高中生物：微點(diǎn)四 基因工程關(guān)鍵步驟

微點(diǎn)專練（四）基因工程關(guān)鍵步驟

（時(shí)間：15分鐘）

1.獲得抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米自交系A(chǔ),技術(shù)路線如下圖。為防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)

化，構(gòu)建重組DNA分子需用2種限制酶，選擇的原則是（）

除草劑抗性基因G

①Ti質(zhì)粒內(nèi)，每種限制酶只有一個(gè)切割位點(diǎn)

②G基因編碼蛋白質(zhì)的序列中，每種限制酶只有一個(gè)切割位點(diǎn)

③酶切后，G基因形成的兩個(gè)黏性末端序列不相同

④酶切后，Ti質(zhì)粒形成的兩個(gè)黏性末端序列相同

A.①③B.①④

C.②③D.②④

答案A

解析為防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)化，構(gòu)建重組DNA分子需用2種限制酶，則質(zhì)粒

內(nèi)每種限制酶只有一個(gè)切割位點(diǎn)，①正確；含目的基因DNA內(nèi)每種限制酶也只

有一個(gè)切割位點(diǎn)，目的基因內(nèi)不能有限制酶切割位點(diǎn)，②錯(cuò)誤；為防止酶切產(chǎn)物

自身環(huán)化，則酶切后的兩個(gè)黏性末端序列不同，③正確、④錯(cuò)誤。

2.下圖為獲得抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米A的技術(shù)路線，含有內(nèi)含子的報(bào)告基因只能在

真核生物中正確表達(dá)，其產(chǎn)物能催化無(wú)色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色。轉(zhuǎn)化過(guò)程中愈傷組

織表面常殘留農(nóng)桿菌，會(huì)導(dǎo)致未轉(zhuǎn)化的愈傷組織可能在含除草劑的培養(yǎng)基中生

長(zhǎng)。相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.采用PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)，設(shè)計(jì)的引物間要避免形成氫鍵

B.為防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)化，構(gòu)建重組DNA分子需用兩種不同的限制酶

C.檢測(cè)是否轉(zhuǎn)化成功，需要依次利用抗生素抗性基因和報(bào)告基因

D.利用T—DNA可以將目的基因插入到農(nóng)桿菌的染色體DNA上

答案D

解析采用PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)，設(shè)計(jì)的引物應(yīng)與模板鏈結(jié)合，所以引物間不

能形成氫鍵，A正確；為防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)化，構(gòu)建重組DNA分子需用兩種

不同的限制酶，產(chǎn)生不同的黏性末端，以防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)化，B正確；利用

抗生素抗性基因可檢測(cè)重組DNA分子是否導(dǎo)入農(nóng)桿菌，由于轉(zhuǎn)化過(guò)程中愈傷組

織表面常殘留農(nóng)桿菌，會(huì)導(dǎo)致未轉(zhuǎn)化的愈傷組織可能在含除草劑的培養(yǎng)基中生

長(zhǎng)，且含有內(nèi)含子的報(bào)告基因只能在真核生物中正確表達(dá)，其產(chǎn)物能催化無(wú)色物

質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色，所以再通過(guò)報(bào)告基因可檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)化成功，C正確；

農(nóng)桿菌屬于原核生物，無(wú)染色體，D錯(cuò)誤。

3.某一質(zhì)粒載體如圖所示，外源DNA插入到Ampr或Tet1■中會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的基因失

活（Ampr表示氨茉青霉素抗性基因，Tet「表示四環(huán)素抗性基因）。有人將此質(zhì)粒載

體用及"〃HI酶切后，與用BmwHI酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接

酶進(jìn)行連接反應(yīng)，用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌，之后受體細(xì)胞的類型（對(duì)

兩種抗生素表現(xiàn)出抗性r或敏感性s）不包含（）

BamH1

復(fù)制起點(diǎn)

A.Amp「、Ter1B.Ampr>Ters

C.AmpS、TerrD.AmpS、Ter8

答案c

解析大腸桿菌中含有質(zhì)粒載體的，有兩種抗性，即Ampr、Ter「，A不符合題

意；含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌，有氨羊青霉素抗性，但沒(méi)有四

環(huán)素抗性，即Amp「、Te己B不符合題意；三種大腸桿菌中，不存在有四環(huán)素抗

性、氨芾青霉素敏感性的類型，C符合題意；含有環(huán)狀目的基因的大腸桿菌，沒(méi)

有抗性，即Amp，、Ters,D不符合題意。

4.為了增加菊花花色類型，研究者從其他植物中克隆出花色基因C（圖1）,擬將其

與質(zhì)粒（圖2）重組再借助農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花中。請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題：

B〃mH1

圖1圖2

（1）研究者從其他植物中克隆出花色基因C時(shí)采用了PCR技術(shù)擴(kuò)增，其中需要有

一段的核甘酸序列，以便根據(jù)這一序列合成種引物，除花色基

因C、引物之外，擴(kuò)增過(guò)程中還需要、0

⑵為防止目的基因的自身環(huán)化和任意連接，有同學(xué)認(rèn)為可以用EcoRi和

氏"〃HI兩種酶切割含C基因的DNA和圖中質(zhì)粒，有同學(xué)認(rèn)為不妥，理由是

⑶最后需要將重組質(zhì)粒導(dǎo)入菊花細(xì)胞，研究者采用了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，這是利用

了農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T—DNA（可轉(zhuǎn)移的DNA）的特性：

=若導(dǎo)入的是菊花體細(xì)胞，還需要通過(guò)

才能得到菊花植株。

答案（1）已知目的基因（花色基因C）2四種脫氧核甘三磷酸hqDNA聚合

酶（2）花色基因C兩側(cè)沒(méi)有BamHI的識(shí)別序列，不能被BamHI酶切，質(zhì)粒被

EcoRi和BamHI兩種酶切割后不能使目的基因連接在啟動(dòng)子和終止子之間

（3）可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上植物組織培養(yǎng)

