病理生理學(xué)-第七章-細(xì)菌感染的檢查與防治

第七章

細(xì)菌感染的檢查與防治

病原生物學(xué)學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握：細(xì)菌感染防治的主要原則。熟悉：細(xì)菌學(xué)診斷的主要方法。

第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法一、細(xì)菌學(xué)診斷（一）標(biāo)本的采集與運(yùn)送標(biāo)本的采集與送檢的質(zhì)量好壞直接關(guān)系到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。采集標(biāo)本進(jìn)行病原學(xué)和血清學(xué)檢驗(yàn)，應(yīng)注意以下原則：1．早期采集

2．無菌采集3．根據(jù)致病菌在患者不同病期的體內(nèi)分布和排出部位，采取不同標(biāo)本。例如流行性腦膜炎患者取腦脊液、血液或出血瘀斑；傷寒患者在病程1～2周內(nèi)取血液，2～3周時(shí)取糞便。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法一、細(xì)菌學(xué)診斷（一）標(biāo)本的采集與運(yùn)送標(biāo)本的采集與送檢的質(zhì)量好壞直接關(guān)系到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。采集標(biāo)本進(jìn)行病原學(xué)和血清學(xué)檢驗(yàn)，應(yīng)注意以下原則：4．采集的標(biāo)本必須盡快送檢，大多數(shù)細(xì)菌標(biāo)本可冷藏送檢，但對(duì)不耐寒冷的某些細(xì)菌，如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌送檢中要注意保溫。糞便標(biāo)本中含雜菌多，常置于甘油緩沖鹽水保存液中。5．標(biāo)本作好標(biāo)記，詳細(xì)填寫化驗(yàn)單，以保證各環(huán)節(jié)準(zhǔn)確無誤。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法（二）細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定原則上所有標(biāo)本均應(yīng)作分離培養(yǎng)，以獲得純培養(yǎng)后進(jìn)一步鑒定。根據(jù)不同疾病采取不同標(biāo)本如血、尿、糞便、咽拭子以及腦脊液等進(jìn)行細(xì)菌的分離和鑒定，是確診細(xì)菌性感染最可靠的方法。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法1．細(xì)菌培養(yǎng)

分離培養(yǎng)原則上所有標(biāo)本均應(yīng)作分離培養(yǎng)，以獲得純培養(yǎng)物后進(jìn)一步鑒定。根據(jù)菌落形態(tài)、氣味、色素及培養(yǎng)基的特性，結(jié)合標(biāo)本類型和患者的信息，可為進(jìn)一步的鑒定提供線索或給出報(bào)告。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法2．顯微鏡檢查

主要包括不染色標(biāo)本和染色標(biāo)本的檢查。通過觀察細(xì)菌的有無、主要細(xì)菌群體和動(dòng)力，可了解是否為細(xì)菌性感染，有無特殊動(dòng)力，并可為下一步檢查選擇適宜的方法和途徑。凡在形態(tài)和染色性上具有特征的致病菌，直接涂片染色后鏡檢，還有助于初步診斷。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法3．生化試驗(yàn)

細(xì)菌的代謝活動(dòng)依靠系列酶的催化作用，不同致病菌具有不同的酶系，故其代謝產(chǎn)物不盡相同，籍此可對(duì)一些致病菌進(jìn)行鑒別?，F(xiàn)已有多種微量、快速、半自動(dòng)或自動(dòng)的細(xì)菌生化反應(yīng)試劑條（板）和檢測(cè)儀器研制成功，并有商品供應(yīng)。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法4．血清學(xué)鑒定

利用已知的特異性抗體檢查未知的純培養(yǎng)細(xì)菌，以確定細(xì)菌的種、型，如用志賀菌屬、沙門菌屬等的特異性多價(jià)、單價(jià)診斷血清，與分離的待檢菌做玻片凝集試驗(yàn)，鑒定菌種和確定菌型，是細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的常規(guī)方法。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法5．動(dòng)物試驗(yàn)

主要用于分離、鑒定致病菌等。常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有小鼠、豚鼠和家兔等。應(yīng)按實(shí)驗(yàn)要求，選用一定的體重和年齡，具有高度易感性的健康動(dòng)物。接種途徑有皮內(nèi)、皮下、腹腔、肌肉、靜脈、腦內(nèi)和灌胃等。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法5．動(dòng)物試驗(yàn)

