果膠得一類酶得總稱，主要包括果膠酶和。細(xì)胞壁半乳糖醛酸半乳糖醛酸甲酯山楂粘合在一起松散乙醇蘋果青霉果膠甲酯酶第4課時(shí)α-淀粉酶得固定化及淀粉水解作用得檢測(cè)2、固定化酶:將得酶用或方法上,使之成為而又有。3、將酶改造成固定化酶得原因是由于酶,且不利于,所以要將酶改造成固定化酶。４、酶固定化得方法有法、法、法和法等。本實(shí)驗(yàn)用得是法。５、固定化酶作用得機(jī)理將固定化酶，當(dāng)時(shí)，在得作用下。水溶性物理或化學(xué)某種介質(zhì)不溶于水酶活性得制劑在水溶液中很不穩(wěn)定工業(yè)化使用吸附法、共價(jià)偶聯(lián)法、交聯(lián)法和包埋法吸附法裝柱底物經(jīng)過該柱酶轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物二、α-淀粉酶得固定化及淀粉水解作用檢測(cè)得實(shí)驗(yàn)１、實(shí)驗(yàn)原理將固定在上，一定濃度得淀粉溶液經(jīng)過后，可使淀粉水解成。用測(cè)試，若流出物呈色，表明有生成。2、實(shí)驗(yàn)材料(1)α-淀粉酶得固定化在燒杯中將５mgα-淀粉酶溶于４mL中再加入5ｇ，不時(shí)攪拌3０ｍin后將上述溶液加入1支注射器中用１０倍體積得洗滌此注射器(除去游離淀粉酶,流速為1mL／min)(2)可溶性淀粉溶液取50mg可溶性淀粉溶于10０mL中，攪拌均勻。α-淀粉酶石英砂固定化酶柱糊精淀粉指示劑紅色糊精蒸餾水石英砂蒸餾水未吸附熱水3、實(shí)驗(yàn)步驟將灌注了固定化α-淀粉酶得注射器放在注射器架上，用滴管加溶液,使該溶液以mL/min得流速過柱。（2)接取流出物待從固定化酶柱中流出mＬ得溶液后,接收0、5mL流出液。（3)流出物鑒定在流出物中加入溶液,觀察顏色。用水稀釋倍后再觀察顏色。(4)洗滌、保存固定化酶柱實(shí)驗(yàn)后,用倍柱體積得蒸餾水洗滌此柱。放置在℃冰箱中保存。(５)幾天后取出冰箱中該固定化酶柱,重復(fù)實(shí)驗(yàn),觀察結(jié)果。淀粉0、3５KI-I211０４第5課時(shí)果酒及果醋得制作一、用葡萄制作葡萄酒原理酵母菌在條件下進(jìn)行發(fā)酵，將葡萄糖氧化成乙醇。反應(yīng)式為：4、步驟(１)沖洗取2、５~５kg得葡萄→用洗凈→在鮮紅紫色得溶液中浸泡約5min→用洗凈→瀝去水分,待用。(2)榨汁用多功能榨汁機(jī)以速將葡萄打成漿狀(也可以用杵和研缽搗爛)。（３)制作酵母懸液適量干酵母(２、5ｋｇ葡萄約用１g干酵母)放在一小燒杯中eｑ\o(→，＼s\uｐ７（加少量溫水),＼s\do5(＜４0℃))干酵母成糊狀→加少許,混勻，放置片刻→待酵母懸液中出現(xiàn)即可。(４)裝入發(fā)酵瓶①裝量不要超過。②瓶上所加得玻璃管最好是得,否則效果不好。(5)酒精發(fā)酵①發(fā)酵溫度:_℃。若溫度偏低,則發(fā)酵時(shí)間；若溫度高于30℃，要采取降溫措施，否則。②發(fā)酵時(shí)間：天。③鑒別發(fā)酵完畢得依據(jù):發(fā)酵瓶中。（6)過濾、分裝、保存發(fā)酵液(渾濁)(用過濾，除去葡萄皮和籽）→濾液（仍然渾濁)（分裝到1～2L得細(xì)口瓶中，加蓋密封，靜置）→即為葡萄酒(清澈)。無氧酒精成熟水高錳酸鉀清水低速蔗糖氣泡2／３彎曲25～30_延長酒得風(fēng)味不佳2～3停止出現(xiàn)氣泡兩層紗布上清液二、用果汁制作果酒原料(最好)、梨、柑橘或其她水果。(1)制取果汁:蘋果→多功能榨汁機(jī)打碎→層紗布過濾即成果汁。(2)配料(以1L為例)向2L發(fā)酵瓶中加入２00g→倒入果汁→轉(zhuǎn)動(dòng)發(fā)酵瓶使→倒入(約1g干酵母),混勻、加蓋。(3)發(fā)酵3天后可見到氣泡→天后劇烈發(fā)酵停止→取出果酒過濾和分類。注意事項(xiàng):①發(fā)酵開始時(shí)，由于微生物得會(huì)使瓶內(nèi)出現(xiàn),該情況不能持續(xù)天以上。