解析（1）研究者從其他植物中克隆出花色基因C時(shí)采用了PCR技術(shù)擴(kuò)增，其中

需要有一段已知目的基因的核甘酸序列，以便根據(jù)這一序列合成2種引物，除花

色基因C、引物之外，擴(kuò)增過(guò)程中還需要dNTP（dATP、dTTP、dCTP、dGTP或

四種脫氧核昔三磷酸）、hqDNA聚合酶。

⑵為防止目的基因的自身環(huán)化和任意連接，有同學(xué)認(rèn)為可以用EcoRl和

BamHI兩種酶切割含C基因的DNA和圖中質(zhì)粒，有同學(xué)認(rèn)為不妥，理由是花

色基因C兩側(cè)沒(méi)有BamHI的識(shí)別序列，不能被BamHI酶切，質(zhì)粒被EcoRI

和股"”HI兩種酶切割后不能使目的基因連接在啟動(dòng)子和終止子之間。

（3）最后需要將重組質(zhì)粒導(dǎo)入菊花細(xì)胞，研究者采用了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，這是利用

了農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA（可轉(zhuǎn)移的DNA）的特性：可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，

并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。若導(dǎo)入的是菊花體細(xì)胞，還需要通過(guò)植

物組織培養(yǎng)才能得到菊花植株。

5.天然玫瑰因缺少控制合成藍(lán)色色素的基因B而不能開(kāi)藍(lán)色花?？茖W(xué)家從開(kāi)藍(lán)色

花的矮牽牛中提取了基因B后，利用生物工程技術(shù)培育出了開(kāi)藍(lán)色花的玫瑰。

下圖為該育種過(guò)程的操作流程。

基

開(kāi)藍(lán)

含

玫

0瑰

花

色

0有

因

皮

初

組

玫

的

一

的

部

一

細(xì)r

植

瑰

組

胞

株

質(zhì)1|

粒

注Amp「表示氨葦青霉素抗性基因，Tet「表示四環(huán)素抗性基因。外源DNA插入

到Ampr或Ted中會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活。限制酶EcoRI、"山dill和BamHI的

識(shí)別序列及切割位點(diǎn)均不相同。

請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

(1)圖中將基因B導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞的方法稱為o選擇Ti質(zhì)粒

作為載體的原因是Ti質(zhì)粒上的可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)

胞染色體的DNA上。

(2)在構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用圖中的(限制酶)。有人用該種限制酶

分別切割Ti質(zhì)粒和基因B后混合，加入DNA連接酶進(jìn)行反應(yīng)，用得到的混合

物直接轉(zhuǎn)化細(xì)菌甲。結(jié)果得到了四種細(xì)菌甲：未被轉(zhuǎn)化的、含環(huán)狀基因B的、

含Ti質(zhì)粒的和含重組Ti質(zhì)粒的。篩選目的細(xì)菌甲時(shí)，先用含的固體培

養(yǎng)基培養(yǎng)，不能生長(zhǎng)的是的細(xì)菌甲；然后再將能生長(zhǎng)的細(xì)菌甲接種到含

的固體培養(yǎng)基中，目的細(xì)菌甲在此培養(yǎng)基中(填“能”或“不

能”)生長(zhǎng)。

(3)由玫瑰韌皮部細(xì)胞形成組織乙的過(guò)程，實(shí)質(zhì)是的過(guò)程。

答案(1)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法T—DNA(2)及〃"HI氨茉青霉素未被轉(zhuǎn)化的和

含環(huán)狀基因B四環(huán)素不能(3)讓已經(jīng)分化的細(xì)胞，經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)后，失去其特有

的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞

解析(1)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，將目的基因?qū)?/p>

入Ti質(zhì)粒的T—DNA上，因?yàn)門—DNA能夠轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞染色體DNA上。

(2)在構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用圖中的這樣構(gòu)建的重組DNA分子，

含有標(biāo)記基因氨羊青霉素抗性基因，而不含四環(huán)素抗性基因，在含有氨羊青霉素

的固體培養(yǎng)基培養(yǎng)能生長(zhǎng)；而在含有四環(huán)素的固體培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)，這樣才能

選出含有目的基因的重組質(zhì)粒。如果用ffindin,不能判斷是否將目的基因插入

到質(zhì)粒中，所以應(yīng)該用BamHI切割目的基因和Ti質(zhì)粒。

（3）由圖可知組織乙是愈傷組織，玫瑰韌皮部細(xì)胞形成組織乙就是脫分化形成愈

傷組織的過(guò)程，其實(shí)質(zhì)是讓已經(jīng)分化的細(xì)胞，經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)后，失去其特有的結(jié)構(gòu)和

功能而轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞的過(guò)程。

單元檢測(cè)卷（三）

（時(shí)間:75分鐘滿分：100分）

一、選擇題：本題共20小題，每小題2分，共40分。每小題給出的四個(gè)選項(xiàng)中，

只有一個(gè)選項(xiàng)是最符合題目要求的。

1.下列不屬于基因工程所用到的基本工具的是（）

A.限制酶B.DNA連接酶

C.載體D.TaqDNA聚合酶

答案D

2.下列不屬于基因工程中常用載體的是（）

A.細(xì)菌質(zhì)粒B.噬菌體

C.動(dòng)、植物病毒D.細(xì)菌擬核DNA

答案D

3.下圖表示一項(xiàng)重要的生物技術(shù)，對(duì)圖中物質(zhì)a、b、c、d的描述，正確的是（）

TTAA

A.通常情況下，a與d需要用同一種限制酶進(jìn)行切割

B.b能識(shí)別特定的核甘酸序列，并將A與T之間的氫鍵切開(kāi)

C.c連接雙鏈間的A和T,使黏性末端處堿基互補(bǔ)配對(duì)

D.b代表的是限制性內(nèi)切核酸酶，c代表的是RNA聚合酶

答案A

解析b是限制性內(nèi)切核酸酶，能識(shí)別特定的核甘酸序列并使DNA分子的每一

條鏈中特定部位的兩個(gè)核甘酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi)，而不是使氫鍵斷開(kāi)；C是

