霉菌和酵母菌檢驗方法驗證報告

頁方法驗證報告方法依據(jù)/原理1.1方法依據(jù)：化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2015）第五章6霉菌和酵母菌檢驗方法1.2原理：化妝品檢樣在一定條件下培養(yǎng)后，1g或1mL化妝品中所污染的活的霉菌和酵母菌數(shù)量，藉以判明化妝品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般衛(wèi)生狀況。本方法根據(jù)霉菌和酵母菌特有的形態(tài)和培養(yǎng)特性，在虎紅培養(yǎng)基上，置28℃±2℃培養(yǎng)5d，計算所生長的霉菌和酵母菌數(shù)。使用范圍2.1適用于化妝品霉菌和酵母菌的測定。設(shè)備情況表1使用儀器設(shè)備一覽表設(shè)備名稱型號設(shè)備編號是否校準(zhǔn)校準(zhǔn)有效期是否滿足預(yù)期用途電子天平■是□否2022/7/29■是□否立式壓力蒸汽滅菌器■是□否2022/7/29■是□否電熱鼓風(fēng)干燥箱■是□否2022/7/29■是□否數(shù)顯恒溫水浴鍋■是□否2022/7/29■是□否霉菌培養(yǎng)箱■是□否2022/7/29■是□否超凈工作臺■是□否2022/7/29■是□否表2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和關(guān)鍵物料登記表名稱生產(chǎn)廠家規(guī)格/純度批號有效期狀態(tài)孟加拉紅培養(yǎng)基■正常可用□異常環(huán)境條件情況表3環(huán)境條件日期時間要求溫度/℃實測溫度/℃要求濕度/%實測濕度%是否滿足預(yù)期用途■是□否■是□否人員能力情況表4相關(guān)人員人員學(xué)歷專業(yè)相關(guān)檢測經(jīng)歷年限方法驗證/確認(rèn)情況6.1實驗步驟6.1.1樣品前處理6.1.1.1液體樣品：水溶性的液體樣品，用滅菌吸管吸取10mL樣品加到90mL滅菌生理鹽水中，混勻后，制成1：10檢液。6.1.1.2油性液體樣品：取樣品10g，先加5mL滅菌液體石蠟混勻，再加10mL滅菌的吐溫80，在40℃—44℃水浴中振蕩混合10min，加入滅菌的生理鹽水75mL（在40℃—44℃水浴中預(yù)溫），在40℃—44℃水浴中乳化，制成1：10的懸液。6.1.1.3膏、霜、乳劑半固體狀樣品：親水性的樣品：稱取10g，加到裝有玻璃珠及90mL滅菌生理鹽水的三角瓶中，充分振蕩混勻，靜置15min。用其上清液作為1:10的檢液。疏水性樣品：稱取10g，置于滅菌的研缽中，加10mL滅菌液體石蠟，研磨成粘稠狀，再加入10mL滅菌吐溫80，研磨待溶解后，加70mL滅菌生理鹽水，在40℃—44℃水浴中充分混合，制成1：10檢液。

6.1.1.4固體樣品：稱取10g，加到90mL滅菌生理鹽水中，充分振蕩混勻，使其分散混懸，靜置后，取上清液作為1：10的檢液。使用均質(zhì)器時，則采用滅菌均質(zhì)袋，將上述水溶性膏、霜、粉劑等，稱10g樣品加入90mL滅菌生理鹽水，均質(zhì)1min—2min；疏水性膏、霜及眉筆、口紅等，稱10g樣品，加10mL滅菌液體石蠟，10mL吐溫80，70mL滅菌生理鹽水，均質(zhì)3min—5min。6.1.2操作步驟6.1.2.1樣品稀釋，取1:10、1:100、1:1000的檢液各1mL分別注入滅菌平皿內(nèi)，每個稀釋度各接2個平皿，注入融化并冷至45℃±1℃左右的虎紅培養(yǎng)基，充分搖勻。凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置28℃±2℃培養(yǎng)5d，觀察并記錄。另取一個不加樣品的滅菌空平皿，加入15mL孟加拉紅培養(yǎng)基，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，置28℃±2℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5d，為空白對照。6.1.2計算方法先點數(shù)每個平板上生長的霉菌和酵母菌菌落數(shù)，求出每個稀釋度的平均菌落數(shù)。判定結(jié)果時，應(yīng)選取菌落數(shù)在5個—50個范圍之內(nèi)的平皿計數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后，即為每g（或每mL）檢樣中所含的霉菌和酵母菌數(shù)。其他范圍內(nèi)的菌落數(shù)報告應(yīng)參照菌落總數(shù)的報告方法報告之。6.1.4菌落計數(shù)及報告方法6.1.4.1首先選取平均菌落數(shù)在5個—50個之間的平皿，作為菌落總數(shù)測定的范圍。當(dāng)只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時，即以該平皿菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)報告之（見表1中例1）。

6.1.4.2若有兩個稀釋度，其平均菌落數(shù)均在5個—50個之間，則應(yīng)求出兩菌落總數(shù)之比值來決定，若其比值小于或等于2，應(yīng)報告其平均數(shù)，若大于2則以其中稀釋度較低的平皿的菌落數(shù)報告之（見表1中例2及例3）。

6.1.4.3若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于50個，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1中例4）。

6.1.4.4若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于5個，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1例5）。

6.1.4.5若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在5個—50個之間，其中一個稀釋度大于50個，而相鄰的另一稀釋度小于5個時，則以接近5個或50個的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1中例6）。

6.1.4.6若所有的稀釋度均無菌生長，報告數(shù)為每g或每mL小于10CFU。

6.1.4.7菌落計數(shù)的報告，菌落數(shù)在10以內(nèi)時，按實有數(shù)值報告之，大于100時，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，應(yīng)以四舍五入法計算。為了縮短數(shù)字后面零的個數(shù)，可用10的指數(shù)來表示（見表1報告方式欄）。在報告菌落數(shù)為“不可計”時，應(yīng)注明樣品的稀釋度。表1細(xì)菌計數(shù)結(jié)果及報告方式例次不同稀釋度平均菌落數(shù)兩稀釋度菌數(shù)之比霉菌和酵母菌菌落總數(shù)（CFU/mL或CFU/g）報告方式（CFU/mL或CFU/g）1234567注：CFU-菌落形成單位每g（或每mL）化妝品含霉菌和酵母菌數(shù)以CFU/g（mL）表示。6.2實驗結(jié)果例次不同稀釋度平均菌落數(shù)兩稀釋度菌數(shù)之比霉菌和酵母菌菌落總數(shù)（CFU/mL或CFU/g）報告方式（CFU/mL）特性值1300-4500CFU/mL結(jié)論7.1本實驗操作人員已接受相關(guān)培訓(xùn)，熟悉和掌握方法原理、