雞源大腸埃希氏菌流行病學(xué)調(diào)查及耐藥性分析

雞大腸桿菌病是養(yǎng)雞生產(chǎn)中常見和高發(fā)病，病原菌為大腸埃希氏菌，該菌為條件性致病菌，常存在于雞的呼吸道和消化道。該病臨床病型多樣，包括臍帶炎、急性敗血癥、眼炎、氣囊炎、肉芽腫、腦膜炎、滑膜炎、關(guān)節(jié)炎等，這些病型在臨床上或單獨發(fā)生或與其他疾病混合感染。該病不僅可以通過呼吸道、消化道傳播，還可以經(jīng)卵垂直傳播，可以感染不同日齡的雞，雛雞和青年雞易感性較高，季節(jié)性不明顯，帶菌雞是本病的主要傳染源，雞糞以及被雞糞污染的欄舍、雞籠、墊料、飼料、飲水、鞋子、服裝等均能傳播本病。天氣寒冷、悶熱、禽舍通風(fēng)不良等惡劣環(huán)境導(dǎo)致雞的免疫力下降，進(jìn)而引起雞發(fā)病。大腸埃希氏菌能造成消化道代謝紊亂，引起雞拉稀，造成雞群均勻度差，生長受阻，料肉比高，發(fā)病率和死亡率上升，死淘率增加，嚴(yán)重影響雞群的生產(chǎn)性能和經(jīng)濟(jì)效益，給養(yǎng)雞業(yè)造成很大的危害。雞大腸埃希氏菌血清型眾多，且不同血清型之間的菌株缺乏交叉免疫保護(hù)，不同地區(qū)流行的優(yōu)勢血清型不同，雞群無法通過接種疫苗的方式來獲得保護(hù)?？咕幬锸钱?dāng)前防治雞大腸埃希氏菌病的重要手段之一，但很多養(yǎng)殖場沒有對病原菌做藥物敏感性試驗，一直在盲目使用抗生素，致使大腸桿菌耐藥性日益嚴(yán)重，耐藥機理改變，呈現(xiàn)多重耐藥和交叉耐藥?？股氐膩y用和濫用還會導(dǎo)致肉食品中的藥物殘留超標(biāo)，殘留于動物體內(nèi)的抗生素，通過食物的形式進(jìn)入人體，導(dǎo)致人體出現(xiàn)泛發(fā)性瘙癢、紅疹、頭疼等過敏反應(yīng)，嚴(yán)重威脅著人類的健康，成為公共衛(wèi)生問題。為有效控制動物細(xì)菌感染性疾病的發(fā)生與流行，防止抗生素的盲目使用和濫用，韶關(guān)市專門立項對本區(qū)域內(nèi)動物細(xì)菌感染性疾病進(jìn)行病原學(xué)調(diào)查及病原菌耐藥性監(jiān)測研究，對雞源大腸埃希氏菌藥物耐藥性監(jiān)測是該項研究內(nèi)容之一。本研究通過2022年度采集的廣東韶關(guān)地區(qū)養(yǎng)雞場雞咽喉部、泄殖腔拭子和病死雞剖檢病料進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定和藥敏試驗，研究廣東韶關(guān)地區(qū)雞大腸埃希氏菌流行規(guī)律及其耐藥性，為臨床合理用藥和防治雞大腸埃希氏菌病提供科學(xué)依據(jù)。1材料與方法1.1樣品來源737份樣品來自廣東韶關(guān)地區(qū)41個規(guī)模養(yǎng)雞場和28個土雞散養(yǎng)場，用獨立包裝滅菌的棉拭子采集雞喉頭和肛門糞便樣本700份，病死雞肝臟、心血、脾、腸道內(nèi)容物病料37羽份。采集的所有樣本、病料放在保溫箱中低溫保存，2h內(nèi)運回實驗室。1.2主要實驗材料麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、HM瓊脂培養(yǎng)基購自廣東省環(huán)凱生物科技有限公司，細(xì)菌生化鑒定微量反應(yīng)管和藥敏紙片購自杭州濱和微生物試劑有限公司。1.3細(xì)菌分離、鑒定與純培養(yǎng)每份樣品劃線接種于麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)基，置于37℃培養(yǎng)24h，觀察菌落生長情況，挑取表面光滑濕潤、邊緣整齊、圓形、稍隆起的粉紅色單個典型菌落在麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)基劃線純培養(yǎng)，獲得純培養(yǎng)物后進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，并參照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》方法進(jìn)行生化反應(yīng)鑒定。鏡檢顯示兩端鈍圓，散在或成對存在的革蘭氏陰性短桿菌，生化反應(yīng)符合靛基質(zhì)試驗陽性、MR試驗陽性、V-P試驗陰性、枸櫞酸鹽利用試驗陰性、氧化酶試驗陰性、硫化氫產(chǎn)生陰性、山梨醇發(fā)酵陰性、賴氨酸脫羧酶陽性、鳥氨酸脫羧酶陽性、棉子糖發(fā)酵陽性和衛(wèi)矛醇發(fā)酵陽性者，鑒定為埃希氏大腸桿菌。1.4分離菌的藥物敏感性試驗按照細(xì)菌藥敏試紙使用說明書，根據(jù)K-B(Kirby-Bauer)紙片擴(kuò)散法對分離菌株進(jìn)行常用藥物的敏感性測定，統(tǒng)計試驗結(jié)果，分析其耐藥性。