DNA連接酶，能連接兩個(gè)DNA片段。

4.（2021?之江高二生物）PCR技術(shù)中，如何設(shè)計(jì)引物（）

A.PCR引物要根據(jù)需要擴(kuò)增的目標(biāo)DNA的堿基序列來(lái)設(shè)計(jì)

B.PCR引物要根據(jù)已知的DNA序列對(duì)應(yīng)的RNA序列來(lái)設(shè)計(jì)

C.PCR引物要根據(jù)已知的DNA序列對(duì)應(yīng)的tRNA的序列來(lái)設(shè)計(jì)

D.以上都不是正確方法

答案A

解析設(shè)計(jì)引物就是直接根據(jù)基因序列來(lái)設(shè)計(jì)，即根據(jù)需要擴(kuò)增的目標(biāo)DNA的

堿基序列來(lái)設(shè)計(jì)，A正確。

5.基因工程是在DNA分子水平進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的。在基因操作的步驟中，不進(jìn)行

堿基互補(bǔ)配對(duì)的是（）

A.化學(xué)合成法合成目的基因

B.目的基因與載體結(jié)合

C.將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞

D.目的基因的檢測(cè)和表達(dá)

答案C

解析化學(xué)合成法合成目的基因要根據(jù)已知基因核甘酸序列，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)

合成，A正確；目的基因與載體結(jié)合要通過(guò)DNA連接酶將二者互補(bǔ)的黏性末端

縫合，B正確；將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞，主要是通過(guò)相關(guān)方法將目的基

因送入細(xì)胞，不需要進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)，C錯(cuò)誤；目的基因的檢測(cè)一般通過(guò)PCR

技術(shù)，有堿基互補(bǔ)配對(duì)，D正確。

6.（2021.A9高二生物）下列表示抗凝血酶乳腺生物反應(yīng)器的制備過(guò)程，下列說(shuō)法

正確的是（）

抗凝血酶基因|也|受體細(xì)胞@一回?fù)Р﹟受體母牛

A.其中①表示受精卵

B.其中②表示性別為雄性的胚胎

C.常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將基因?qū)胧荏w細(xì)胞

D.在②發(fā)育的任何階段都可以進(jìn)行胚胎移植

答案A

解析圖中受體細(xì)胞為動(dòng)物細(xì)胞，故①表示受精卵，A正確；該過(guò)程是為了制備

乳腺生物反應(yīng)器，故②表示雌性的胚胎，B錯(cuò)誤；常用顯微注射法將目的基因?qū)?/p>

入動(dòng)物細(xì)胞，C錯(cuò)誤；常在桑建胚或囊胚期進(jìn)行胚胎移植，D錯(cuò)誤。

7.（2021.衢州高二期末）下列關(guān)于PCR擴(kuò)增DNA片段及凝膠電泳鑒定的說(shuō)法，錯(cuò)

誤的是（）

A.應(yīng)在漠酚藍(lán)遷移出凝膠前關(guān)閉電泳儀電源

B.微量移液器的槍頭在每吸取一種溶液后更換一次

C.不同的DNAMarker所含DNA片段長(zhǎng)度和含量是相同的

D.0.1%亞甲基藍(lán)溶液染色后要用75%酒精和冷的蒸儲(chǔ)水進(jìn)行脫色

答案C

解析不同的DNAMarker所含DNA片段長(zhǎng)度和含量是不同的，C錯(cuò)誤。

8.（2021-9+1高二生物）科學(xué)家將含人體a—抗胰蛋白酶基因的表達(dá)載體注射到羊

的受精卵中，該受精卵發(fā)育的雌羊乳汁中含有a一抗胰蛋白酶。下列有關(guān)轉(zhuǎn)基因

羊細(xì)胞的敘述，不正確的是（）

A.乳腺細(xì)胞的高爾基體參與a—抗胰蛋白酶的分泌

B.胚胎干細(xì)胞內(nèi)a一抗胰蛋白酶基因能進(jìn)行復(fù)制

C.卵細(xì)胞中都含有a一抗胰蛋白酶基因

D.漿細(xì)胞內(nèi)不表達(dá)a—抗胰蛋白酶基因

答案C

解析高爾基體是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的加工包裝車間，乳腺細(xì)胞的高爾基體參與a—

抗胰蛋白酶的分泌，A正確；胚胎干細(xì)胞內(nèi)a一抗胰蛋白酶基因能隨著細(xì)胞的分

裂而進(jìn)行復(fù)制，B正確；基因工程導(dǎo)入的基因一般為單個(gè)基因，減數(shù)分裂過(guò)程同

源染色體分離，卵細(xì)胞中不一定含有a—抗胰蛋白酶基因，C錯(cuò)誤；漿細(xì)胞的作

用是產(chǎn)生抗體，不表達(dá)a—抗胰蛋白酶基因，D正確。

9.（2021?北京師大附中高二期中）現(xiàn)代生物技術(shù)應(yīng)用的敘述，不正確的是（）

A.植物組織培養(yǎng)技術(shù)可用于轉(zhuǎn)基因植物的培育

B.胚胎移植技術(shù)可用于家畜為熊貓等瀕危動(dòng)物代孕

C.單克隆抗體技術(shù)可用于制備治療癌癥的“生物導(dǎo)彈”

D.蛋白質(zhì)工程可用于改造自然界現(xiàn)有的蛋白質(zhì)

答案B

解析轉(zhuǎn)基因植物中要將含有目的基因的受體細(xì)胞培養(yǎng)成植株，需要植物組織培

養(yǎng)技術(shù)，A正確；胚胎移植中的供體與受體應(yīng)為同一物種，此技術(shù)應(yīng)用于人類，

解決了某些不孕癥患者的生育問(wèn)題，應(yīng)用于家畜則是為了提高家畜的繁殖能力，

B錯(cuò)誤；“生物導(dǎo)彈”即是單克隆抗體+放射性同位素、化學(xué)藥物或細(xì)胞毒素，

C正確；蛋白質(zhì)工程可通過(guò)對(duì)現(xiàn)有基因進(jìn)行改造而合成自然界中不存在的蛋白

質(zhì)，D正確。

10.（2021?浙北G2高二生物）下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖

1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，請(qǐng)分析下列敘述正確的是（）

限制

及Z〃汨IHindisEcoRISmaI

酶

識(shí)別

5'-GIAATTC5f-CCC1GGG-

序列

5'-G1GATCC-3'5r-AIAGCTT-3'?3'3，

及切

3'-CCTAGtG-5'3'-TTCGAtA-5'3-CTTAAtG3，一GGGtCCC-

割位

—5'5，

點(diǎn)