接種后應(yīng)仔細(xì)觀察動(dòng)物的食量、精神狀態(tài)和局部變化，有時(shí)尚要測(cè)定體重、體溫和血液等指標(biāo)。若動(dòng)物死亡，應(yīng)立即解剖，檢查病變，或進(jìn)一步作分離培養(yǎng)，證實(shí)由何病菌所致。含雜菌多的標(biāo)本，也可通過接種易感動(dòng)物獲得純培養(yǎng)，達(dá)到分離致病菌的目的。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法6．藥物敏感試驗(yàn)

藥敏試驗(yàn)對(duì)指導(dǎo)臨床選擇用藥，及時(shí)控制感染有重要意義。方法有紙碟法、小杯法、凹孔法和試管法等，以單片紙碟法和試管稀釋法常用。紙碟法是根據(jù)抑菌圈有無、大小來判定試驗(yàn)菌對(duì)該抗菌藥物耐藥或敏感。試管法是以抗菌藥物的最高稀釋度仍能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)管為終點(diǎn)，該管含藥濃度即為試驗(yàn)菌株的敏感度。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法（三）病原菌抗原的檢測(cè)從患者標(biāo)本中分離并鑒定出病原菌，雖然是診斷某種細(xì)菌性感染的最可靠依據(jù)，但往往患者在發(fā)病早期使用了抗生素，標(biāo)本中的病原菌已被抑制或被殺死，不可能分離出病原菌，因此我們可以通過檢出病原菌的抗原成分達(dá)到這一目的。用特異性抗體可檢出極微量的細(xì)菌抗原成分。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法常用于細(xì)菌學(xué)診斷的免疫學(xué)技術(shù)有：1．酶免疫技術(shù)（EIA）

目前常用的方法有酶聯(lián)免疫吸附法和酶標(biāo)免疫組化法。主要用于淋病奈瑟菌、沙門菌、大腸埃希菌等檢測(cè)。2．協(xié)同凝集試驗(yàn)

以分泌SPA的金黃色葡萄球菌作為特異性抗體的載體，與待檢抗原做協(xié)同凝集試驗(yàn)。常用于可溶性抗原的檢測(cè)。該方法簡(jiǎn)便、快速，并且提高了敏感性。臨床上用于流行性腦脊髓膜炎、傷寒、霍亂、淋病的早期診斷。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法常用于細(xì)菌學(xué)診斷的免疫學(xué)技術(shù)有：3．免疫熒光技術(shù)（IF）

如用熒光菌球法檢測(cè)抗原，當(dāng)有可疑細(xì)菌在含熒光抗體的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)4～6小時(shí)后，即可在熒光顯微鏡下觀察到熒光菌球。該法省時(shí)、特異性和敏感性均較高。此法還可直接從陽(yáng)性標(biāo)本中取出熒光菌球，進(jìn)行分離培養(yǎng)獲得純種細(xì)菌。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法常用于細(xì)菌學(xué)診斷的免疫學(xué)技術(shù)有：4．對(duì)流免疫電泳（CIE）

常用于檢測(cè)腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌或流感嗜血桿菌特異性抗原。因腦膜炎奈瑟菌易自溶，患者腦脊液中有可溶性抗原，采用CIE方法，1小時(shí)內(nèi)即可得結(jié)果。5．免疫印跡技術(shù)

由十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳、轉(zhuǎn)印與標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合完成對(duì)標(biāo)本中細(xì)菌蛋白的檢測(cè)。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法（四）病原菌核酸的檢測(cè)1．核酸雜交技術(shù)

是應(yīng)用放射性核素或生物素、地高辛、辣根過氧化物酶等非放射性物質(zhì)標(biāo)記的已知序列核酸單鏈作為探針，在一定條件下，按照堿基互補(bǔ)原則與待測(cè)標(biāo)本的核酸單鏈退火形成雙鏈雜交體。然后，通過雜交信號(hào)的檢測(cè)，鑒定血清、尿、糞或活檢組織等中有無相應(yīng)的病原體基因及其分子大小。

第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法（四）病原菌核酸的檢測(cè)1．核酸雜交技術(shù)

核酸雜交技術(shù)有液相與固相之分。固相核酸雜交較常用，有原位雜交、斑點(diǎn)雜交、Southern印跡、Northern印跡等。核酸雜交可從標(biāo)本中直接檢出病原體，不受標(biāo)本中的雜質(zhì)干擾，對(duì)尚不能或難分離培養(yǎng)的病原體尤為適用。用核酸雜交技術(shù)來檢測(cè)細(xì)菌感染中的致病菌，有結(jié)核分枝桿菌、幽門螺桿菌、空腸彎曲菌、致病性大腸埃希菌等。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法2．PCR技術(shù)