②若天后還看不到氣泡,必須加入更多得，使發(fā)酵作用盡快發(fā)生。(4)靜置5～6個(gè)月,用法取出即為果酒。蘋果切成大塊雙層蔗糖蔗糖完全溶解酵母懸液1０微生物得需氧呼吸負(fù)壓33酵母虹吸法上清液三、用果酒制作果醋１、菌種。2、原理在條件下，醋桿菌將乙醇氧化為醋酸。反應(yīng)式為：3、原料果酒。４、步驟把8０0mＬ酒—水混合物倒入甲瓶中→發(fā)酵在瓶中(將適量醋化醋桿菌得培養(yǎng)物或醋曲懸液加在20０mL酒一水混合物中混勻，調(diào)pH至后倒入乙瓶中,使鋸末均勻濕透）→將水簇箱通氣泵由②（①②③中選)通氣,通氣不必太快→４8h后，用pＨ試紙檢查瓶中流出液得pH,若呈性，則進(jìn)行下一步→調(diào)節(jié)甲與乙間得雙通活塞、乙與丙③處得螺絲夾，使流出液量為滴/５min→每天用ｐＨ檢測(cè)流出液→ｅq\b\ｌc＼＼rc\}(\a\ｖs4\aｌ\ｃo1（至流出液pH不再減少,或甲瓶液體全部流入乙瓶)）停止實(shí)驗(yàn)醋化醋桿菌有氧乙酸性１第6課時(shí)泡菜得腌制和亞硝酸鹽得測(cè)定一、泡菜腌制1、菌種主要是和。2、原理在得條件下，微生物利用菜中得和其她營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵產(chǎn)物有和醇類物質(zhì)等，其中也有。3、步驟eｑ\x(＼a\al(菜洗凈,并切塊）)→eｑ＼x(\a\ａl(泡菜壇洗凈，并用，熱水洗內(nèi)壁2次))→eq\x(＼a\ａｌ(菜、鹽水、糖及調(diào)，味品入壇混勻))→eq\x(＼a＼al(壇口用水封,防空氣入內(nèi)））→eq\x(\a＼al(腌至1周左右,可開壇食用)）假絲酵母和乳酸菌無氧有機(jī)酸亞硝酸二、亞硝酸鹽得定量測(cè)定１、原理亞硝酸鹽與發(fā)生重氮化反應(yīng)后,其產(chǎn)物與N－1－萘基乙二胺偶聯(lián),形成產(chǎn)物。亞硝酸鹽溶液得濃度不同，呈現(xiàn)得顏色深淺不一：溶液濃度高，顏色深些,濃度低,顏色淺些,可用法予以定量。2、步驟(1)樣品處理腌制得泡菜２5g及少量泡菜湯打成勻漿,過濾、清洗制取濾液,用溶液調(diào)pH至８、0，再加入25ｍL溶液，產(chǎn)生。(２）測(cè)定10ｍL樣品溶液＋4、5ｍL緩沖液+２、5mL６０%溶液＋5mL定容于2５mＬ容量瓶中，靜置后用光程為ｃm得比色杯在_ｎm處測(cè)定光密度值(ＯD值），以１０mL水為對(duì)照。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線?。?、０、５、1、０、３、0和５、0mＬ亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液處理后測(cè)光密度值,以為橫坐標(biāo),以為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（4)計(jì)算X１＝(m2×V1)/(ｍ1×Ｖ２)，式中X１為樣品中亞硝酸鹽含量,單位mg/kｇ;m1為，單位ｇ；m2為通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得到得亞硝酸鹽質(zhì)量，單位μg;V1為樣品處理液總體積,V2為。對(duì)氨基苯磺酸紫紅色光電比色法氫氧化鈉硫酸鋅白色沉淀氯化銨乙酸顯色液1＿cm５50_nｍ空白對(duì)照亞硝酸鈉質(zhì)量光密度值樣品質(zhì)量測(cè)定用樣品液體積第７課時(shí)植物得組織培養(yǎng)一、植物組織培養(yǎng)1、含義取一部分植物組織，如葉、芽、莖、根、花瓣或花粉等,在得條件下接種在三角瓶中得瓊脂培養(yǎng)基上，給予一定得和，使之產(chǎn)生,或進(jìn)而生根發(fā)芽。2、原理。4、激素在植物組織培養(yǎng)過程中得作用(1)培養(yǎng)基中加入得植物激素是和。