&空?目的基因

5,——1-3，外源

3,丁uMmni5'DNA

BamHISmaIHindIII

圖2

A.一個(gè)圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaI切割前后，分別含有0個(gè)和4個(gè)游離的磷酸

基團(tuán)

B.若對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的SmaI酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越高

C.用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，可以使用SmaI切割

D.使用EcoRI限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNA可防止質(zhì)粒和外源DNA發(fā)生自

身環(huán)化

答案B

解析由于質(zhì)粒在切割前是一個(gè)環(huán)狀DNA分子，因此上面沒(méi)有游離的磷酸基團(tuán)；

當(dāng)質(zhì)粒被切割后形成了兩個(gè)末端各有1個(gè)游離的磷酸基團(tuán)，故共有2個(gè)游離的磷

酸基團(tuán)，A錯(cuò)誤；Smal酶切位點(diǎn)越多，表示G和C這一對(duì)堿基對(duì)所占的比例就

越高，而G和C之間含有三個(gè)氫鍵，故其熱穩(wěn)定性越高，B正確；質(zhì)?？股?/p>

抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因，由圖可知，標(biāo)記基因和外源DNA目的基因中，均含有

酶切位點(diǎn)，都可以被S〃"I酶破壞，故不能使用該酶剪切質(zhì)粒和含有目的

基因的DNA,C錯(cuò)誤；構(gòu)建含目的基因的重組質(zhì)粒時(shí)，使用Ec“Rl限制酶同時(shí)

處理質(zhì)粒、外源DNA會(huì)產(chǎn)生相同的黏性末端，不能防止質(zhì)粒和外源DNA發(fā)生

自身環(huán)化，D錯(cuò)誤。

11.下圖為數(shù)字PCR技術(shù)的原理示意圖，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

好g疑3段招

待分析PCR每個(gè)反應(yīng)單位中最檢測(cè)熒光并計(jì)數(shù).得

反應(yīng)體系多含有I個(gè)DNA分子出靶分子起始拷貝數(shù)

A.PCR每一循環(huán)包括變性、退火和延伸三步

B.每個(gè)反應(yīng)單位中都含有耐高溫的RNA聚合酶

C.每個(gè)反應(yīng)單位有無(wú)熒光取決于是否含有靶分子

D.數(shù)字PCR技術(shù)有利于提高病原體檢測(cè)的靈敏度

答案B

解析PCR技術(shù)中的每個(gè)循環(huán)由變性、退火、延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成，A

正確；每個(gè)反應(yīng)單位中都含有耐高溫的ThqDNA聚合酶，催化子鏈的延伸過(guò)程，

B錯(cuò)誤；熒光的出現(xiàn)是熒光探針?biāo)鈱?dǎo)致的，熒光探針將首先與模板DNA的相

應(yīng)區(qū)段結(jié)合（靶分子），隨著DNA復(fù)制延伸至熒光探針部位，導(dǎo)致熒光探針的水

解進(jìn)而產(chǎn)生熒光，顯然，每個(gè)反應(yīng)單位有無(wú)熒光取決于是否含有靶分子，C正確；

根據(jù)熒光是否出現(xiàn)能檢測(cè)目標(biāo)DNA的存在，因此數(shù)字PCR技術(shù)更有利于提高病

原體檢測(cè)的靈敏度，D正確。

12.科學(xué)家成功地把人的抗病毒干擾素基因“嫁接”到煙草的DNA分子上，從而

使煙草獲得了抗病毒的能力。下列與此實(shí)驗(yàn)相關(guān)的分析中，不正確的是（）

A.“嫁接”的成功，說(shuō)明人和煙草共用一套遺傳密碼

B.“嫁接”之所以能成功，是因?yàn)閮烧逥NA分子的構(gòu)成物質(zhì)相同

C.“嫁接”到煙草中的人抗病毒干擾素基因，將不能再自我復(fù)制

D.“嫁接”后的煙草，體內(nèi)將會(huì)產(chǎn)生抗病毒干擾素

答案C

解析自然界中所有生物都共有一套遺傳密碼，A正確；把人的抗病毒干擾素基

因植入煙草細(xì)胞中的DNA分子上，使煙草獲得了抗病毒的干擾素。人和植物的

DNA都是由脫氧核甘酸組成，都是規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu)，這是轉(zhuǎn)基因技術(shù)的物質(zhì)

基礎(chǔ)，B正確；“嫁接”到煙草中的人抗病毒干擾素基因，將能自我復(fù)制，遺傳

給子代，C錯(cuò)誤；“嫁接”后的煙草，體內(nèi)含有抗病毒干擾基因，所以會(huì)產(chǎn)生抗

病毒干擾素，D正確。

13.（2021.寧波統(tǒng)測(cè)）下圖是培育抗凍番茄的過(guò)程示意圖。下列相關(guān)敘述正確的是

（）

A.過(guò)程①和過(guò)程②所用的酶相同

B.轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的獲得是定向變異的結(jié)果

C.重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌的主要目的是篩選目的基因

D.可用DNA探針檢測(cè)抗凍基因是否在番茄植株中表達(dá)

答案B

解析過(guò)程①獲得抗凍基因（目的基因）的過(guò)程需要逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶參與，

過(guò)程②構(gòu)建重組質(zhì)粒的過(guò)程中需要用到限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接酶，A錯(cuò)

誤；轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的獲得是借助基因工程導(dǎo)致定向變異的結(jié)果，B正確；

