2024-2025學(xué)年講義生物（選擇性人教版2019）第3章第2節(jié)第2課時(shí)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的檢測(cè)與鑒定

[學(xué)習(xí)目標(biāo)]1.闡明將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法。2.闡明目的基因的檢測(cè)與鑒定的方法。1．將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞(1)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞①花粉管通道法a．用微量注射器將含目的基因的DNA溶液直接注入子房中。b．在植物受粉后的一定時(shí)間內(nèi)，剪去柱頭，將DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入胚囊。②農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法a．轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。b．農(nóng)桿菌的特點(diǎn)：農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)含有Ti質(zhì)粒，當(dāng)它侵染植物細(xì)胞后，能將Ti質(zhì)粒上的T－DNA(可轉(zhuǎn)移的DNA)轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞內(nèi)，并且將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上。c．目的基因插入Ti質(zhì)粒的T－DNA中→導(dǎo)入植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上→表現(xiàn)出新性狀的植株。(2)將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞①方法：顯微注射技術(shù)。②受體細(xì)胞：受精卵。③過程：目的基因表達(dá)載體提純→取卵(受精卵)→顯微注射→受精卵發(fā)育→獲得具有新性狀的動(dòng)物。(3)將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞常以大腸桿菌作為受體細(xì)胞，一般先用Ca2＋處理大腸桿菌細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，然后再將重組的基因表達(dá)載體導(dǎo)入其中。2．目的基因的檢測(cè)與鑒定(1)分子水平的檢測(cè)①導(dǎo)入水平：通過PCR等技術(shù)檢測(cè)受體細(xì)胞的染色體DNA上是否插入了目的基因。②轉(zhuǎn)錄水平：利用PCR等技術(shù)檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA。③翻譯水平：用相應(yīng)抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)等。(2)個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定：抗蟲、抗病接種實(shí)驗(yàn)等。3．基因工程的基本操作程序判斷正誤(1)為培育抗除草劑的作物新品種，導(dǎo)入抗除草劑基因時(shí)只能以受精卵為受體細(xì)胞()(2)Ti質(zhì)粒上的T－DNA可轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞內(nèi)，并且與其染色體DNA整合在一起()(3)常用卵細(xì)胞作為培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的受體細(xì)胞()(4)檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)可用抗原—抗體雜交技術(shù)()(5)用PCR技術(shù)檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，利用了堿基互補(bǔ)配對(duì)原則()(6)基因工程是否成功需進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定()答案(1)×(2)√(3)×(4)√(5)√(6)√解析(1)為培育抗除草劑的作物新品種，受體細(xì)胞可以是受精卵，也可以是體細(xì)胞。(3)常用受精卵作為培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的受體細(xì)胞。任務(wù)：分析將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞和目的基因的檢測(cè)與鑒定1．在用土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的過程中，一定要將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T－DNA上的原因是什么？提示原因是農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T－DNA(可轉(zhuǎn)移的DNA)可轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞，并且將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上。