油菜黑脛病抗性鑒定技術規(guī)程_第1頁
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1油菜黑脛病室內抗性鑒定技術規(guī)程本文件規(guī)定了油菜黑脛病抗性鑒定技術中孢子懸浮液制備、接種方法、病情調查及抗病性評價和鑒定的方法。本文件適用于油菜生產品種、新育成品種、區(qū)域試驗品種、親本及中間材料的黑脛病抗性鑒定和抗性評價。2規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1油菜黑脛病phomastemcanker小球腔菌屬（Leptosphaeriabiglobosa）侵染引起的油菜病害。Leptosphaeriabiglobosa侵染葉片后，形成具有黃色外緣的典型病斑，病斑內含有較少的分生孢子器，且分生孢子較黑、較少。侵染后期，在莖上部形成病斑。4病原物4.1病原物來源病原菌從內蒙古呼倫貝爾油菜地中采集的發(fā)病植株上分離獲得，結合形態(tài)學和分子水平鑒定為Leptosphaeriabiglobosa。致病力為中等水平。4.2病原物的培養(yǎng)將保存的黑脛病菌菌絲體接種在PDA平板上，置于25℃培養(yǎng)箱中活化培養(yǎng)。5孢子懸浮液的制備將3-5mL無菌水加在已產孢的L．biglobosa平板內，靜置10min，用無菌載玻片輕刮平板表面，使孢子充分釋放并懸浮于無菌水中，2層無菌紗布過濾獲孢子懸浮液，血球計數板計數并稀釋到接種所需濃度1×107個/mL。26抗病性鑒定6.1子葉穿刺接種油菜子葉期，用無菌針在子葉中央輕刺一下，傷口處接種10uL1×107個/mL黑脛病菌孢子懸浮液，同時以接種等量無菌水為對照。接種后，套上內部濕潤的塑料袋，21℃下黑暗保濕培養(yǎng)48h以6.2病情調查接種7-14d后，根據油菜黑脛病子葉接種鑒定病情分級標準（表1）對接種葉片進行調查。表1油菜黑脛病子葉接種鑒定病情分級標準[1,2]病級癥狀0接種點周圍無癥狀可見1接種點周圍呈輕微黑色，有黃色暈圈3接種點周圍出現(xiàn)1.5-3.0mm壞死斑，或有黃色暈圈，有的產生孢子5接種點周圍出現(xiàn)3.0-6.0mm壞死斑，有的壞死組織有明顯的邊緣7組織灰綠色萎蔫，3.0-6.0mm壞死斑，有明顯的邊緣，有的形成分生孢子器9病斑腐爛，葉片枯死，上面有大量的分生孢子器6.3品種抗性水平劃分根據表2進行油菜抗黑脛病等級劃分。表2油菜黑脛病抗性分級標準[3]抗病性病情指數抗病性病情指數高抗(HR)DI=0低感(LS)40＜DI≤60中抗(

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