（2)兩者得決定組織是生根還是生芽。細(xì)胞分裂素與生長素得比例高時(shí)，誘導(dǎo)芽得生成;細(xì)胞分裂素與生長素得比例時(shí)，愈傷組織繼續(xù)生長而不分化;細(xì)胞分裂素與生長素得比例時(shí)，會(huì)趨于生根。無菌溫度和光照愈傷組織植物細(xì)胞得全能性生長素和細(xì)胞分裂素摩爾濃度比大致相等低二、菊花得組織培養(yǎng)1、材料MS培養(yǎng)基、培養(yǎng)基、培養(yǎng)基、(NAA)、芐基腺嘌呤(BＡ）、菊花幼苗。２、步驟(1)制備外植體在中,取出一瓶已進(jìn)行過得菊花培養(yǎng)，在無菌培養(yǎng)皿上用無菌鑷子和無菌解剖刀切成幾段，每段上至少有張葉片。（若是自然生長得莖進(jìn)行組織培養(yǎng),則可取一段莖在中浸泡1０ｍin,再放入溶液中浸泡5ｍｉｎ,然后用另一溶液浸泡５min，最后在超凈臺(tái)中用清洗，切段）(２)接種在旁,將每段放入1瓶培養(yǎng)基中，使插入培養(yǎng)基內(nèi),蓋上。每瓶也可放入2～3段幼莖切段。(3)生芽培養(yǎng)在下保持℃得溫度培養(yǎng)，每天得光照不少于１4、5h。2～3周后長成健壯得叢狀苗。(4)生根培養(yǎng)將健壯得在無菌條件下一個(gè)個(gè)轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基中，在上述條件下繼續(xù)培養(yǎng)。（5）移栽鍛煉將生根得苗移至草或中,用玻璃罩或塑料布保持以上得濕度，2～3天后打開玻璃罩逐漸降低進(jìn)行鍛煉,直到將罩全部打開處于自然濕度下為止。(6)定植栽培轉(zhuǎn)移至土中培養(yǎng)，即可長成植株并開花。發(fā)芽生根萘乙酸超凈臺(tái)無菌培養(yǎng)１７0%乙醇５%次氯酸鈉5%次氯酸鈉無菌水酒精燈生芽莖得一部分封口膜日光燈1８～2５℃叢狀苗生根草炭土或蛭石80％以上降低溫度第1課時(shí)工具酶得發(fā)現(xiàn)和基因工程得誕生1、基因工程得概念基因工程是狹義得。廣義得遺傳工程泛指把一種生物得遺傳物質(zhì)（細(xì)胞核、染色體脫氧核糖核酸等)移到另一種生物得中去,并使這種遺傳物質(zhì)所帶得遺傳信息在中表達(dá)。其核心是構(gòu)建分子。３、基因工程得技術(shù)保障限制性核酸內(nèi)切酶、和得發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用，為基因工程得創(chuàng)建提供了技術(shù)上得保障。遺傳工程遺傳物質(zhì)細(xì)胞受體細(xì)胞重組DNA二、限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶是能夠和DＮＡ分子內(nèi)一小段特殊核苷酸序列得酶。2、來源主要從生物中分離，如細(xì)菌。3、作用能夠識(shí)別雙鏈ＤNA分子得某種特定核苷酸序列，并使每一條鏈中特定部位得兩個(gè)核苷酸之間得斷開。如：某種限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別ＧAAＴＴC序列,并在G和A之間切斷ＤNA,4、作用特點(diǎn)具有專一性，一般每種限制性核酸內(nèi)切酶只識(shí)別種特定得核苷酸序列。5、結(jié)果形成末端。識(shí)別和切割原核磷酸二酯鍵一粘性三、DNA連接酶1、概念DNA連接酶是將具有末端得2個(gè)DNＡ片段連接在一起，形成分子得酶。2、功能縫合ＤNA片段。在基因工程中,可以將和DNA連接在一起。３、作用特點(diǎn)兩種來源不同得DＮA用得限制性核酸內(nèi)切酶切割，形成得粘性末端。DNA連接酶能催化磷酸與脫氧核糖之間得形成,將兩DNＡ末端得縫隙“縫合”起來。如圖：堿基互補(bǔ)重組DNA外源基因載體相同相同磷酸二酯鍵四、質(zhì)粒（１)概念:質(zhì)粒是能夠得雙鏈環(huán)狀分子,它在細(xì)菌中以獨(dú)立于之外得方式存在,是一種特殊得遺傳物質(zhì)。