重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌的主要目的是將抗凍基因（目的基因）導(dǎo)入受體細(xì)胞,C錯(cuò)誤;

可用DNA探針檢測(cè)抗凍基因是否插入番茄細(xì)胞的染色體的DNA上以及是否轉(zhuǎn)

錄出mRNA,D錯(cuò)誤。

14.缺乏維生素A就容易導(dǎo)致出現(xiàn)夜盲癥，營(yíng)養(yǎng)不良，甚至有一些能夠威脅到生

命。而0—胡蘿卜素可以在人體內(nèi)轉(zhuǎn)化成維生素A。科學(xué)家嘗試通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)

生產(chǎn)富含胡蘿卜素的大米。八氫番茄紅素合酶（其基因用psy表示）和胡蘿卜素脫

飽和酶（其基因用crtl表示）參與0—胡蘿卜素的合成。根據(jù)以上信息分析正確的

是（）

A.重組質(zhì)粒中的目的基因含有psy基因和crtl基因

B.構(gòu)建重組質(zhì)粒需要限制酶、DNA連接酶和核酸酶

C.可通過(guò)顯微注射法將目的基因?qū)胨臼荏w細(xì)胞

D.PCR既可擴(kuò)增特定基因也可檢測(cè)目的基因表達(dá)

答案A

解析根據(jù)“八氫番笳紅素合酶和胡蘿卜素脫飽和酶參與P-胡蘿卜素的合

成”可知，重組質(zhì)粒中的目的基因含有psy基因和crtl基因，A正確；構(gòu)建重組

質(zhì)粒需要限制酶、DNA連接酶，不需要核酸酶，B錯(cuò)誤；可通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

將目的基因?qū)胨臼荏w細(xì)胞，C錯(cuò)誤；PCR既可擴(kuò)增特定基因，但要檢測(cè)目的

基因是否表達(dá)應(yīng)該用抗原一抗體雜交法，D錯(cuò)誤。

15.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，其原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制類似。從理論推測(cè)，

循環(huán)產(chǎn)物中開(kāi)始出現(xiàn)兩條脫氧核昔酸鏈等長(zhǎng)的DNA雙鏈片段是在第幾輪循環(huán)

（）

A.lB.2

C.3D.4

答案C

解析第一、二輪循環(huán)合成的子鏈長(zhǎng)度均不同，根據(jù)半保留復(fù)制特點(diǎn)可知，前兩

輪循環(huán)產(chǎn)生的四個(gè)DNA分子的兩條鏈均不等長(zhǎng)，第三輪循環(huán)產(chǎn)生的DNA分子

存在等長(zhǎng)的兩條核甘酸鏈。

16.根據(jù)某基因上游和下游的堿基序列，設(shè)計(jì)合成了用于該基因PCR的兩段引物

（單鏈DNA）o引物與該基因變性DNA（單鏈DNA）結(jié)合為雙鏈DNA的過(guò)程稱為

退火。下圖是兩引物的Tm（引物熔解溫度，即50%的引物與其互補(bǔ)序列形成雙鏈

DNA分子時(shí)的溫度）測(cè)定結(jié)果，以下分析錯(cuò)誤的是（）

607280溫度代

A.兩引物分別與DNA的兩條互補(bǔ)單鏈結(jié)合，是子鏈延伸的起點(diǎn)

B.PCR過(guò)程中，退火溫度應(yīng)高于引物的Tm值以提高PCR效率

C.若兩引物的脫氧核甘酸數(shù)相同，推測(cè)引物2的(G+C)含量較高

D.適當(dāng)減少引物2的脫氧核甘酸數(shù)，可使其Tm值接近引物1

答案B

解析PCR過(guò)程是目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，引物與單鏈互補(bǔ)結(jié)合,

合成的子鏈在式應(yīng)DNA聚合酶的作用下進(jìn)行延伸，所以兩引物分別與DNA的兩

條互補(bǔ)單鏈結(jié)合，是子鏈延伸的起點(diǎn)，A正確；PCR過(guò)程中，退火溫度應(yīng)低于

引物的Tm值以提高PCR效率，B錯(cuò)誤；DNA含有的氫鍵數(shù)越多，其熱穩(wěn)定性

越高，而A和T堿基對(duì)間有兩個(gè)氫鍵，C和G堿基對(duì)間有三個(gè)氫鍵，曲線圖顯

示：引物2的Tm高于引物1,說(shuō)明引物2的熱穩(wěn)定性較高，因此若兩引物的脫

氧核甘酸數(shù)相同，推測(cè)引物2的(G+C)含量較高，C正確；適當(dāng)減少引物2的脫

氧核甘酸數(shù)，會(huì)降低引物2的熱穩(wěn)定性，可使其Tm值接近引物1,D正確。

17.某研究小組計(jì)劃通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增獲得目的基因，構(gòu)建轉(zhuǎn)基因工

程菌，下列有關(guān)PCR擴(kuò)增過(guò)程相關(guān)敘述不正確的是()

A.為方便構(gòu)建重組質(zhì)粒，在引物中需要增加適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切核酸酶位點(diǎn)

B.設(shè)計(jì)引物時(shí)需要避免引物之間形成堿基互補(bǔ)配對(duì)，而造成引物自連

C.PCR擴(kuò)增時(shí)，退火溫度的設(shè)定與引物長(zhǎng)度、堿基組成無(wú)關(guān)

D.如果PCR反應(yīng)得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物，則需要降低退火溫度或重新設(shè)計(jì)引物

答案C

解析構(gòu)建重組質(zhì)粒，首先要用限制酶切割含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒，所

以位于目的基因兩端的引物中需要增加適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切核酸酶位點(diǎn)，A正確；

設(shè)計(jì)的引物之間不能有堿基互補(bǔ)配對(duì)，否則引物自連，而不能與模板相連，B正

確；PCR擴(kuò)增時(shí)，退火溫度的設(shè)定與引物長(zhǎng)度、堿基組成有關(guān)，因?yàn)椴煌L(zhǎng)度

和堿基組成的引物中氫鍵數(shù)量不同，C錯(cuò)誤；PCR反應(yīng)得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物，可