是一種無細(xì)胞的分子克隆技術(shù)，能在體外經(jīng)數(shù)小時(shí)的處理即可擴(kuò)增成上百萬個(gè)同一基因分子。PCR技術(shù)的基本步驟為從標(biāo)本中提取DNA作為擴(kuò)增模板；選用一對(duì)特異寡核苷酸作為引物，經(jīng)不同溫度的變性、退火、延伸等使之?dāng)U增；擴(kuò)增產(chǎn)物作溴乙錠染色的凝膠電泳，紫外線燈下觀察特定堿基對(duì)數(shù)的DNA片段；出現(xiàn)橙紅色電泳條帶者為陽(yáng)性。若需進(jìn)一步鑒定，可將凝膠中分離的PCR產(chǎn)物回收，再用特異探針確定。

第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法2．PCR技術(shù)

PCR技術(shù)具有快速、靈敏和特異性強(qiáng)等特點(diǎn),現(xiàn)已用于生物醫(yī)學(xué)中的多個(gè)領(lǐng)域。在細(xì)菌學(xué)方面，可用PCR技術(shù)檢測(cè)標(biāo)本中的結(jié)核分枝桿菌、淋病奈瑟菌、腸產(chǎn)毒素型大腸埃希菌、軍團(tuán)菌等中的特異性DNA片段。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法3．基因芯片技術(shù)

基因芯片技術(shù)是近年來在生命科學(xué)領(lǐng)域中迅速發(fā)展起來的一項(xiàng)高新技術(shù)，是建立在基因探針和雜交測(cè)序技術(shù)上的一種高效快速的核酸序列分析手段。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法二、血清學(xué)診斷用已知的細(xì)菌或其特異性抗原檢測(cè)患者血清或其他體液中的抗體及其效價(jià)的變化，可以作為感染性疾病的輔助診斷。由于多采取患者血清檢測(cè)抗體，故常稱為血清學(xué)診斷。血清學(xué)診斷主要適用于抗原性較強(qiáng)的致病菌，以及病程較長(zhǎng)的感染性疾病。也可用于調(diào)查人群對(duì)某病原菌的免疫應(yīng)答水平以及檢測(cè)疫苗接種后的預(yù)防效果。第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法二、血清學(xué)診斷機(jī)體血清中出現(xiàn)某種抗體，除患與該抗體相應(yīng)的疾病外，亦可因曾受該菌隱性感染或近期預(yù)防接種所致。因此必須有抗體效價(jià)明顯高于正常人的水平或隨病程遞增才有診斷價(jià)值。血清學(xué)診斷試驗(yàn)最好取患者急性期和恢復(fù)期雙份血清標(biāo)本，當(dāng)后者的抗體效價(jià)比前者升高≥4倍者方有意義。若患者在疾病早期即用抗菌藥物，病菌在體內(nèi)繁殖不多，抗體增長(zhǎng)可以不明顯。所以，細(xì)菌學(xué)檢查和血清學(xué)診斷兩者在細(xì)菌感染的確立方面是互為輔助的。

第一節(jié)

細(xì)菌感染的檢查方法二、血清學(xué)診斷常用于細(xì)菌性感染的血清學(xué)診斷種類有：直接凝集試驗(yàn)（傷寒、副傷寒的肥達(dá)試驗(yàn)，立克次體的外斐試驗(yàn)等，鉤端螺旋體病的顯微鏡凝集試驗(yàn)等）；乳膠凝集試驗(yàn)（檢測(cè)腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌等抗體）；沉淀試驗(yàn)（梅毒的VDRL、RPR試驗(yàn)等）；補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（檢測(cè)Q熱柯克斯體等抗體）；中和試驗(yàn)（風(fēng)濕病的抗O試驗(yàn)等）和ELISA等。第二節(jié)

細(xì)菌感染的防治原則一、細(xì)菌感染的特異性預(yù)防特異性預(yù)防是應(yīng)用獲得性免疫的原理，給機(jī)體注射或服用某種病原微生物（包括類毒素），或注射特異性抗體，以達(dá)到防治感染性疾病的目的，這種方法為人工免疫，根據(jù)其免疫產(chǎn)生的方式進(jìn)一步又分為人工主動(dòng)免疫和人工被動(dòng)免疫。用人工主動(dòng)免疫方法通常稱為預(yù)防接種或疫苗接種。第二節(jié)