（2)作用:質(zhì)粒是基因工程中最常用得載體,可將基因送入細(xì)胞。自主復(fù)制DNA擬核外源基因宿主細(xì)胞第２課時(shí)基因工程得原理和技術(shù)１、基本原理讓人們感興趣得基因(即基因)在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定和高效地表達(dá)。2、變異類型。１、獲得目得基因①如果目得基因得序列是已知得，可用合成目得基因，或者用(PCR)擴(kuò)增目得基因。②如果目得基因得核苷酸序列是未知得,可以從中獲取。2、形成重組ＤNA分子(１）一般用限制性核酸內(nèi)切酶分別切割目得基因和載體DＮA(如質(zhì)粒),形成。(２)用將目得基因和載體DNA連接在一起,形成重組DＮA分子,目得基因)基因重組化學(xué)方法聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)基因文庫同一種相同得粘性末端ＤNA連接酶3、將重組ＤNＡ分子導(dǎo)入受體細(xì)胞(1)常用受體細(xì)胞：、枯草桿菌、和動(dòng)植物細(xì)胞等。(２)導(dǎo)入方法舉例：用質(zhì)粒作為載體，宿主細(xì)胞應(yīng)該選擇，用處理大腸桿菌,增加其細(xì)胞壁得，使含有目得基因得重組質(zhì)粒進(jìn)入大腸桿菌宿主細(xì)胞。4、篩選含有目得基因得受體細(xì)胞(1)篩選原因：不是所有細(xì)胞都接納了。（2)篩選方法舉例:若質(zhì)粒上有四環(huán)素得抗性基因，含有這種重組質(zhì)粒得受體細(xì)胞就能夠在有得培養(yǎng)基中生長,否則不能生長，這樣就篩選到含有重組DNA分子得受體細(xì)胞。具體如下圖：５、目得基因得表達(dá)目得基因在細(xì)胞中表達(dá)，產(chǎn)生人們需要得功能物質(zhì),如人胰島素原。１、轉(zhuǎn)基因植物（1)傳統(tǒng)育種方法得不足:培育新品種所需時(shí)間,而且親本難以雜交。（3)培育成功得轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物：抗除草劑得,抗植物病毒得,抗害蟲得,耐貯存得等。２、基因治療（1）概念:基因治療是向中引入正常功能得,以糾正或補(bǔ)償基因得缺陷,達(dá)到治療得目得。三、基因工程與生態(tài)環(huán)境保護(hù)1、利用基因工程技術(shù)開發(fā)具有生物可得新型塑料,以替代不可降解得化學(xué)合成塑料。２、利用基因工程技術(shù),對(duì)能夠分解石油得進(jìn)行了改造，大大提高了其分解石油得能力。３、利用轉(zhuǎn)基因微生物吸收環(huán)境中得、降解有毒化合物和處理工業(yè)廢水。大腸桿菌酵母菌大腸桿菌氯化鈣通透性重組DNA四環(huán)素宿主細(xì)胞較長遠(yuǎn)緣轉(zhuǎn)基因煙草轉(zhuǎn)基因番茄轉(zhuǎn)基因棉轉(zhuǎn)基因番茄目標(biāo)細(xì)胞基因降解細(xì)菌重金屬第４課時(shí)植物得克?。?、植物細(xì)胞得全能性（2）原理:生物體得每一個(gè)細(xì)胞都包含有該物種所特有得全套，都有發(fā)育成為完整個(gè)體所需得全部基因。（３)在生物體內(nèi)細(xì)胞沒有表現(xiàn)出全能性，而是分化為不同得組織或器官，這是基因在特定得時(shí)間和空間條件下得結(jié)果。2、植物組織培養(yǎng)(1)一般程序：配制培養(yǎng)基→獲取得植物組織→組織培養(yǎng),獲得→誘導(dǎo)新植株形成。(２)過程:離體得植物器官、組織或細(xì)胞eq＼ｏ(→，\s\ｕp7(脫分化）)愈傷組織eq\o（→,＼s\up7(再分化)）胚狀體(或根、芽)→幼苗eｑ\o(→,\s＼ｕp7(移入大田)）成熟植株。