能是退火溫度過(guò)高，導(dǎo)致引物與模板不能相連；或引物間相互配對(duì)，引物自連，

不能與模板相連，可通過(guò)降低退火溫度或重新設(shè)計(jì)引物進(jìn)行改進(jìn)，D正確。

18.運(yùn)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將奶牛細(xì)胞中編碼凝乳酶的基因轉(zhuǎn)移到大腸桿菌細(xì)胞中，

達(dá)到大規(guī)模生產(chǎn)凝乳酶的目的。下圖表示用作載體的質(zhì)粒和目的基因所在DNA

片段。下列操作與實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟环氖牵ǎ?/p>

BoRI

EcoR1Pst1

抗四環(huán)

素基因f------3'

1i~i-5'

凝乳酶

基因

A.用限制酶BamHI、PstI和DNA連接酶構(gòu)建基因的表達(dá)載體

B.用含氨茉青霉素的培養(yǎng)基篩選出的即為導(dǎo)入目的基因的細(xì)菌

C.可用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增目的基因

D.用Ca2‘處理大腸桿菌使其易于轉(zhuǎn)化

答案B

解析限制酶不能破壞目的基因，也不能破壞質(zhì)粒上的標(biāo)記基因，且應(yīng)該用不同

的限制酶進(jìn)行切割，以防止質(zhì)粒和目的基因自身的黏性末端連接或防止目的基因

與載體反向連接，所以構(gòu)建圖示的重組質(zhì)粒的酶切位點(diǎn)應(yīng)該選及"〃HI、Pst1,

用DNA連接酶將目的基因和質(zhì)粒連接，A正確；載體和導(dǎo)入目的基因的載體上

都存在氨芾青霉素抗性基因，因此不能依此來(lái)確定篩選出的是否為導(dǎo)入目的基因

的細(xì)菌，B錯(cuò)誤；可用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增目的基因，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、

操作簡(jiǎn)便、省時(shí)等特點(diǎn)，C正確；用Ca2+處理大腸桿菌增加細(xì)菌細(xì)胞壁的通透

性，使其成為感受態(tài)細(xì)胞，易于轉(zhuǎn)化，D正確。

19.為提高大豆對(duì)磷元素的吸收能力，研究人員利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將水稻的耐低

磷基因OsPTF轉(zhuǎn)移到大豆植株中，下圖為重組Ti質(zhì)粒上T—DNA的序列結(jié)構(gòu)示

意圖。下列相關(guān)敘述不正確的是（）

BamHIEcoRI

5,

3'

啟動(dòng)子1OsPTF終啟動(dòng)子2抗除草

基因±劑基因

A.以水稻RNA為模板通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄及PCR擴(kuò)增可獲得大量OsPTF基因

B.RNA聚合酶與啟動(dòng)子1識(shí)別并結(jié)合后，啟動(dòng)抗除草劑基因的轉(zhuǎn)錄

C.可通過(guò)含除草劑的選擇培養(yǎng)基篩選含有目的基因大豆愈傷組織

D.用EcoRI、BamHI雙酶切重組Ti質(zhì)粒后，經(jīng)電泳分離至少得到兩條帶

答案B

解析以水稻RNA為模板通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄可以合成cDNA,然后再以cDNA為模板

利用PCR擴(kuò)增可獲得大量OsPTF基因，A正確；識(shí)圖分析可知，抗除草劑基因

位于啟動(dòng)子2的后面，因此RNA聚合酶與啟動(dòng)子2識(shí)別并結(jié)合后，啟動(dòng)抗除草

劑基因的轉(zhuǎn)錄，B錯(cuò)誤；由于圖中T—DNA的序列中含有目的基因和抗除草劑

基因，故可通過(guò)含除草劑的選擇培養(yǎng)基篩選含有目的基因的大豆愈傷組織，C正

確；用EcoRI、&汨I雙酶切重組Ti質(zhì)粒后，會(huì)得到三種片段：含有耐低磷

基因OsPTF的片段、含有抗除草劑基因的片段和只含啟動(dòng)子1的片段，因此經(jīng)

電泳分離至少得到兩條帶，即含耐低磷基因OsPTF的片段和含有抗除草劑基因

的片段，D正確。

20.（2021.靜安區(qū)高二期末）如圖為某種質(zhì)粒的簡(jiǎn)圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)

切核酸酶&oRI、BamHI的酶切位點(diǎn)，P為轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)部位。已知目的基因的

兩端有EcoRI、BamHI的酶切位點(diǎn)，受體細(xì)胞為無(wú)任何抗藥性的原核細(xì)胞。下

列有關(guān)敘述正確的是（）

EcoRI

1

抗性基因

A.將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒分別用EcoRI酶切，在DNA連接酶作用下，

生成由兩個(gè)DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有兩種

B.DNA連接酶的作用是將酶切后得到的黏性末端連接起來(lái)形成一個(gè)重組質(zhì)粒，

該過(guò)程形成兩個(gè)磷酸二酯鍵

C.為了防止目的基因反向粘連和質(zhì)粒自身環(huán)化，酶切時(shí)可選用的酶是EcoRI和

BamHI

D.能在含青霉素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的受體細(xì)胞表明該目的基因已成功導(dǎo)入該細(xì)胞

答案C

解析根據(jù)題意，目的基因的兩端有EcoRi、及z〃汨I的酶切位點(diǎn)，將含有目的

基因的DNA用EcoRi酶切，會(huì)得到含目的基因的DNA片段和不含目的基因的

DNA片段；根據(jù)質(zhì)粒的簡(jiǎn)圖可知，將質(zhì)粒用Ec“RI酶切，會(huì)得到與質(zhì)粒周長(zhǎng)等

長(zhǎng)的鏈狀DNA；因此將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒分別用EcoRI酶切，在DNA

連接酶作用下，生成由兩個(gè)DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有三種，即質(zhì)粒與質(zhì)