2．基因表達(dá)載體中已經(jīng)具備標(biāo)記基因(如抗生素抗性基因)，對(duì)受體細(xì)胞進(jìn)行了篩選，為什么基因工程的第四步還要對(duì)目的基因進(jìn)行檢測(cè)和鑒定？提示在含抗生素的選擇培養(yǎng)基上能生長的是導(dǎo)入了載體的細(xì)胞，這里的載體可能是基因表達(dá)載體，也可能是未插入目的基因的空載體。因此第四步需要對(duì)目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行進(jìn)一步的檢測(cè)。此外，即便在選擇培養(yǎng)基上能生長的細(xì)胞中導(dǎo)入的是基因表達(dá)載體，但是仍然不知道目的基因插入的位置、方向等是否正確，能否正確表達(dá)，因此也需要在轉(zhuǎn)錄和翻譯以及個(gè)體水平上進(jìn)行檢測(cè)和鑒定。3．如果目的基因是抗蟲基因，在個(gè)體水平上怎么檢測(cè)？如果目的基因是耐鹽基因呢？提示如果目的基因是抗蟲基因，則要進(jìn)行抗蟲接種實(shí)驗(yàn)。如果目的基因是耐鹽基因，則要用一定濃度的鹽水澆灌。1．農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中兩次拼接、兩次導(dǎo)入的辨析(1)兩次拼接：第一次拼接是將目的基因拼接到Ti質(zhì)粒的T－DNA上；第二次拼接(非人工操作)指被插入目的基因的T－DNA拼接到受體細(xì)胞染色體的DNA上。(2)兩次導(dǎo)入：第一次導(dǎo)入是將含目的基因的重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌；第二次導(dǎo)入(非人工操作)是將含目的基因的T－DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞。2．受體細(xì)胞的選擇(1)對(duì)于植物來說，受體細(xì)胞可以是受精卵或體細(xì)胞，因?yàn)橹参锛?xì)胞具有全能性。(2)對(duì)于動(dòng)物來說，受體細(xì)胞一般是受精卵，因?yàn)槭芫训娜苄愿撸叨确只膭?dòng)物體細(xì)胞的全能性受到抑制。(3)大腸桿菌和酵母菌在基因工程中都可以作為受體細(xì)胞，但又有所不同。大腸桿菌為原核細(xì)胞，而酵母菌為真核細(xì)胞(具有多種細(xì)胞器)，所以在生產(chǎn)需要加工和分泌的蛋白質(zhì)時(shí)，酵母菌比大腸桿菌有優(yōu)勢(shì)。A．圖中Ⅰ是質(zhì)粒，步驟①需要用到限制酶和DNA連接酶B．圖中Ⅱ是含目的基因的重組質(zhì)粒，步驟②是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入棉花細(xì)胞C．圖中Ⅲ是農(nóng)桿菌，通過步驟③將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞D．剔除培育成功的抗蟲棉體內(nèi)的四環(huán)素抗性基因不會(huì)影響抗蟲基因的表達(dá)答案B解析題圖中Ⅰ為質(zhì)粒，步驟①為基因表達(dá)載體的構(gòu)建，需要用到限制酶和DNA連接酶，A正確；題圖中步驟②是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌細(xì)胞，B錯(cuò)誤；基因的表達(dá)具有一定的獨(dú)立性，剔除培育成功的抗蟲棉體內(nèi)的四環(huán)素抗性基因不影響抗蟲基因的表達(dá)，D正確。2．(2023·陜西西安高二調(diào)研)科學(xué)家將蘇云金桿菌中的Bt抗蟲蛋白基因(抗蟲基因)導(dǎo)入棉花的愈傷組織細(xì)胞并進(jìn)行組織培養(yǎng)獲得棉花植株。經(jīng)棉鈴蟲飼喂實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)棉花植株并無抗蟲性狀，科學(xué)家提取棉花葉片細(xì)胞中的有關(guān)成分進(jìn)行了如下操作。下列有關(guān)分析錯(cuò)誤的是()A．提取細(xì)胞中的蛋白質(zhì)，采用抗原—抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，若檢測(cè)到細(xì)胞中無Bt抗蟲蛋白，則說明抗蟲基因不能表達(dá)B．若經(jīng)A檢測(cè)確定細(xì)胞中無Bt抗蟲蛋白，可采用PCR等技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中的RNA，若測(cè)到Bt抗蟲蛋白的mRNA，則說明抗蟲基因能正常轉(zhuǎn)錄和翻譯C．若經(jīng)B檢測(cè)確定細(xì)胞中無Bt抗蟲蛋白的mRNA，可采用PCR等技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中的DNA，若能檢測(cè)到抗蟲基因，則可能是抗蟲基因反向插入載體中或抗蟲基因不能正常轉(zhuǎn)錄D．若經(jīng)C檢測(cè)確定細(xì)胞中無抗蟲基因，則可能是將沒有目的基因的載體DNA分子導(dǎo)入了受體細(xì)胞答案B解析若經(jīng)A檢測(cè)確定細(xì)胞中無Bt抗蟲蛋白，可采用PCR等技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中的RNA，若能檢測(cè)到Bt抗蟲蛋白的mRNA，則可能是抗蟲基因能轉(zhuǎn)錄，但不能正常翻譯出蛋白質(zhì)，B錯(cuò)誤。