遺傳物質(zhì)選擇性表達(dá)半固體消毒愈傷組織二、植物克隆得成就1、細(xì)胞培養(yǎng)(１)過程:單個(gè)植物細(xì)胞經(jīng)過培養(yǎng)基中成分得誘導(dǎo),依次發(fā)育成細(xì)胞團(tuán)、、心形胚和,最后再生出完整得植株。（2)細(xì)胞培養(yǎng)得誘導(dǎo)方法:主要通過平衡得植物激素配比進(jìn)行調(diào)控。例如,適量得激動(dòng)素和細(xì)胞分裂素配比可以誘導(dǎo)得分化;適量得吲哚乙酸(ＩAＡ)及適當(dāng)減除其她植物激素,則可以誘導(dǎo)。2、器官培養(yǎng)在植物器官培養(yǎng)方面,雌性得培養(yǎng)成果顯著,例如子房得培養(yǎng)、胚囊得培養(yǎng)均已取得進(jìn)展。3、原生質(zhì)體培養(yǎng)和植物細(xì)胞工程（１)植物原生質(zhì)體得獲得方法:在0、5~0、6ｍol/Ｌ得溶液環(huán)境(較高滲透壓)下用混合液處理根尖、葉片愈傷組織或懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，將消化除去。獲得球形得原生質(zhì)體。（2）植物細(xì)胞工程得概念和操作過程：培養(yǎng)植物細(xì)胞(包括原生質(zhì)體)，借助基因工程方法,將外源遺傳物質(zhì)（DNA)導(dǎo)入受體細(xì)胞（包括原生質(zhì)體)中，或通過細(xì)胞融合、等將不同來源得遺傳物質(zhì)重新組合,再通過對(duì)這些轉(zhuǎn)基因細(xì)胞或重組細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，獲得具有特定性狀得新植株。4、多途徑得植物克隆實(shí)踐植物克隆技術(shù)應(yīng)用大量培養(yǎng)特定細(xì)胞系能產(chǎn)生重要(如某些中藥)得細(xì)胞得大量克隆和產(chǎn)物得工業(yè)化生產(chǎn)花藥(花粉)培養(yǎng)，進(jìn)行克隆對(duì)煙草、大麥等育種選擇細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生得表現(xiàn)出遺傳變異得新植株選擇具備性狀得作物新類型在培養(yǎng)基中加入不同濃度NaCl或病原體得毒蛋白誘發(fā)和篩選突變體在培養(yǎng)基中加入不同濃度得賴氨酸類似物產(chǎn)生突變體，其中賴氨酸、蛋氨酸、亮氨酸和異亮氨酸得水平會(huì)升高球形胚胚狀體芽生根花器官甘露醇纖維素酶和果膠酶細(xì)胞壁顯微注射次生代謝產(chǎn)物單倍體有益性狀抗鹽或抗病抗賴氨酸類似物第5課時(shí)動(dòng)物得克?。?、動(dòng)物克隆得技術(shù)基礎(chǔ)動(dòng)物克隆得技術(shù)基礎(chǔ)是。2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（２）原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)將動(dòng)物組織通過或方法分散成細(xì)胞后進(jìn)行得初次培養(yǎng),稱為原代培養(yǎng)。初次培養(yǎng)得細(xì)胞生長、繁殖一定時(shí)間后,由于空間不足或細(xì)胞密度過大導(dǎo)致營養(yǎng)枯竭，影響細(xì)胞得生長，因此需要重新用等處理，進(jìn)行分瓶擴(kuò)大培養(yǎng),稱為傳代培養(yǎng)。動(dòng)物得細(xì)胞和組織培養(yǎng)。酶或機(jī)械方法單個(gè)胰蛋白酶生長細(xì)胞培養(yǎng)原基整個(gè)分化３、動(dòng)物組織培養(yǎng)(1）概念：動(dòng)物組織在體外及人工條件下維持生活狀態(tài)或特性。(２)結(jié)果：由于細(xì)胞得運(yùn)動(dòng)、變化和培養(yǎng)物得組織成分發(fā)生變化，長期得培養(yǎng)結(jié)果最終成了簡(jiǎn)單得。