粒連接，目的基因與目的基因連接、目的基因與質(zhì)粒連接，A錯(cuò)誤；DNA連接

酶的作用是將酶切后得到的黏性末端連接起來(lái)形成一個(gè)重組質(zhì)粒，該過(guò)程形成四

個(gè)磷酸二酯鍵，B錯(cuò)誤；EcoRI和&〃“HI的識(shí)別序列不同，獲取目的基因和切

割質(zhì)粒時(shí)，同時(shí)選用EcoRI和血相HI切割，目的基因兩端形成的末端不同，

切割開(kāi)的質(zhì)粒兩端形成的末端不同，再用DNA連接酶連接，可以防止目的基因

反向粘連和質(zhì)粒自身環(huán)化，C正確；題圖顯示，在構(gòu)建重組DNA分子的過(guò)程中，

質(zhì)粒中的青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因都不會(huì)被破壞，因此能在含青霉素和

四環(huán)素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的受體細(xì)胞不能表明目的基因已成功導(dǎo)入該細(xì)胞，D錯(cuò)

誤。

二、非選擇題：本題包括5小題，共60分。

21.(12分)凝乳酶是生產(chǎn)干奶酪不可缺少的制劑，主要來(lái)源是未斷奶小牛的胃黏

膜?，F(xiàn)在，運(yùn)用基因工程可進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。圖1所示獲取凝乳酶基因(N)、構(gòu)

建重組質(zhì)粒。用兩種識(shí)別切割序列完全不同的限制酶E和F從基因組DNA上切

下N,并將之取代質(zhì)粒zl(3.7kb)上相應(yīng)的E-F區(qū)域(0.2kb),成為重組質(zhì)粒czzL

圖1圖2

(1)用G酶和H酶分別切兩組重組質(zhì)粒czzl樣品，G酶切后得到1.5kb和3.0kb

兩個(gè)片段；H酶切后得到1.1kb和3.4kb兩個(gè)片段。根據(jù)G酶或H酶切結(jié)果，

判斷重組質(zhì)粒czzl和N的大小分別為kb,kbo

(2)下表是E酶和G酶的識(shí)別序列和切割部位。若將E酶切的DNA末端與G酶

切的DNA末端連接，需要酶，連接形成部位________o

限制酶EG

識(shí)別序列及5'—GGATCC-3'5'-TGATCA-3'

切割位點(diǎn)/,3，-ACTAGT-5,

3-CCTAGG-5A

A.既能被E也能被G切開(kāi)

B.能被E但不能被G切開(kāi)

C.能被G但不能被E切開(kāi)

D.既不能被E也不能被G切開(kāi)

(3)如凝乳酶基因(N)模板鏈中的3-TGA—5,序列對(duì)應(yīng)一個(gè)密碼子，翻譯時(shí)識(shí)別

該密碼子的tRNA上相應(yīng)的堿基序列是o

(4)早期生產(chǎn)凝乳酶主要采用大腸桿菌，因此需要先在LB培養(yǎng)基(已加入抗生素)

中培養(yǎng)大腸桿菌。圖2中抑菌效果最明顯的菌落是o

答案(1)4.51.0(2)DNA連接D

(3)3，一UGA—5，(4)A

解析(1)已知質(zhì)粒的長(zhǎng)度為3.7kb,其中EF區(qū)域長(zhǎng)度為0.2kb,所以切去EF段

后的質(zhì)粒長(zhǎng)度為3.7—0.2=3.5kb?，F(xiàn)用限制酶G切割重組質(zhì)粒樣品，結(jié)果被酶

G切割成1.1kb和3.4kb兩個(gè)片段，可知重組質(zhì)粒的總長(zhǎng)度為L(zhǎng)l+3.4=4.5kb,

所以目的基因長(zhǎng)度為4.5-3.5=1.0kbo

(2)上表是E酶和G酶的識(shí)別序列和切割部位。若將E酶切的DNA末端與G酶

切的DNA末端連接，需要DNA連接酶連接，形成部位既不能被E也不能被G

切開(kāi)。

(3)凝乳酶基因(N)模板鏈中的3，-TGA-5,序列對(duì)應(yīng)一個(gè)密碼子，該密碼子為5,

-ACU-3\翻譯時(shí)識(shí)別該密碼子的tRNA上相應(yīng)的堿基序列是3,-UGA-5,o

(4)圖2中，在已加入抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，抑菌效果最好的是A。

22.(12分)如圖為利用PCR技術(shù)檢測(cè)受檢人是否攜帶HIV(屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒)的示

意圖。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

受檢人甲總DNA受檢人乙總DNA

X

實(shí)驗(yàn)呈陰性

I

受檢人攜帶HIV受檢人不攜帶HIV

（l）HIV的遺傳物質(zhì)的單體是oHIV攜帶者體內(nèi)的T細(xì)胞

的核DNA能指導(dǎo)合成HIV的蛋白質(zhì)，原因是-

⑵設(shè)計(jì)圖中所示的引物時(shí)，應(yīng)滿足的要求：①引物自身不能存在堿基互補(bǔ)配對(duì)