細(xì)菌感染的防治原則（一）人工主動(dòng)免疫人工主動(dòng)免疫是將疫苗或類毒素接種于人體，刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，機(jī)體主動(dòng)產(chǎn)生獲得性免疫力的一種防治微生物感染的措施，主要用于特異性預(yù)防。1．疫苗2．類毒素第二節(jié)

細(xì)菌感染的防治原則1．疫苗

（1）死疫苗

死疫苗是選用免疫原性強(qiáng)的細(xì)菌，經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，用理化方法殺死而成。死疫苗易于保存，一般4℃可保存1年左右。但接種劑量大，需接種多次，注射的局部和全身性副反應(yīng)較大，且只產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答。第二節(jié)

細(xì)菌感染的防治原則（2）活疫苗

亦稱減毒活疫苗，是用減毒或無毒力的活病原體制成?；钜呙绲木昕梢詮淖匀唤绨l(fā)現(xiàn)，或通過人工培育篩選。減毒或無毒菌仍可在宿主體內(nèi)有一定的生長(zhǎng)和繁殖，猶如輕型或隱性感染，一般只需接種一次，劑量較小，副反應(yīng)輕微或無，且免疫效果優(yōu)于死疫苗，免疫較持久，能同時(shí)產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫；活疫苗若以自然感染途徑接種，尚有sIgA抗體的局部黏膜免疫形成?；钜呙绲娜秉c(diǎn)是需冷藏保存，保存期短。第二節(jié)

細(xì)菌感染的防治原則（3）亞單位疫苗

根據(jù)細(xì)菌抗原分析，查明不同致病菌的主要保護(hù)性免疫原存在的組分，然后將之制成的疫苗稱為亞單位疫苗，如肺炎鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌等的莢膜多糖疫苗。第二節(jié)

細(xì)菌感染的防治原則（4）基因工程疫苗

利用基因工程技術(shù)把編碼病原體保護(hù)性抗原表位的目的基因，導(dǎo)入原核或真核表達(dá)系統(tǒng)后，用表達(dá)的保護(hù)性抗原所制成疫苗。實(shí)際上也是一種亞單位疫苗。例如帶有宋內(nèi)志賀菌表面抗原質(zhì)粒的傷害沙門菌Ty21a重組疫苗等。優(yōu)點(diǎn)是安全、經(jīng)濟(jì)、可批量生產(chǎn)，但技術(shù)要求高，對(duì)表達(dá)的保護(hù)性抗原蛋白質(zhì)的回收和純化較困難。第二節(jié)

細(xì)菌感染的防治原則（5）核酸疫苗

也稱DNA疫苗。是將能編碼引起保護(hù)性免疫應(yīng)答的病原體基因片段和可以在真核細(xì)胞表達(dá)的質(zhì)粒重組，直接注射人宿主體內(nèi)以表達(dá)目的免疫原，進(jìn)而誘導(dǎo)出保護(hù)性體液和細(xì)胞免疫的新型疫苗。目前，對(duì)核酸疫苗的保護(hù)效果、作用機(jī)制以及安全性等問題正在繼續(xù)研究之中。第二節(jié)

細(xì)菌感染的防治原則2．類毒素

細(xì)菌外毒素經(jīng)0.3%～0.4%甲醛液作用3～4周后可制成類毒素，其毒性消失但仍保持免疫原性。第二節(jié)

細(xì)菌感染的防治原則（二）人工被動(dòng)免疫人工被動(dòng)免疫是注射含有特異性抗體的免疫血清、純化免疫球蛋白抗體或細(xì)胞因子等免疫制劑，使機(jī)體立即獲得特異性免疫力的過程，可用于某些急性傳染病的緊急預(yù)防和治療。但因這些免疫物質(zhì)不是患者自體產(chǎn)生，故維持時(shí)間短。第二節(jié)

細(xì)菌感染的防治原則1．抗毒素

將類毒素或外毒素給馬進(jìn)行多次免疫后，待馬匹產(chǎn)生高效價(jià)抗毒素后采血，分離血清，提取其免疫球蛋白精制成抗毒素制劑。抗毒素能中和相應(yīng)外毒素，主要用于外毒素所致疾病的治療和應(yīng)急預(yù)防。臨床常用的有破傷風(fēng)、白喉精制抗毒素、肉毒抗毒素以及氣性壞疽多價(jià)抗毒素等。使用這種異種抗毒素時(shí)應(yīng)注意I型超敏反應(yīng)問題。第二節(jié)

細(xì)菌感染的防治原則2．血清丙種球蛋白

血清丙種球蛋白是從正常人血漿中提取的丙種球蛋白制劑。