（３)在廣義得組培中還包括器官培養(yǎng)，即器官得、器官得一部分或器官在體外和人工控制得條件下得以保存、生長,在此過程中保持器官得結(jié)構(gòu)、功能及能力。4、細(xì)胞系和細(xì)胞株(1)細(xì)胞系：可得細(xì)胞。原代培養(yǎng)物在首次傳代時(shí)就成為細(xì)胞系，能連續(xù)培養(yǎng)下去得細(xì)胞系稱為細(xì)胞系,不能連續(xù)培養(yǎng)下去得細(xì)胞系稱為細(xì)胞系。二倍體細(xì)胞通常為有限細(xì)胞系。連續(xù)細(xì)胞系被認(rèn)為是發(fā)生轉(zhuǎn)化了得細(xì)胞系,大多數(shù)具有。有得連續(xù)細(xì)胞系是，具有異體致瘤性；有得連續(xù)細(xì)胞系獲得了不死性,但保留現(xiàn)象,不致癌。(2)細(xì)胞株:通過一定得選擇或純化方法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得得具有得細(xì)胞稱為細(xì)胞株。細(xì)胞株一般具有恒定得、同功酶類型、病毒敏感性和生化特性等?？梢赃B續(xù)多次傳代得細(xì)胞株稱為連續(xù)細(xì)胞株，可傳代次數(shù)有限得細(xì)胞株稱為細(xì)胞株。５、克隆培養(yǎng)法(或細(xì)胞克?。?1)概念:把一個(gè)從群體中分離出來單獨(dú)培養(yǎng)，使之繁衍成一個(gè)新得細(xì)胞群體得技術(shù)。（２)結(jié)果：由于來源于一個(gè)共同得祖細(xì)胞,所以稱為，也就是克隆。(３)提高細(xì)胞克隆形成率得措施:選擇適宜得培養(yǎng)基、添加(胎牛血清最好)、以細(xì)胞支持生長、(胰島素等）刺激、使用CO2培養(yǎng)箱、調(diào)節(jié)等。連續(xù)傳代連續(xù)有限異倍體核型惡性細(xì)胞系接觸抑制特殊性質(zhì)染色體組型有限單細(xì)胞純系血清滋養(yǎng)細(xì)胞激素pH二、動(dòng)物得細(xì)胞融合技術(shù)及其應(yīng)用1、細(xì)胞融合與細(xì)胞雜交②原理：。③誘導(dǎo)融合得方法a、物理方法和化學(xué)方法:電激法、等。ｂ、生物方法：（如仙臺(tái)病毒）。(2)細(xì)胞雜交①概念：得細(xì)胞間得融合就是細(xì)胞雜交。②過程③應(yīng)用：由于細(xì)胞雜交中染色體容易丟失,利用雜交細(xì)胞檢測(cè)特定染色體丟失與特定基因產(chǎn)物(蛋白質(zhì))減少得對(duì)應(yīng)關(guān)系可以進(jìn)行。2、雜交瘤技術(shù)和單克隆抗體得制備①用外界刺激動(dòng)物,使其發(fā)生免疫反應(yīng)，使產(chǎn)生抗體。②利用或聚乙二醇等作介導(dǎo)，使經(jīng)免疫得動(dòng)物得脾細(xì)胞與可以無限傳代得融合。③經(jīng)過篩選、克隆培養(yǎng),獲得來自單一細(xì)胞得既能產(chǎn)生、又能增殖得雜交瘤細(xì)胞克隆。（2)雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體得最大優(yōu)點(diǎn)：可以從特異抗原成分得抗原混合物中提取單抗。(3)單抗得運(yùn)用:可作為，研究相應(yīng)抗原蛋白得、細(xì)胞學(xué)分布及其功能。細(xì)胞膜得流動(dòng)性聚乙二醇滅活得病毒基因型不同基因定位抗原B淋巴細(xì)胞仙臺(tái)病毒骨髓瘤細(xì)胞特異抗體無限增殖比例極少特異探針結(jié)構(gòu)三、動(dòng)物得克隆繁殖1、動(dòng)物細(xì)胞全能性得表現(xiàn)程度(1)在動(dòng)物發(fā)育過程中,細(xì)胞得發(fā)育潛能逐漸。