序列，原因是避免引物自身通過(guò)折疊形成雙鏈區(qū)；②引物之間不能存在

，原因是避免兩引物結(jié)合成雙鏈；③引物只能和HIV逆

轉(zhuǎn)錄形成的堿基互補(bǔ)配對(duì)。

⑶在PCR反應(yīng)體系中，除具備緩沖液，模板DNA分子和引物外，還應(yīng)有

（選填編號(hào)）0

①式應(yīng)DNA聚合酶②逆轉(zhuǎn)錄酶③dNTP④4種堿基⑤氨基酸

答案（1）核糖核甘酸HIV的RNA逆轉(zhuǎn)錄出的DNA能整合到T細(xì)胞的核DNA

中，且能被正常轉(zhuǎn)錄、翻譯（2）堿基互補(bǔ)配對(duì)序列DNA序列（3）①③

解析（l）HIV的遺傳物質(zhì)是RNA,其單體為核糖核昔酸。HIV的RNA逆轉(zhuǎn)錄

出的DNA能整合到HIV攜帶者T細(xì)胞的核DNA中，且能被正常轉(zhuǎn)錄、翻譯，

因此HTV攜帶者T細(xì)胞中的核DNA能指導(dǎo)合成HIV的蛋白質(zhì)。

（2）設(shè)計(jì)圖中所示引物時(shí)，應(yīng)滿足的要求：①引物自身不能存在堿基互補(bǔ)配對(duì)序

列，以避免引物自身通過(guò)折疊形成雙鏈區(qū)；②引物之間不能存在堿基互補(bǔ)配對(duì)序

列，以避免兩引物結(jié)合成雙鏈；③引物只能和HIV逆轉(zhuǎn)錄形成的DNA序列堿基

互補(bǔ)配對(duì)。

（3）在PCR反應(yīng)體系中，除具備模板DNA分子和引物外，還應(yīng)有ThqDNA聚合

酶和原料（dNTP）。

23.（12分）（2021.浙江效實(shí)中學(xué)高二期中）為解除柑橘黃龍病對(duì)柑橘產(chǎn)業(yè)的嚴(yán)重影

響，美國(guó)科學(xué)家近日從菠菜中獲得了一種能抵抗柑橘黃龍病的蛋白質(zhì)的基因，并

已經(jīng)成功地進(jìn)行了一系列培育轉(zhuǎn)基因植株的研究。其過(guò)程大致如下，請(qǐng)分析后作

答。

(1)有兩種識(shí)別切割序列完全不同的限制酶E和F從菠菜基因組DNA上切下目的

基因并取代Ti質(zhì)粒(4.0kb)上相應(yīng)的EF區(qū)域(0.2kb)形成重組質(zhì)粒，該過(guò)程還必

須用到的酶是,形成的重組質(zhì)粒(填“能”或“不能”)被

E酶切割。

⑵若圖中Ti質(zhì)粒上限制酶G切割位點(diǎn)與E的切割位點(diǎn)距離0.9kb,限制酶H切

割位點(diǎn)距F切割位點(diǎn)0.5kb,分別用限制酶G和限制酶H酶切兩份重組質(zhì)粒樣

品，結(jié)果如下表。據(jù)此可判斷目的基因的大小為kb；并將目的基因內(nèi)部

的限制酶H切割位點(diǎn)標(biāo)注在下圖中。

GH

1.8kb1.3kb

3.2kb3.7kb

質(zhì)粒區(qū)域目的基因

(每小格代表0」kb)

⑶在上述培育過(guò)程中兩次用到農(nóng)桿菌，它與柑橘細(xì)胞相比較，在結(jié)構(gòu)上最主要

的區(qū)別是，導(dǎo)入重組質(zhì)粒后的農(nóng)桿菌的作用是

答案(l)DNA連接酶能

(2)1.2標(biāo)記如圖

質(zhì)粒區(qū)域目的基因

(每小格代表().1kb)

(3)無(wú)核被膜包被的細(xì)胞核感染植物，將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中

解析(1)將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)需要DNA連接酶；重組質(zhì)粒中含有E酶的

識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，因此形成的重組質(zhì)粒能被E酶切割。

⑵已知Ti質(zhì)粒的長(zhǎng)度為4.0kb,其中EF區(qū)域長(zhǎng)度為0.2kb,所以切去EF段后

的質(zhì)粒長(zhǎng)度為4.0—0.2=3.8kb?，F(xiàn)用限制酶G切割重組質(zhì)粒樣品，結(jié)果被酶G

切割成1.8kb和3.2kb兩個(gè)片段，可知重組質(zhì)粒的總長(zhǎng)度為1.84-3.2=5.0kb,

所以目的基因長(zhǎng)度為5.0-3.8=1.2kbo重組質(zhì)粒中G的切割位點(diǎn)距E的切割位

點(diǎn)0.9kb,單獨(dú)用限制酶G切割后產(chǎn)生1.8kb和3.2kb兩個(gè)片段，說(shuō)明在重組質(zhì)

粒中除了圖中標(biāo)示出來(lái)的G酶識(shí)別位點(diǎn)外，還有一個(gè)G酶識(shí)別位點(diǎn)；H酶的酶

切位點(diǎn)距F0.5kb,用H酶單獨(dú)切后產(chǎn)生1.3kb和3.7kb兩個(gè)片段，說(shuō)明在重組

質(zhì)粒中含有兩個(gè)H的酶切位點(diǎn)，根據(jù)題中信息提示“將目的基因內(nèi)部的酶G、

酶H切割位點(diǎn)標(biāo)注在圖上”，可確定在EF之間分別含有G和H的一個(gè)識(shí)別位

點(diǎn)。可斷定G的識(shí)別位點(diǎn)，在距離E點(diǎn)右側(cè)0.9kb處，H的識(shí)別位點(diǎn)在距F左

側(cè)0.8kb處，則目的基因內(nèi)部的限制酶H的切割位點(diǎn)位于質(zhì)粒區(qū)域上限制酶G

右側(cè)1.3kb處。如下圖所示：

G?????????????HB?????

質(zhì)粒區(qū)域目的基因

（每小格代表0.1kb）

（3）農(nóng)桿菌屬于原核生物，柑橘屬于真核生物，它與柑橘細(xì)胞相比較，在結(jié)構(gòu)上

最主要的區(qū)別是原核細(xì)胞無(wú)核被膜包被的細(xì)胞核，導(dǎo)入重組質(zhì)粒后的農(nóng)桿菌的作

用是感染植物，將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中。

24.（12分）脂肪酶在洗滌劑、食品、造紙、油脂、化妝品、制藥、生物柴油等多

個(gè)工業(yè)領(lǐng)域中有廣泛應(yīng)用，人們應(yīng)用生物技術(shù)可以對(duì)脂肪酶進(jìn)行改造和生產(chǎn)。回

答下列問(wèn)題。

⑴科學(xué)家將脂肪酶位于蛋白質(zhì)表面的一個(gè)異亮氨酸替換為蘇氨酸，使脂肪酶的

半衰期提高2倍，大大提高其穩(wěn)定性，在改造過(guò)程中需要對(duì)