題組一將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1．我國科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)的花粉管通道法，可以使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞，是一種十分簡便經(jīng)濟(jì)的方法，對(duì)此認(rèn)識(shí)正確的是()A．不必構(gòu)建表達(dá)載體就可以直接導(dǎo)入B．此方法可用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物C．受體細(xì)胞只能是植物的卵細(xì)胞D．有時(shí)可以取代農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法答案D解析要讓目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后能穩(wěn)定存在并得到復(fù)制和表達(dá)，不管采用什么導(dǎo)入方法，都需要構(gòu)建表達(dá)載體才能實(shí)現(xiàn)，A錯(cuò)誤；花粉管通道法只適用于轉(zhuǎn)基因植物的培育，B錯(cuò)誤；采用花粉管通道法時(shí)，植物受體細(xì)胞一般是植物體細(xì)胞或受精卵，通常不選卵細(xì)胞，C錯(cuò)誤。2．(2023·福建南平高二檢測(cè))下列關(guān)于將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的敘述，錯(cuò)誤的是()A．用一定濃度的CaCl2溶液處理大腸桿菌，以改變大腸桿菌細(xì)胞的生理狀態(tài)B．將目的基因轉(zhuǎn)入微生物細(xì)胞常用顯微注射法C．對(duì)于動(dòng)物來說，受體細(xì)胞一般是受精卵D．通過基因工程大量獲得胰島素時(shí)，受體細(xì)胞選擇酵母菌比大腸桿菌更有優(yōu)勢(shì)答案B解析將目的基因轉(zhuǎn)入動(dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法，將目的基因轉(zhuǎn)入微生物細(xì)胞常用Ca2＋處理法，B錯(cuò)誤。題組二目的基因的檢測(cè)與鑒定3．(2023·吉林白城高二期末)利用外源基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，可生產(chǎn)人類所需要的產(chǎn)品。下列各項(xiàng)中能說明目的基因在受體細(xì)胞中完成了表達(dá)的是()A．從酵母菌細(xì)胞中提取到人干擾素蛋白B．山羊乳腺細(xì)胞中檢測(cè)到人生長激素DNA序列C．大腸桿菌中檢測(cè)到人胰島素基因及其mRNAD．棉花二倍體細(xì)胞中檢測(cè)到細(xì)菌的抗蟲基因答案A解析基因表達(dá)的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，因此，只有在受體細(xì)胞中檢測(cè)或提取到了相應(yīng)蛋白質(zhì)才能證明目的基因在受體細(xì)胞中完成了表達(dá)，B、D項(xiàng)只能說明完成了目的基因的導(dǎo)入，C項(xiàng)只能說明完成了目的基因的導(dǎo)入和目的基因的轉(zhuǎn)錄過程。4．目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，需要檢測(cè)目的基因是否可以維持穩(wěn)定和表達(dá)其遺傳特性。下列關(guān)于目的基因的檢測(cè)和鑒定的敘述，正確的是()A．目的基因能否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是能否轉(zhuǎn)錄出mRNAB．可采用PCR檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄和翻譯C．可從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)來檢測(cè)目的基因是否翻譯成相應(yīng)蛋白質(zhì)D．抗蟲、抗病檢驗(yàn)用于確定轉(zhuǎn)基因生物是否具備相關(guān)性狀屬于分子水平的檢測(cè)答案C解析目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，首先要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物(染色體)DNA上是否插入了目的基因，這是目的基因能否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵，A錯(cuò)誤；PCR可用于檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄，檢測(cè)目的基因是否翻譯用抗原—抗體雜交技術(shù)，B錯(cuò)誤；抗蟲、抗病檢驗(yàn)用于確定轉(zhuǎn)基因生物是否具備相關(guān)性狀屬于個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定，D錯(cuò)誤。題組三基因工程基本操作程序5．下列敘述不正確的是()A．啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)B．在基因工程的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的是將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞C．