藥敏紙片包括青霉素、氨芐西林、阿莫西林、阿奇霉素、諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、慶大霉素、鏈霉素、阿米卡星（丁胺卡那）、卡那霉素、四環(huán)素、頭孢噻肟、新霉素、紅霉素、強力霉素（多西環(huán)素）、壯觀霉素、頭孢氨芐、氟苯尼考、泰樂菌素、頭孢噻吩、林可霉素、克林霉素共24種藥物（見表1）。表1藥敏試驗標(biāo)準(zhǔn)2結(jié)果2.1細(xì)菌的分離鑒定結(jié)果通過麥康凱培養(yǎng)基對737份樣品進(jìn)行細(xì)菌分離，革蘭氏染色鏡檢，生化特性鑒定等，結(jié)果顯示541份樣品分離到大腸埃希氏菌，檢出率73.41%。其中37份病死雞病料大腸埃希氏菌陽性29份，檢出率78.38%?？傮w泄殖腔大腸埃希氏菌檢出率87.78%(316/360)，咽喉部大腸埃希氏菌檢出率58.24%（198/340）。2.2不同規(guī)模飼養(yǎng)場樣品分離菌檢出結(jié)果分離菌結(jié)果顯示，規(guī)模場大腸埃希氏菌檢出率為73.72%（303/411），散養(yǎng)場大腸埃希氏菌檢出率為73.01%(238/326)，規(guī)模場與散養(yǎng)場差異不大。2.3分離菌的藥敏試驗結(jié)果分離菌的藥敏試驗結(jié)果顯示（見表2），大部分分離菌株表現(xiàn)出多重耐藥性（耐3種藥物以上）。3重藥物耐藥菌株比例8/69，占11.60%，4重藥物耐藥菌株比例3/69，占4.35%，5重藥物耐藥菌株比例4/69，占5.80%，6重藥物耐藥菌株比例3/69，占4.35%，7重藥物耐藥菌株比例6/69，占8.70%，8重藥物耐藥菌株比例4/69，占5.80%，9重藥物耐藥菌株比例4/69，占5.80%，10重藥物耐藥菌株比例6/69，占8.70%，11重藥物耐藥菌株比例3/69，占4.35%,12重藥物耐藥菌株比例4/69，占5.80%,13重藥物耐藥菌株比例5/69，占7.25%,14重藥物耐藥菌株比例2/69，占2.90%,15重藥物耐藥菌株比例1/69，占1.45%,16重藥物耐藥菌株比例2/69，占2.90%。分離菌株普遍對阿奇霉素、頭孢噻肟、阿米卡星、氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星敏感，對青霉素、氨芐西林、鏈霉素、卡那霉素、四環(huán)素、阿莫西林、氟苯尼考、泰樂菌素、林可霉素、克林霉素耐藥，最高可達(dá)到16重藥物耐藥，表明韶關(guān)地區(qū)大腸埃希氏菌多重耐藥現(xiàn)象比較嚴(yán)重，多重藥物耐藥比例高達(dá)79.71%(55/69)。表2藥敏試驗結(jié)果規(guī)模場分離菌多重藥物耐藥比例為97.56%（40/41），散養(yǎng)場多重藥物耐藥比例為53.57%(15/28)，表明規(guī)模場抗生素使用較散養(yǎng)場頻繁。3討論雞大腸埃希氏菌耐藥性的產(chǎn)生與平時飼養(yǎng)管理過程中長期不合理使用抗菌藥物密切相關(guān)，飼料中長期使用小劑量抗菌素作為動物生長促進(jìn)劑、細(xì)菌性疾病感染時盲目和長期大量使用抗菌素等均導(dǎo)致大腸埃希氏菌很強的耐藥性。細(xì)菌的耐藥性與抗生素藥物的選擇壓力有關(guān)，由于抗菌藥物的不合理使用，導(dǎo)致大腸埃希氏菌出現(xiàn)大量多重耐藥菌株，相關(guān)研究表明養(yǎng)殖業(yè)中常用的阿莫西林、氨芐青霉素、復(fù)方新諾明、鏈霉素、四環(huán)素等抗生素出現(xiàn)普遍的耐藥性，其耐藥率甚至達(dá)到了100%。本研究分離的雞大腸埃希氏菌菌株普遍對青霉素、氨芐西林、鏈霉素、卡那霉素、四環(huán)素、阿莫西林、氟苯尼考、泰樂菌素、林可霉素、克林霉素耐藥，多重藥物耐藥現(xiàn)象比較嚴(yán)重，多重藥物耐藥比例高達(dá)79.71%，規(guī)模場分離菌株多重耐藥比例高達(dá)97.56%，表明規(guī)模場盲目使用和濫用抗菌素現(xiàn)象非常嚴(yán)重。大腸埃希氏菌為人畜共患病病原體，人感染大腸埃希氏菌可引起腹瀉，新生兒腦膜炎等，大腸埃希氏菌在宿主體內(nèi)被殺死后所釋放的內(nèi)毒素可引起多種疾病，大腸埃希氏菌病的有效防控不僅可減少養(yǎng)雞業(yè)的經(jīng)濟(jì)損失，對人類公共安全衛(wèi)生也具有重要意義。由于雞大腸桿菌病是環(huán)境條件性疾病，病原菌大腸埃希氏菌血清型眾多,且不同血清型間缺乏交叉保護(hù)力,疫苗免疫接種效果不理想，疫苗免疫接種不作為預(yù)防該病的首選方法,目前該病的防治主要還是通過加強飼養(yǎng)環(huán)境的管理，控制雞群的飼養(yǎng)密度和使用抗菌藥物。大腸埃希氏菌病的防治應(yīng)該根據(jù)藥敏試驗選擇敏感抗生素，在防治過程中采取聯(lián)合用藥、交叉用藥以及輪換用藥的方式提高治療效果，減少耐藥性的產(chǎn)生，同時可通過加強通風(fēng)換氣，消毒，控制環(huán)境的溫度和濕度等措施預(yù)防大腸埃希氏菌