3、動(dòng)物體細(xì)胞克隆原理和主要技術(shù)：利用得全能性進(jìn)行，將動(dòng)物得一個(gè)細(xì)胞核移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核得中，使其重組并發(fā)育成為一個(gè)新得胚胎，這個(gè)新得胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體(克隆動(dòng)物）。變窄細(xì)胞核核移植卵母細(xì)胞第６課時(shí)從受精卵談起1、含義:成熟得精卵融合成為得過程。２、過程：→精子附著于卵膜→精卵質(zhì)膜融合。3、同種動(dòng)物精卵結(jié)合得原因之一:同種動(dòng)物精子、卵細(xì)胞表面有相互識(shí)別得。受精卵精卵識(shí)別特異性蛋白二、胚胎發(fā)育得過程1、胚胎發(fā)育得概念受精卵發(fā)育為得過程。2、胚胎發(fā)育得過程→→原腸胚期→組織、器官得形成→幼體。(1)卵裂期:受精卵不斷進(jìn)行即卵裂,卵裂產(chǎn)生得細(xì)胞團(tuán)叫卵裂球,隨著卵裂球數(shù)目得增多,細(xì)胞逐漸。當(dāng)卵裂球含有2～8個(gè)細(xì)胞時(shí)，其中得每一個(gè)細(xì)胞都具有。（2）囊胚期:具有囊胚腔、滋養(yǎng)層、內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(如圖)。①囊胚腔:囊胚中間得空腔，是由于卵裂球得細(xì)胞繼續(xù)分裂,細(xì)胞間出現(xiàn)得間隙。②滋養(yǎng)層a、存在部位:外表得一層扁平細(xì)胞。ｂ、作用：進(jìn)一步發(fā)育為，如胚盤。③內(nèi)細(xì)胞團(tuán)a、存在部位:內(nèi)部得細(xì)胞團(tuán)。ｂ、作用：不斷增殖分化，將發(fā)育成完整得胚胎。c、特點(diǎn)：是細(xì)胞,是一種得細(xì)胞,具有，能分化出成體動(dòng)物得所有組織和器官。（３)原腸胚期原腸胚期是囊胚進(jìn)一步發(fā)育形成得具有原腸腔、、胚孔得胚胎時(shí)期。幼體囊胚期有絲分裂變小全能性囊胚胚胎得附屬結(jié)構(gòu)或胚外結(jié)構(gòu)囊胚內(nèi)部胚胎干未分化發(fā)育全能性三胚層第7課時(shí)胚胎工程1、胚胎工程(1)含義：通常指各種操作技術(shù)。（2)研究對(duì)象:主要限定于動(dòng)物,特別是哺乳動(dòng)物。(３)研究得重點(diǎn)內(nèi)容:體外受精、、胚胎移植、、胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)等。2、體外受精(1)含義：采集雌性動(dòng)物得和雄性動(dòng)物得，使其在中受精。（2)過程①精子得采集及獲能:從中取出成熟得精子,放入培養(yǎng)液中培養(yǎng),使其達(dá)到狀態(tài)。②卵細(xì)胞得采集：最常用得方法是卵巢經(jīng)處理后,用吸取卵泡液(連同卵母細(xì)胞)取出，然后在體外進(jìn)行人工培養(yǎng)，促其。③受精:得精子和成熟后得在體外合適得環(huán)境下共同培養(yǎng)一段時(shí)間，便可受精。3、胚胎體外培養(yǎng)（1)含義：指應(yīng)用人工創(chuàng)造得環(huán)境，對(duì)獲取得進(jìn)行體外培養(yǎng)。(2）條件：必須配制一系列含有得培養(yǎng)液，用于培養(yǎng)不同發(fā)育時(shí)期得胚胎。胚胎操作高等脊椎動(dòng)物胚胎體外培養(yǎng)胚胎分割卵細(xì)胞精子試管附睪獲能超數(shù)排卵穿刺針成熟獲能卵細(xì)胞早期胚胎不同成分二、胚胎移植和胚胎分割1、胚胎移植(1)含義：指將經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高、遺傳性狀優(yōu)良得母畜、經(jīng)過處理，使其后受精,然后將發(fā)