細(xì)菌常常用作基因工程的受體細(xì)胞，主要原因是繁殖速度快D．某醫(yī)學(xué)遺傳研究所成功培育出第一頭攜帶人白蛋白基因的轉(zhuǎn)基因牛，可以想象這頭牛發(fā)生了基因突變答案D解析某醫(yī)學(xué)遺傳研究所成功培育出第一頭攜帶人白蛋白基因的轉(zhuǎn)基因牛，這頭牛發(fā)生了基因重組，D錯(cuò)誤。6．科學(xué)家將人的生長激素基因與某種細(xì)菌(不含抗生素抗性基因)的DNA分子進(jìn)行重組，并成功地在該細(xì)菌中得以表達(dá)(如圖)。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A．過程①合成人生長激素基因的過程需要用到逆轉(zhuǎn)錄酶B．過程③是將重組質(zhì)粒溶于緩沖液后與經(jīng)Ca2＋處理的細(xì)菌B混合C．成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的細(xì)菌B在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上不能生長D．可采用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測(cè)工程菌中生長激素基因是否成功表達(dá)答案C解析成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的細(xì)菌B，因目的基因插入質(zhì)粒后，破壞了四環(huán)素抗性基因，所以在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上不能生長，C錯(cuò)誤。7．科學(xué)家通過改變一種名為NR2B的基因研制出了轉(zhuǎn)基因超級(jí)小鼠Hobbie－J，Hobbie－J比普通老鼠更加聰明，大腦運(yùn)轉(zhuǎn)更加迅速，它能夠輕松完成迷宮任務(wù)。下列關(guān)于Hobbie－J產(chǎn)生過程的描述，錯(cuò)誤的是()A．NR2B基因可通過PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增B．改變后的NR2B基因作為目的基因，可直接注入小鼠受精卵內(nèi)C．通常采用顯微注射技術(shù)將改變后的NR2B基因重組質(zhì)粒導(dǎo)入小鼠受精卵內(nèi)D．可采用PCR等技術(shù)檢測(cè)改變后的NR2B基因是否插入到小鼠染色體DNA答案B解析8．下列敘述正確的是()A．欲培育出在肝細(xì)胞特異性表達(dá)目的基因的轉(zhuǎn)基因小鼠，需將基因表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠肝細(xì)胞B．PCR擴(kuò)增目的基因需設(shè)計(jì)特異性的引物C．構(gòu)建表達(dá)載體需要限制酶和RNA聚合酶D．通過PCR檢測(cè)目的基因是否完成表達(dá)答案B解析將基因表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠受精卵以獲得轉(zhuǎn)基因小鼠，A錯(cuò)誤；構(gòu)建表達(dá)載體需要限制酶和DNA連接酶，C錯(cuò)誤；檢測(cè)目的基因是否完成表達(dá)常用抗原—抗體雜交技術(shù)，D錯(cuò)誤。9．(2023·江蘇淮安高二質(zhì)檢)α1-抗胰蛋白酶缺乏癥是北美常見的一種單基因遺傳病，患者成年后會(huì)出現(xiàn)肺氣腫及其他疾病，嚴(yán)重者甚至死亡。利用基因工程技術(shù)將控制該酶合成的基因?qū)胙虻氖芫眩罱K培育出能在乳腺細(xì)胞表達(dá)人α1-抗胰蛋白酶的轉(zhuǎn)基因羊，從而更容易獲得這種酶。下列關(guān)于該過程的敘述中，錯(cuò)誤的是()A．載體上綠色熒光蛋白基因(GFP基因)的作用是便于篩選含有目的基因的受體細(xì)胞B．將目的基因?qū)胙蚴芫阎?，可以使用顯微注射法C．培養(yǎng)出的轉(zhuǎn)基因羊的所有細(xì)胞中都含有該目的基因，故該羊有性生殖產(chǎn)生的后代也都能產(chǎn)生α1-抗胰蛋白酶D．轉(zhuǎn)基因母羊乳腺細(xì)胞中α1-抗胰蛋白酶基因才會(huì)得以表達(dá)，因此可以從乳汁中提取α1-抗胰蛋白酶答案C解析轉(zhuǎn)基因羊有性生殖產(chǎn)生的后代發(fā)生性狀分離，產(chǎn)生的后代可能沒有目的基因，也就不能產(chǎn)生α1-抗胰蛋白酶，C錯(cuò)誤。10．研究人員用三種基因探針，通過分子雜交技術(shù)分別對(duì)某動(dòng)物三種細(xì)胞中的mRNA進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果(有無雜交帶)如表所示。下列說法正確的是()探針細(xì)胞輸卵管細(xì)胞未成熟紅細(xì)胞胰島B細(xì)胞卵清蛋白基因探針有無無β-珠蛋白基因探針無有無胰島素基因探針無無有A.不出現(xiàn)雜交帶表明相應(yīng)基因不表達(dá)B．三種探針中的核苷酸序列相同C．三種細(xì)胞中蛋白質(zhì)種類完全不同D．用上述探針分別檢測(cè)三種細(xì)胞的DNA，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不變答案A解析不出現(xiàn)雜交帶可說明相應(yīng)的基因沒有轉(zhuǎn)錄形成mRNA，即沒有表達(dá)，A正確；三種基因不同，因此三種探針的核苷酸序列也不相同，B錯(cuò)誤；由于基因的選擇性表達(dá)，三種細(xì)胞中蛋白質(zhì)種類不完全相同，C錯(cuò)誤；三種細(xì)胞來源于同一個(gè)受精卵的有絲分裂，含有的DNA相同，用題述探針分別檢測(cè)三種細(xì)胞的DNA，實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同，D錯(cuò)誤。11．(2023·山東煙臺(tái)高二期中)如圖是利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育新品種植物的部分操作程序，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A．過程①需使用不同的限制酶切割B．過程②需用T4DNA連接酶連接C．過程③需采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法介導(dǎo)D．過程④需采用選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選答案C解析過程②是目的基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，由題圖可知，該過程既要連接黏性末端又要連接平末端，因此該過程中需用T4DNA連接酶連接，B正確；過程③是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌的過程，該過程可以用鈣離子處理使農(nóng)桿菌處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，C錯(cuò)誤。12．番茄葉片受害蟲的損傷后，葉肉細(xì)胞迅速合成蛋白酶抑制劑，抑制害蟲的消化作用。人們嘗試將番茄的蛋白酶抑制劑基因?qū)胗衩?，以?duì)付猖獗的玉米螟。如圖為培育轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米的流程圖，下列有關(guān)敘述正確的是()A．用限制性內(nèi)切核酸酶切割番茄的DNA得到的產(chǎn)物就是蛋白酶抑制劑基因B．用Ca2＋處理玉米受體細(xì)胞，有利于含目的基因的重組質(zhì)粒導(dǎo)入C．重組Ti質(zhì)粒應(yīng)有RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，以啟動(dòng)蛋白酶抑制劑基因的轉(zhuǎn)錄D．若將目的基因?qū)胗衩谆ǚ奂?xì)胞，通過花藥離體培養(yǎng)可獲得穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)基因玉米答案C解析目的基因是用限制性內(nèi)切核酸酶將DNA酶切后得到的，需篩選，A錯(cuò)誤；Ca2＋用于處理細(xì)菌細(xì)胞，B錯(cuò)誤；基因成功表達(dá)的前提是能轉(zhuǎn)錄和翻譯，轉(zhuǎn)錄時(shí)需RNA聚合酶識(shí)別轉(zhuǎn)錄的起點(diǎn)才能啟動(dòng)，C正確；花藥離體培養(yǎng)得到的是玉米的單倍體，需再用秋水仙素處理單倍體，使染色體數(shù)目加倍才能得到穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)基因玉米，D錯(cuò)誤。13．(2023·河北承德高二期末)科學(xué)家通過基因工程技術(shù)，將蘇云金桿菌的Bt抗蟲蛋白基因轉(zhuǎn)入到普通棉株細(xì)胞內(nèi)，并成功實(shí)現(xiàn)了表達(dá)，從而培育出了能抗棉鈴蟲的棉花植株——抗蟲棉。其大致過程如圖所示，分析回答下列問題：(1)用Ti質(zhì)粒作為載體，是因?yàn)門i質(zhì)粒上有____________，它能將Bt抗蟲蛋白基因整合到棉花細(xì)胞的____________________上。(2)將Bt抗蟲蛋白基因?qū)朊藁?xì)胞內(nèi)采用的方法是____________________。將基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌，首先必須用________處理農(nóng)桿菌。(3)檢測(cè)Bt抗蟲蛋白基因在抗蟲棉中是否成功表達(dá)，在分子水平上的檢測(cè)方法是___________；要確定抗蟲棉是否具有抗蟲特性，還需要進(jìn)行____________水平的鑒定。答案(1)T－DNA染色體DNA(2)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法Ca2＋(3)抗原—抗體雜交技術(shù)個(gè)體生物學(xué)14．大腸桿菌pUC18質(zhì)粒是基因工程中常用的載體。某限制酶在此質(zhì)粒上的唯一酶切位點(diǎn)位于LacZ基因中，如果沒有插入外源基因，LacZ基因便可表達(dá)出β-半乳糖苷酶。當(dāng)培養(yǎng)基中含有IPTG和X－gal時(shí)，X－gal便會(huì)被β-半乳糖苷酶水解成藍(lán)色，大腸桿菌將形成藍(lán)色菌落。反之，則形成白色菌落。如圖表示利用此質(zhì)粒實(shí)施基因工程的主要流程。請(qǐng)分析并回答下列問題：(1)對(duì)已獲得的目的基因可利用__________技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。(2)目的基因插入質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程中，需要用DNA連接酶恢復(fù)____________鍵。(3)將試管Ⅰ中的物質(zhì)和大腸桿菌共同置于試管Ⅱ的目的是________________；大腸桿菌需事先用Ca2＋進(jìn)行處理，目的是______________________________________________